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1.
PCR-ELISA检测弓形虫实验研究 总被引:8,自引:0,他引:8
目的建立快速、敏感、特异、稳定的PCR—ELISA方法,并用其检测感染动物体内的弓形虫。方法将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交,再通过酶免显色反应测出OD值。以判断弓形虫感染情况。测定该方法的敏感性、特异性及稳定性。再分别以10^4、10^3弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠。取全血、肝组织用PCR—ELISA检测小鼠感染情况。结果本实验中,PCR-ELISA方法的检测闻值为20fg弓形虫DNA,其灵敏度是电泳法的10倍,并且与人、小鼠、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。同一样本重复测试5次,结果经统计学检验,一致性良好(Alpha=0.72)。检测感染动物肝组织及全血标本,10^4、10^3组分别在感染后第二d、第三d即可测出阳性,两种标本的阳性检出效率无统计学差异(P〉0.05)。结论PCR—ELISA是一种快速、敏感、特异、稳定的检测方法,可试用于临床弓形虫病的诊断及流行病学调查。 相似文献
2.
目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhlL-2的生产及临床应用奠定基础。方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(c125)的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2,温度诱导表达.表达产物行SDS一聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及WesternBlot鉴定。结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16.5ku的外源蛋白产生。经Western印迹(WesternBlot)证明为rhlL-2。结论:成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统。表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。 相似文献
3.
目的:探讨血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及TNF-α基因多态性与2型糖尿病胰岛素抵抗的关系。方法:选取2型糖尿病肥胖患者50例,非肥胖患者50例,健康对照50例,应用酶联免疫法检测血清中TNF-α水平,并应用PCR-RFLP方法检测TNF-α-308启动子区基因多态性,所有数据以SPSS 10.0软件进行分析。结果:糖尿病肥胖组血清TNF-α水平较非肥胖组及对照组明显增高,在糖尿病组中TNF-α-308A等位基因携带者体质指数(BMI)及胰岛素抵抗均高于TNF-α-308G等位基因携带者。结论:TNF-α与BMI和胰岛素抵抗明显相关。携带TNF-α-308A等位基因者更易于发生胰岛素抵抗。 相似文献
4.
目的:研究网膜及皮下脂肪组织中Chemerin在自发性2型糖尿病OLETF大鼠中的基因表达水平,探讨Chemerin与肥胖、胰岛素抵抗及2型糖尿病发病关系的机制。方法:4周龄正常不出现糖尿病的LETO大鼠10只作为对照组,4周龄OLETF大鼠10只,2型糖尿病的OLETF大鼠9只,于42周时处死。取网膜及皮下脂肪组织,以实时荧光定量法检测网膜及皮下脂肪组织Chemerin基因的表达水平。皓果:模型组的网膜及皮下脂肪组织Chemerin的基因表达明显高于LETO对照组(P〈0.01);模型组大鼠网膜脂肪组织Chemerin的基因表达明显高于皮下脂肪组织(P〈0.01)。结论:脂肪因子Chemerin基因表达水平的变化是肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病发病的机制之一。 相似文献
5.
目的:探讨 rhPTH1~84、rhPTH37~84及 hPTH1~34对大鼠成骨细胞增殖的影响。方法分子生物学方法克隆表达 hPTH1~84、hPTH37~84重组蛋白。体外培养的大鼠成骨细胞给予不同浓度的 PTH 作用后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖。结果获得了浓度约为261.82 mg/L 的 rhPTH1~84和浓度为165.45 mg/L 的rhPTH37~84。10-10~10-7 mol/L 范围的 rhPTH1~84和 hPTH1~34促进大鼠成骨细胞的增殖;rhPTH37~84则抑制大鼠成骨细胞增殖。结论成功获得了高浓度高纯度的 rhPTH1~84及 rhPTH37~84。rhPTH37~84抑制细胞增殖,为进一步研究甲状旁腺激素及其羧基端肽段的功能奠定了基础。 相似文献
6.
