体外表达人重组肝细胞增强因子rhALR的分离纯化

目的：对大肠杆菌表达的人源重组肝细胞生长肽进行分离纯化获得目的蛋白rhALR。方法：其表达产物在大肠杆菌中以不溶性包含体形式存在，经过超声破菌、包含体抽提、洗涤处理、使包含体纯度达75％以上，用8mol/L尿素变性溶解包含体沉淀后上清直接稀释复性，再经浓缩、透析、离子交换凝胶过滤等系列纯化步骤。结果：纯化后目的蛋白纯度达95％以上。回收率达20％。     

TRAIL对多种肿瘤细胞的杀伤作用

目的： 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）作用下多种肿瘤细胞的生长抑制效应及凋亡诱导情况。方法： 利用大肠杆菌基因工程菌表达非融合rhsTRAIL，进行目的蛋白的分离纯化，得到rhsTRAIL样品，纯度为97%。通过倒置显微镜下观察、MTT法、流式细胞仪法检测其对细胞的生长抑制和诱导凋亡情况。结果： 一定浓度的TRAIL 可有效抑制LS174-T细胞、MCF-7细胞、GLC细胞、7402细胞、Jurkut T细胞生长，其生长抑制率具剂量依赖性，且各细胞对TRAIL敏感性不同，其中Jurkat T细胞最为敏感。用2 mg/L TRAIL作用Jurkat T细胞0-72 h，6 h后细胞即发生明显凋亡，其细胞凋亡率具时间依赖性。结论： 所制备的TRAIL可抑制多种肿瘤细胞生长，并诱导Jurkat T细胞凋亡。     

促肝细胞生长素对小鼠移植肿瘤的实验研究

在肝癌移植小鼠模型成功基础上,应用pHFG对荷瘤小鼠、裸小鼠进行治疗与预防,旨在探讨pHGF在动物体内对肿瘤细胞生长行为的影响,探讨pHGF的可能作用机理.将BEL-7402肝癌细胞移植至BALB/C裸小鼠皮下,将SP_2/O骨髓瘤细胞移植至同系BALB/C小鼠皮下,将SP_2/O骨髓瘤细胞移植至同系BAL/C小鼠皮下.预防组同时皮下     

pHGF诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

应用BEL-7402肝癌细胞及正常单层肝细胞作靶细胞,探讨pHGF及分离组分对靶细胞的影响.结果显示,pHGF对7402细胞酶代谢活性有明显抑制作用,并呈量效关系.ID50为350μg/ml,这种抑制作用非样品毒性.组分3、4对7402细胞有显著抑制活性,有效活性比pHGF高25～100倍.pHGF对单层肝细胞有酶活性激活作用,其组分1、2、5作用最为显著.表明pHGF组分中存在正向调节单层肝细胞酶活性的物质,也存在抑制7402细胞活性的负调节因子.进一步研究显示,这种抑制方式是诱发7402细胞发生程序性死亡.     

肝再生增强因子的免疫组化定位及其在肝炎病患者血清水平观察

目的：探讨肝再生增强因子（ALR）的组织分布，观察肝炎病患者血清ALR的水平。方法：取鼠、人胎儿系列新鲜组织固定后，石蜡包埋切片，以SABC试剂盒进行免疫组化染色定位；用ELISA法检测肝炎病患者血清ALR水平。结果：免疫组化染色结果显示，ALR在组织细胞中呈胞浆、胞膜型分布，尤以睾丸、肝脏染色最深；慢性肝炎患者血清ALR水平升高非常显著（P<0.01），急性肝炎患者血清ALR水平升高显著（P<0.05），急、慢性肝炎患者ALR无显著差异。结论：ALR主要分布于肝脏和睾丸组织，既无种族特异性，也无器官特异性；肝脏是ALR作用的靶器官，其本身也可产生ALR。     

心肌肽素的分离组分及组分相加对阿霉素中毒大鼠心肌细胞的修复作用

目的 :研究心肌肽素的分离组分及组分相加对阿霉素中毒大鼠心肌细胞的修复作用。方法 :采用MTT比色法 ,观察阿霉素中毒心肌细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶的活力。结果 :心肌肽素及 5个分离组分均显示了促进琥珀酸脱氢酶活力的作用 ,其中P1组分活力较强 ;各组分相加亦显示促进酶活力的作用 ,但未见显示相加效应。结论 :心肌肽素对阿霉素所致心肌细胞损伤的促进修复作用 ,系各组分所含物共同作用的结果。     

重组人肝再生增强因子的纯化及生物学活性研究

对经大肠杆菌表达的重组人肝再生增强因子进行纯化并观察其对肝损伤小鼠模型的促修复作用。 １．方法：ｐＢＶ－ｈＡＬＲ／ＪＭ１０９工程菌由本室构建,３０℃培养至Ａ６００＝０．６,４２℃诱导表达５ ｈ,收集不同诱导时间菌体鉴定ｒｈＡＬＲ的表达水平。包涵体的洗涤变性,复性后经 ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ离子交换柱层析,收集洗脱峰,行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,结果经ＵＶＰ ｌａｂｗｏｒｋ扫描处理软件分析测定ｒｈＡＬＲ纯度,Ｎ端氨基酸分析采用手工Ｅｄｍａｎ降解法。 ＣＣ１４急性肝损伤小鼠模型的建立,动物 ＢＡＬＢ／Ｃ小…     

鼠人肝再生增强因子的cDNA克隆及序列分析

目的克隆大鼠及人肝再生增强因子的ｃＤＮＡ．方法按文献报道大鼠及人肝再生增强因子核苷酸序列设计合成引物．利用ｍＲＮＡ抽提试剂盒分别从乳鼠及人胎肝组织中提取ｍＲＮＡ，再逆转录聚合酶链反应扩增出需要的ｃＤＮＡ片段，经克隆入ｐＧＥＭＴ质粒后以Ｔ７ＤＮＡ聚合酶序列分析试剂盒测定ｃＤＮＡ的序列．结果经ＲＴＰＣＲ反应顺利扩增到４７０ｂｐ的鼠肝再生增加因子ｃＤＮＡ及３８４ｂｐ的人肝再生增强因子．结论所得到的ｃＤＮＡ序列与文献报道一致     

重组人肝再生增强因子McAb的建立与免疫组化的定位研究

肝再生增强因子(ａｕｇｍｅｎｔｅｒｏｆｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ,ＡＬＲ)是一种热稳定的促肝细胞增殖因子,相对分子质量为15×103与肝刺激物(ｈｅｐａｔｉｃｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓｕｂｓｔａｎｃｅ,ＨＳＳ)、促肝细胞生长素(ｐｒｏｍｏｔｅｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｐＨＧＦ)一样具有促进1/3肝部分切除大鼠肝细胞ＤＮＡ合成和提高ＣＣＬ4至中毒性肝衰竭成活率的作用我们根据同源克隆原理,按照Ｈａｇｉｙａ克隆的大鼠ＡＬＲｃＤＮＡ编码的3′端与5′端设计一对引物,从人胎肝组织中成功获得ｈＡＬＲ基因片…     

重组人肝增强因子工程菌JM109的发酵工艺研究

目的：研究表达重组人肝增强团子（hALR）工程菌JM109的发酵工艺。方法：采用发酵罐发酵,优化工程菌发酵的培养基配方、pH值、诱导表达时间、补料方式等。结果：在pH6．9条件下,培养6h后诱导表达5h,同时补科,5L罐发酵工程菌,菌体收得量可达湿重33．0g／L。目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的31．3％。结论：此发酵工艺可以较好地提高ALR工程菌菌体得率和目标蛋白表达量。