E2F3和AR在前列腺癌组织中的表达及意义

目的:检测E2F3、AR在前列腺组织中的表达水平,分析两者的表达与前列腺癌病理分级和临床分期的关系.方法:利用免疫组织化学方法检测50例前列腺癌组织、50例良性前列腺增生组织中E2F3、AR蛋白的表达;采用SPSS 13.0进行统计学处理.结果:E2F3在良性前列腺增生组织、前列腺癌组织中的阳性表达率分别为20.00％( 10/50)及66.00％(33/50),差异有统计学意义(P＜0.05),且在前列腺癌组织中的表达与肿瘤临床分期和病理恶性程度呈正相关(rs分别为0.471和0.329,P＜0.05).前列腺癌组织中AR表达水平低于良性前列腺增生组织(P＜0.05),且在前列腺癌组织中的表达与肿瘤临床分期和病理恶性程度呈负相关(rs分别为-0.403和-0.391,均P＜0.01).E2F3在前列腺癌组织中的表达与AR在前列腺癌组织中的表达无相关关系(rs=-0.017,P＞0.05).结论:E2F3在前列腺癌的发生、发展中起着重要作用.     

E2F3基因沉默载体pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo的构建及表达

【目的】构建针对E2F3基因的shRNA表达载体,通过脂质体进行膀胱癌细胞内转染,监测转染效率。【方法】通过软件设计针对E2F3基因的寡核苷酸链,化学合成一对编码短发夹RNA序列,长度为64个碱基。核苷酸链经退火,克隆到经BamHI、HindⅢ双酶切的pRNAT-U6.1/Neo载体上,构建针对E2F3基因的RNA干扰质粒。通过双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建效果。通过不同浓度的Lipofectamin 2000及干扰质粒混合物进行膀胱癌细胞系5637细胞转染,通过绿色荧光的表达程度摸索出细胞最佳转染浓度及转染时间。【结果】重组构建的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo载体经PCR分析及插入基因片段序列分析,结果表明64个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。Lipofectamin 2000能够有效的进行pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo质粒的转染。【结论】载体的成功构建及膀胱癌细胞系的高效转染,为进一步研究E2F3基因在膀胱肿瘤中的功能奠定基础。     

E2F3 及C-myc 在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其相关性研究*

目的:探讨E2F3 及C-myc 在膀胱癌组织中表达的相互关系及其与膀胱癌恶性生物学行为之间的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测不同病理分期及组织分级的BTCC标本和正常膀胱黏膜中E2F3 及C-myc 蛋白的表达情况,应用免疫组化自动分析系统进行分析,结果以积分光密度表示。结果:膀胱移行细胞癌组织中E2F3 及C-myc 蛋白的表达阳性率明显高于正常膀胱黏膜,两组间有显著性差异（P<0.05）,同时E2F3 的表达率与膀胱癌的分级和分期密切相关（P<0.05;P<0.01）;C-myc 的表达率与膀胱癌的分级和分期密切相关（P<0.01;P<0.01）。 膀胱移行细胞癌中E2F3 与C-myc 的表达呈正相关。结论:E2F3 及C-myc 与膀胱癌的恶性程度密切相关,同时二者之间的表达密切相关,二者不仅可以作为膀胱癌的诊断与预后指标,而且为以E2F3 为靶点的膀胱癌的基因治疗提供理论依据。      

膀胱尿路上皮癌细胞株E2F3基因与miR-17-5p和miR-20a的相互作用

目的 研究E2F3基因、miR-17-5p和miR-20a在膀胱尿路上皮癌细胞株中的表达及相互影响,探讨E2 F3基因与miR-17-5p和miR-20a在膀胱癌发生中的作用. 方法 用pcDNA3.1-HA-E2F3和pAAV-siRNA-E2F3质粒在膀胱癌细胞株5637中分别过表达和敲低E2F3基因,用miR-17-5p和miR-20a的模拟物和反义寡核苷分别过表达和敲低miR-17-5p和miR-20a后,实时荧光定量PCR法检测miR-17-5 p、miR-20a和E2F3基因的变化,蛋白质印迹法检测E2F3蛋白水平的变化.结果 E2F3基因过表达后,miR-17-5p和miR-20a的2-△ △Ct值分别为2.26±0.30和4.04 ±0.51,与对照组(1.00±0.00)比较差异有统计学意义(P＜0.05);敲低E2F3后,miR-17-5p和miR-20a的2-△△Ct值分别为0.49±0.02和0.65 ±0.04,与对照组(1.00±0.00)比较差异有统计学意义(P＜0.05);同时过表达miR-17-5p和miR-20a,E2F3的mRNA水平明显下调,蛋白质平均灰度值为55.31 ±7.89,对照组为103.67±13.61,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);同时敲低miR-17-5p和miR-20a后,E2 F3的mRNA比对照显著上调,蛋白质平均灰度值为295.68±19.25,与对照组平均灰度值为103.67±13.6l比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 E2F3基因可上调miR-17-5p和miR-20a的表达,miR-17-5p和miR-20a可以下调E2F3基因的表达.E2F3基因、miR-17-5p和miR-20a在膀胱尿路上皮癌中形成调节环路,协调膀胱肿瘤细胞的生长.     