目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF-Ⅰ)对破骨细胞骨吸收的促进作用是否需要成骨细胞的协同.方法 体外培养MC3T3小鼠成骨细胞及NF-κB受体的配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导分化成熟的破骨细胞,分别给予重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)进行干预,Western印迹检测IGF-Ⅰ受体的活化情况.以0、10 ng/ml的rhIGF-Ⅰ直接干预破骨细胞或与成骨细胞在Transwell双层培养板中共培养的破骨细胞,MTT法测定破骨细胞增殖;流式细胞仪检测破骨细胞凋亡率;实时PCR检测组织蛋白酶K基因的表达.将不同方式干预的破骨细胞接种在骨磨片上,光镜观察骨吸收陷窝的形成.结果 在成骨细胞、破骨细胞表面均检测到可被IGF-Ⅰ激活的IGF-Ⅰ受体.仅在成骨细胞、破骨细胞共培养时rhIGF-Ⅰ能够促进破骨细胞活细胞的增殖(P<0.05);抑制破骨细胞的凋亡(P<0.05);上调组织蛋白酶K基因的表达(P<0.05);增加骨吸收陷窝的数量及面积.IGF-Ⅰ对单独培养的破骨细胞则作用不明显.结论 IGF-Ⅰ对破骨细胞骨吸收的促进作用需要成骨细胞的协同. 相似文献
7.
目的测定人脐静脉内皮细胞可传代细胞株ECV304在不同间歇缺氧(IH)程度、频率、时段和恢复时段下核因子κB(NF-κB)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的变化。方法在自制细胞培养舱中程控产生预置的IH/ROX(再氧合)暴露环境,将ECV304细胞暴露于该环境共60次循环。暴露时按IH/ROX时段将细胞分为11组,每组样本数为12。A组:采用21%O215s/21%O2 3分钟45秒(即间歇正常氧)方案;B组:置于标准孵箱中不加暴露(标准孵育);C组:采用1.5%O2 15s/21%O2 3分钟45秒方案;D组:采用10%O2 15s/21%O2 3分钟45秒方案;以下固定IH方案为1.5%O2 15s和ROX程度21%O2不变,IH/ROX循环频率分别为12S/h(C组)、9S/h(E组)、6S/h(F组)、20S/h(G组)和40S/h(H组);I组:采用1.5%O2 30s/21%O23分钟45秒方案;C组完成暴露后放回标准孵箱中60min为J组,120min为K组。分别采用酶联免疫吸附(ELISA)法和细胞表面ELISA法测定细胞裂解液中总NF-κB水平和细胞表面ICAM-1浓度,并测定总蛋白含量。结果C组NF-κB和ICAM-1水平分别为(0.82±0.28)、(1562±56)pg/ml,A组分别为(0.37±0.07)、(768±80)pg/ml,两组比较差异有统计学意义(D值分别为225.00、176.04,P分别〈0.01、〈0.05);D组分别为(0.66±0.22)、(1113±76)pg/ml,与C组比较差异有统计学意义(U值分别为25.00、0.00,P均〈0.01);I组分别为(0.45±0.16)、(1155±19)pg/ml,与C组比较差异有统计学意义(U值分别为27.00、0.00,P均〈0.01);同时C组的NF-κB和ICAM-1水平在C、E、F、G和H这5个不同IH频率组的比较亦是相对最高的(X^2分别为35.63、56.89,P均〈0.01);J组NF-κB水平[(0.6233±0.0534)]与C组比较差异无统计学意义(D=36.00,P〉0.05),而K组NF-κB水平[(0.3050±0.0013)]与C组比较差异有统计学意义(D=234.00,P〈0.01)。结论IH/ROX可对内皮细胞造成程度依赖的炎性损伤且不易恢复,中度频率的IH/ROX将选择性激活细胞炎性通道。而过高频率和过长时段的IH反而激活细胞适应性通道。 相似文献
8.
OLETF大鼠脂肪组织chemerin及其受体1的基因表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用实时定量PCR检测OLETF大鼠脂肪组织中chemerin及其受体1 mRNA的表达,结果两者表达水平较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),且网膜脂肪组织高于皮下脂肪组织(P<0.05或P<0.01),说明脂肪因子chemerin及其受体1基因表达的变化可能是肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病发病的机制之一. 相似文献
9.
目的:探讨血清IL-6水平以及IL-6基因多态性与肥胖和胰岛素抵抗(IR)的关系。方法:选取肥胖2型糖尿病患者55例(肥胖组),非肥胖2型糖尿病患者49例(非肥胖组),健康对照50例(对照组),应用酶联免疫法检测血清中IL-6水平,并应用PCR-RFLP方法检测IL-6-174启动子区基因多态性。结果:肥胖组血清IL-6水平较非肥胖组及对照组明显增高.在糖尿病组中IL-6-174G等位基因携带者体质量指数(BMI)及IR均高于IL-6-174C等位基因携带者。结论:IL-6与BMI和IR有关,携带IL-6-174G等位基因者更易于发生IR。 相似文献