临床分离产IMP-1型金属酶非发酵菌的耐药机制研究

从临床收集耐亚胺培南的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌共50株,进行头孢他啶和2-巯基乙醇的表型协同试验(CAZ ME),然后进行金属酶IMP-1基因的PCR检测。选取IMP-1阳性株测序,用PCR方法检测有无一类整合子基因(IntI1)。表型的检测发现有28株为协同阳性,其中铜绿假单胞菌27株,鲍曼不动杆菌1株。PCR和测序检测出其中一株铜绿假单胞菌含有IMP-1基因,同时也含有IntI1基因。首次在中国西部地区发现产IMP-1型金属酶、同时也含有一类整合子的铜绿假单胞菌,对于临床上研究细菌的耐药性传播具有重要意义。     

以减毒沙门菌为载体的肿瘤DNA疫苗免疫机制

减毒沙门菌可作为外源DNA的载体，为DNA疫苗的研制提供了新的思路。携带肿瘤DNA的减毒沙门菌可通过肠上皮细胞屏障，被存在于外周免疫系统的DC捕获；肿瘤DNA可在DC中表达肿瘤抗原；DC可将肿瘤抗原呈递给T细胞。该疫苗能刺激机体发生抗肿瘤的特异性免疫应答，发挥抗肿瘤作用。     

藏药紫金标抗HSV-1的作用机理研究

目的 :探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒 (HSV-1)的作用及机理 ,为进一步开发该药提供理论依据。方法 :采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV-1感染的Vero细胞 ,以 50%组织细胞感染量 (TCID₅₀ ) ,细胞病变效应(CPE) ,MTT法和核酸分子杂交作为评价指标。结果 :MTT法测得紫金标的 50 %抑制浓度 (IC₅₀ )为 29.46mg·L^-1,50%中毒浓度 (TC₅₀ )为 1 077mg·L^-1,治疗指数 (TI)为 36.56 ,结果表明紫金标有明显抑制HSV-1的作用 ,其作用强度和有效时间与药物浓度成正比。紫金标无直接灭活HSV-1的作用 ,也不能影响病毒的释放 ;但可干扰HSV -1对宿主细胞的吸附。不同浓度的紫金标能明显抑制HSV-1gD基因复制和mRNA表达。结论 :紫金标具有显著的抗HSV-1的作用 ,能抑制HSV-1对宿主细胞的吸附以及抑制HSV-1gD基因复制与转录。     

解脲支原体临床分离株生物被膜药物敏感性分析

目的 检测解脲支原体(Ureaplasma urealytium, Uu)临床分离株生物被膜的形成及其对抗菌药物的敏感性,为Uu临床治疗提供参考。方法 通过结晶紫染色半定量法检测Uu临床菌株生物被膜的形成能力;采用微量肉汤稀释法检测并分析Uu临床菌株在浮游状态与生物被膜状态下对四环素、红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星的敏感性。结果 在所检测的25株Uu中64%(16/25)菌株能形成生物被膜,9株不能形成生物被膜。16株Uu形成生物被膜后对四环素和左氧氟沙星的最小生物被膜药物抑制浓度(minimal biofilm inhibitory concentration, MBIC)比浮游菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)高4~8倍或以上,差异有统计学意义(P＜0.05);对红霉素和阿奇霉素MBICs增加的0~2倍,差异有统计学意义(P＜0.05)。Uu形成生物被膜后对四环素和左氧氟沙星的耐药率显著提高,差异有统计学意义(P＜0.05);对红霉素和阿奇霉素的耐药率无显著性差异(P＞0.05)。9株不能形成生物被膜Uu菌株,在浮游状态和生物被膜状态培养下对所选4种抗生素体外药敏试验的MIC和MBIC的差异无统计学意义(P＞0.05);对所选4种抗生素耐药率的差异亦无统计学意义(P＞0.05)。结论 Uu临床菌株多数可形成生物被膜,生物被膜形成后降低对四环素和喹诺酮类抗菌药物的敏感性,对阿奇霉素和红霉素的敏感性影响较小。阿奇霉素和红霉素可用于Uu生物被膜临床菌株的治疗。     

铜绿假单胞菌生物被膜形成能力与基因型的相关性分析

目的 探讨铜绿假单胞菌（PA）临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性。方法 采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析;通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR（ERIC—PCR）技术绘制48株PA的指纹图谱,应用计算机软件建立遗传相似性系数矩阵及聚类分析树状图。结果 48株临床分离PA菌株生物被膜的形成能力不同。生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性,PA在17％遗传相似性系数上分为A、B、C、D、E五个基因型,生物被膜形成能力强的PA大都属于D型,其遗传相似性系数为42％。结论 绝大多数临床分离的PA株具有较强的生物被膜形成能力;生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性;生物被膜形成能力较强的PA在基因型上表现出一定的相似性。     