以鼻转移为首发症状的肾透明细胞癌一例报告

患者,男,68岁.左侧鼻腔间堵塞、脓涕1年并反复出血2个月于2008年8月入外院.CT检查示左侧鼻腔软组织密度影,鼻窦未见异常.行左侧鼻腔肿物切除术,术后恢复顺利.病理诊断:肾透明细胞癌转移.超声检查发现左肾中极内侧接近肾门处7.1 cm×5.6 cm×5.2 cm低回声肿物,内部回声不均匀,可见强回声光点,周边可见环绕血管.转我院泌尿外科,全麻下行根治性左肾切除术,术后恢复顺利.     

CCNE1、RIP2基因多态性与膀胱癌发病风险的关系

目的 细胞周期蛋白 E1 （CCNE1） 基因和受体相互作用蛋白 2 （RIP2） 基因区域分别存在多态性位点 rs8102137 和 rs42490, 探讨这 2 种多态性与膀胱癌的发病风险及膀胱癌的病理分级和分期之间的关系。方法 收集膀胱癌患者 （膀胱癌组） 176 例及非肿瘤体检患者 （对照组） 210 例血样本并提取 DNA, 聚合酶链反应 （PCR） 测序方法检测 CCNE1 （rs8102137） 和 RIP2 （rs42490） 的多态性。根据术后病理结果确定膀胱癌患者的分级及分期。分析膀胱癌组和对照组中等位基因和基因型的分布差异。对 2 组间基因型的分布情况进行比较, 分析 CCNE1 （rs8102137） 和 RIP2 （rs42490） 各基因型与膀胱癌患者的临床资料间的关系, 及与膀胱癌遗传易感性的关系。结果 对照组样本的基因型分布具有良好的群体代表性。CCNE1 （rs8102137） 突变型 （C/T+C/C） 在膀胱癌组中频率 （40.91%） 高于对照组（30.95%, OR=1.54, 95%CI： 1.02～2.45, P＜0.05）。RIP2 （rs42490） 突变型 （A/G+G/G） 在膀胱癌组频率 （72.73%） 高于对照组 （62.38%, OR=1.61, 95%CI： 1.04～2.48, P＜0.05）。不同膀胱癌病理分级、 分期患者的 CCNE1 （rs8102137） 和 RIP2 （rs42490） 基因多态性差异无统计学意义。结论 CCNE1 （rs8102137）、 RIP2 （rs42490） 基因型与膀胱癌易感性关系密切, 携带突变型等位基因的个体患膀胱癌的风险显著高于野生型个体。     

成人肾母细胞瘤的诊断及治疗（附8例报告）

目的探讨成人肾母细胞瘤的诊断和治疗方法。方法,对8例成人肾母细胞瘤患者的临床表现、分期、治疗及预后作回顾性分析。结果本组表现为单纯肉眼血尿1例、腰腹痛5例（伴血尿1例）、无症状2例,术前拟诊肾肿瘤5例、肾盂肿瘤2例、输尿管肿瘤2例。均于术后病理检查确诊为肾母细胞瘤。按照美国国家肾母细胞瘤研究组（NWTS）分期标准,本组8例分别为I期2例、Ⅱ期2例、Ⅲ期3例、Ⅳ期1例。8例均行手术治疗,术后辅以放疗和化疗。7例随访1—15a,3例存活。结论成人肾母细胞瘤是一种比较少见的恶性肿瘤,术前确诊困难。手术治疗、辅以放疗和化疗等可明显提高治愈率并改善其预后。     

E2F3基因腺相关病毒干扰载体的构建

目的:构建针对E2F3基因的腺相关病毒干扰穿梭质粒载体,为进一步包装能够表达干扰序列的病毒奠定基础.方法:通过已经合成的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo干扰质粒载体,进行限制性内切酶Mlu酶切,将干扰片段克隆入线性质粒pAAV-MCS中,构建具有表达沉默E2F3基因的RNA干扰穿梭质粒.通过BglⅡ及Mlu单酶切,BamH1和HandⅢ双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建是否成功.结果:pAAV-siE2F3线性化后,片段大小约6 300bp;以Mlu为两边酶切位点设计的引物对重组质粒进行PCR,可获得的产物大小1700bp;应用ITR专用引物进行重组质粒的PCR后证实本研究所构建的重组质粒ITR片段存在,大小约3500bp,上述指标均与预期设计结果相符.基因测序结果表明插入序列无基因突变,序列完整.结论:穿梭质粒载体的成功构建,为进一步包装能够表达针对E2F3基因干扰序列的腺相关病毒,进一步研究E2F3基因在肿瘤中的功能奠定基础.     

输尿管口囊肿微创治疗及文献复习(附31例报告)

目的 总结经输尿管口囊肿腔内手术治疗的经验.方法 31例患者术前由B超、静脉尿路造影(IVU)或膀胧镜确诊.均行经尿道输尿管口囊肿内切开或开窗术.结果 31例手术1次成功,临床症状消失或改善.结石排出,肾脏积水减轻.25例术后随访半年～2年,未见输尿管口囊肿复发,无输尿管口狭窄,无尿液反流.结论 经尿道输尿管口囊肿的腔内手术疗效显著,减少了手术创伤及术后并发症,缩短了手术及住院时间,值得推荐.