橄榄星小单孢菌发酵培养基及发酵条件的优化

本文对产福提霉素的橄揽星小单抱菌H3—25进行发酵培养基和发酵条件的优化,确定了发酵培养基的适宜配比为：可溶性淀粉4％。葡萄糖1％,酵母粉4％,硫酸镁0．1％．碳酸钙0．1％,氯化钴2μg·L^-1,甘氨酸0．1％;最佳发酵条件为：初始pH7．0,培养温度32℃,移种时间36h,移种量10％,摇瓶装量50mL／250mL,发酵周期8乩     

市售氯霉素滴眼液的抑菌效力评价

目的：评价市售氯霉素滴眼液的抑菌效力。方法：按照《中华人民共和国药典》2020年版四部通则1121抑菌效力检查法,选取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉为试验菌,对来自8家企业的氯霉素滴眼液进行评价。结果：添加0.02 mg·mL^-1醋酸苯汞的氯霉素滴眼液抑菌效力符合A标准。添加0.5 mg·mL^-1羟苯乙酯的氯霉素滴眼液抑菌效力符合B标准。添加0.03 mg·mL^-1苯扎溴铵或0.25～0.3 mg·mL^-1羟苯乙酯的氯霉素滴眼液,存在对细菌的抑菌效力达不到B标准的情况。结论：部分氯霉素滴眼液中抑菌剂种类或浓度不适宜,需进一步完善配方,以提高其安全性。     

黑暗链霉菌tobS1-C基因缺失突变株的构建

通过敲除妥布霉素生物合成基因tobS1-C,定向选育阿泊拉霉素高产菌株。PCR扩增tobS1-C基因上下游同源序列和红霉素抗性基因ermE,构建穿梭载体pSH6,利用接合转移法转化黑暗链霉菌Tt49,经同源重组,敲除tobS1-C两基因序列,共2484 bp,获得框内删除突变株黑暗链霉菌T103(△tobS1-C)。发酵验证表明突变株不再合成妥布霉素,只合成阿泊拉霉素。     

打靶载体pIJ792的构建

目的利用pIJ790,pIJ773和pUC19等基本质粒,构建金色链霉菌基因打靶筛选体系所需质粒pIJ792。方法以质粒pIJ790为摸板。将PCR扩增的cat基因片段插入到pMD19．T的多克隆位点,得重组质粒pFD31。EcoRⅠ和HindⅢ双酶切pIJ773．其小片段与pUC19烃同样双酶切后的片段酶连克隆,得新质粒pFD32。pFD31和pFD32再分别经SacⅠ酶切,将pFD31含cat的小片段和pFD32的大片段酶连克隆,筛选得重组质粒pFD33,EcoRⅠ与HindⅢ酶切,将切下的两个小片段与pIJ773经同样双酶切后的大片段进行酶连克隆,最终得筛选质粒pIJ792。结果新质粒pIJ792的抗氯霉素能力超过150μg·mL^-1。结论pIJ792可满足金色链霉菌基因打靶的筛选需要,实现了用于金色链霉菌PCR基因打靶所需筛选体系的构建。     

糖基转移酶基因sisZ在大肠杆菌中的克隆与表达

目的:从西索霉素产生菌中克隆出表达西索米星的糖基转移酶基因sisZ。方法:采用PCR法从伊纽小单孢菌(Micromonospora inyoensis)的染色体扩增参与西索霉素生物合成的糖基转移酶基因sisZ,然后先后装载到克隆载体pUC18和表达载体pET-30a上。结果和结论:成功从伊纽小单孢菌扩增出参与西索霉素生物合成的糖基转移酶基因sisZ。其开放阅读框长1176bp,编码含391个氨基酸(41690D)的多肽链,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中实现表达。基因sisZ的碱基序列与gntZ(M.echinospora)的碱基序列的同源性高达94%。预测的SisZ蛋白序列与GntZ的同源性为98%。     

小球藻的分离及生物量研究

对筛选出的小球藻的培养方式、培养基中C、N源及生长环境条件等对其生物量的影响进行了较为系统的研究.研究发现:异养培养是最佳的培养方式;碳源以葡萄糖为好,培养基中起始以添加10g·L-1葡萄糖比较适宜;硝酸钾和尿素混合作为氮源供小球藻生长,对小球藻的生长有显著的促进作用,最佳组合为0.6g·L-1KNO3和0.12g·L-1尿素;最适合C/N质量比值为34:1.     

MUTYH基因AluYb8插入变异与老年糖尿病患者左心室舒张功能减退的相关性分析

目的探讨MUTYH基因AluYb8插入变异与老年人左心室舒张功能减退的相关性。方法回顾性分析, 选取老年左心室舒张功能减退患者498例(疾病组)及非左心室舒张功能减退者155例(对照组), 采用聚合酶链反应鉴定MUTYH基因AluYb8插入缺失在样本中的分布情况, 高分辨彩色多普勒超声仪测量心功能。结果在疾病组, A/A、A/P、P/P 3种基因型频率分别为30.1%(150/498)、48.4%(241/498)、21.5%(107/498), 对照组3种基因型频率分别为27.7%(43/155)、54.8%(85/155)、17.5%(27/155), 两组基因型(χ2=2.162, P=0.339)及等位基因(χ2=1.342, P=0.794)频率分布差异均无统计学意义。进一步分层分析结果显示, 老年糖尿病患者左心室舒张功能减退者和对照组基因型频率(χ2=7.173, P=0.028)、等位基因频率(χ2=8.352, P=0.015)分布差异具有统计学意义。多因素Logistic回归分析结果显示, 老年糖尿病人群中, P等位基因携带者左心室舒张功能减退发病风险较未携带者高(O...     

盐酸莫西沙星氯化钠注射液无菌检查方法优化

目的 优化盐酸莫西沙星氯化钠注射液的无菌检查方法。方法 按照《中华人民共和国药典》2020年版无菌检查方法适用性试验相关要求，采用HPLC法测定混合纤维素(MCE)膜、尼龙(N66)膜和聚偏二氟乙烯(PVDF)膜过滤后膜上样品的残留量，确定样品吸附性小的滤膜；采用HPLC法测定4种不同冲洗液(0.1%无菌蛋白胨水溶液、pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液及含卵磷脂和聚山梨酯80组分的0.9%无菌氯化钠溶液)分别冲洗300 mL、500 mL后膜上样品的残留量，确定适宜的冲洗液。结果 药典规定的6种试验菌均可在5 d内正常生长。结论 采用薄膜过滤法选择滤膜材质为PVDF或N66的集菌培养器，在冲洗液中添加0.1%卵磷脂和0.5%聚山梨酯80能减少冲洗液用量，且降低因冲洗对污染菌造成的机械损伤并缩短检验耗时和节约检验成本。