铜绿假单胞菌Quorum-Sensing系统中rhlR基因的克隆表达及其免疫保护性研究

目的研究铜绿假单胞菌rhlR表达产物的分子生物学特性,以及对小鼠的免疫保护作用。方法以铜绿假单胞菌标准株PAO1的基因组DNA为模板,PCR方法扩增rhlR基因。利用pGEX4T-1载体构建rhlR-pGEX4T-1重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用免疫印迹验证。同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率。结果rhlR的全基因序列为726bp,经序列分析和同源性比较,与GenBank中的rhlR基因(登录号:AE004768)完全一致。大肠杆菌BL21(DE3)转化重组质粒rhlR-pGEX4T-1后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达的融合蛋白质相对分子质量为54×103,其中RhlR蛋白为27×103。体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率与未经免疫的正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的rhlR-pGEX4T-1重组质粒能够在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出具有生物学活性的RhlR蛋白。重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用。     

4种检测方法在幽门螺杆菌感染中的临床诊断价值分析

目的 评价幽门螺杆菌(H.pylori)感染常用检测方法的临床性能及应用价值,为临床诊断的选择提供参考依据。方法 选取2020年1月至2022年1月期间深圳市大鹏新区葵涌人民医院消化内科收治的有上消化道症状的患者276例,对患者进行¹³C尿素呼气试验(¹³C-UBT)和胃镜检查,采集其胃黏膜标本分别进行快速尿素酶试验(RUT)、细菌培养及病理组织学检查,以病理组织学检测结果作为“金标准”,对上述各种检测方法的结果进行比对及统计学处理。结果 ¹³C-UBT、胃镜、RUT、细菌培养、组织学检查结果阳性检出率分别为91.30%(252/276)、65.58%(181/276)、79.71%(220/276)、73.19%(223/276)、90.22%(249/276);各种检测方法效能从高到低排序,敏感度¹³C-UBT>RUT>细菌培养>胃镜检查、特异度细菌培养>¹³C-UBT>胃镜检查>RUT;一致性检验¹³C-UBT(K...     

广东省东莞地区发现1株泛耐药产KPC一2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌

目的研究泛耐药肺炎克雷伯菌的相关耐药机制和治疗对策。方法细菌鉴定采用VITEK2全自动细菌鉴定系统,药敏试验采用K—B法,通过产碳青霉烯酶确证试验（改良Hodge试验）及聚合酶链反应（PCR）检测KPC-2基因,并进行序列测定。同时调查感染患者的诊疗情况。结果常规药敏试验显示,该菌株对阿米卡星敏感,对其他抗菌药物均耐药;Hodge试验阳性,PCR检测到KPC-2基因,序列测定与GenBank1i844849序列一致。患者经拔除气管插管,人住隔离病房,加强支持治疗后,1个月内未检测到泛耐药肺炎克雷伯菌。结论加强泛耐药肺炎克雷伯菌监测,提高对泛耐药菌的认识有助于感染疾病的治疗和预防。     

鸭疱疹病毒1型实时荧光定量PCR方法的建立

目的建立检测鸭疱疹病毒1型(鸭瘟病毒)的实时荧光定量PCR方法,为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法根据病毒DNA聚合酶基因的序列,设计引物和探针,采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR,用含有125bp扩增产物的pMD18-T载体质粒为阳性对照,构建标准曲线,对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价,同时与传统PCR方法进行比较研究。结果标准曲线表明在2.3×105~2.3×10拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999);实时荧光定量PCR最少可检测到23个阳性质粒,说明有很好的敏感性;试验内及试验间变异系数分别为1.22~6.69以及2.09~8.84,说明有较好的重复性;对非鸭瘟病毒DNA无扩增,说明有很好的特异性;在对病毒DNA的检测方面,比传统PCR的敏感性高出104倍。结论成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法。     

Identification and Distribution of the Clinical Isolates of Imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa Carrying Metallo-β-lactamase and/or Class 1 Integron Genes

To investigate the distribution of the genes of two major metallo-β-lactamases (MBL; i.e., IMP and VIM) and class 1 integrons (intI) in the clinical imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa, a total of 65 isolates,from a university hospital in Sichuan between December 2004 and April 2005 were screened for MBL genes by PCR using primers specific for blaIMP-1, blaVIM and blaVIM-2 genes. The MBL-positive isolates were further assessed for class 1 integrons by PCR using specific primers. The nucleotide sequences of several PCR products were also determined. The results revealed that the blaVIM gene was found in 81.5% (53/65) of all isolates,blaVIM-2 gene was found in only 1 isolate and the intI gene was observed in 45.3% (24/53) of blaVIM-positive isolates. One isolate carried simultaneously both blaIMP-1 and intI genes, and to the best of our knowledge this is the first report of such isolate in southwest China. These observations highlight that the genes for VIM β-lactamase and class 1 integrons were predominantly present among the imipenem-resistant P. aeruginosa tested, confirming the current widespread threat of imipenem-resistant, integron-borne P. aeruginosa.