皮内注射用卡介苗关键质量指标关联性分析

目的  对皮内注射用卡介苗（卡介苗）关键质量指标进行关联性分析,为生产工艺控制提供一定的依据。方法  用统计软件（Minitab 17和SPSSAU）对211批卡介苗的菌种代次、半成品沉降率、半成品活菌数、成品活菌数、成品效力和成品渗透压摩尔浓度等关键质量指标进行统计分析,探寻各指标间相互影响的规律。结果  第6、9和12代卡介菌生产的卡介苗成品活菌数均值分别为5.07×10⁶、5.49×10⁶和6.02×10⁶ 菌落形成单位（colony-forming unit,CFU）/mg,Pearson相关系数为0.200（P<0.05）,成品活菌数随卡介苗生产用菌种代次的升高而略有增加。半成品沉降率处于0.00%~7.99%、8.00%~12.00%和12.00%~20.00%的卡介苗成品活菌数均值分别为5.57×10⁶、5.52×10⁶和5.06×10⁶ CFU/mg,Pearson相关系数为-0.182（P<0.05）,成品活菌数随半成品沉降率提高而略有降低。半成品活菌数处于1.00×10⁷~1.99×10⁷、2.00×10⁷~2.99×10⁷和3.00×10⁷~4.00×10⁷ CFU/mg的卡介苗成品活菌数均值分别为4.61×10⁶、5.69×10⁶和6.53×10⁶ CFU/mg,Pearson相关系数为0.537（P<0.05）,成品活菌数随半成品活菌数增加而显著增加。成品活菌数处于1.00×10⁶~3.99×10⁶、4.00×10⁶~5.99×10⁶和6.00×10⁶~8.00×10⁶ CFU/mg的卡介苗成品效力均值分别为17.61、16.51和16.55 mm,Pearson相关系数为-0.187（P<0.05）,成品效力随成品活菌数增加而先略有降低再趋于平稳。成品活菌数处于1.00×10⁶~3.99×10⁶、4.00×10⁶~5.99×10⁶和6.00×10⁶~8.00×10⁶  CFU/mg的卡介苗成品渗透压摩尔浓度均值分别为363.61、363.21和368.68 mOsmol/kg,Pearson相关系数为0.210（P<0.05）,成品渗透压摩尔浓度随着成品活菌数增加而略有升高。结论  在企业标准范围内,成品活菌数受半成品活菌数的影响较大,受菌种代次、半成品沉降率的影响较小。成品活菌数对成品效力和成品渗透压摩尔浓度的影响较小。     

新建主细胞库对水痘减毒活疫苗质量影响的分析

目的 基于细胞基质分析新建人二倍体细胞MRC-5主细胞库,并通过主细胞库变更前后所制的水痘减毒活疫苗（水痘疫苗）可比性研究,分析新建主细胞库对水痘疫苗质量和稳定性的影响。方法 对新建MRC-5主细胞库、工作细胞库和生产终末代细胞按照中国药典2015年版和企业质量标准进行抽样检定,并传代至超高代次细胞进行传代稳定性研究,对比细胞生长与细胞计数。用新建主细胞库连续试生产3批水痘疫苗并进行工艺验证,分析疫苗原液及成品的质量结果,并考察水痘病毒基因序列和产品稳定性。结果 新建主细胞库、工作细胞库及其他各代次细胞在传代过程中生长良好,细胞计数正常,检定结果均符合质量标准。试生产的水痘疫苗工艺合格,变更前后生产的疫苗水痘病毒基因序列无差异;病毒滴度均为4.0 lg噬斑形成单位（plaque-forming unit,PFU）/0.5 ml,热稳定性试验结果均为3.4 lgPFU/0.5 ml,水分含量均不高于1.5%,符合企业注册标准;质量稳定性趋势基本一致。结论  建立的人二倍体细胞MRC-5主细胞库各项检定结果合格。用新细胞库试生产的水痘疫苗质量和稳定性与变更前的一致。     

麻疹、腮腺炎、风疹、水痘联合减毒活疫苗的生产工艺研究

目的  建立麻疹、腮腺炎、风疹、水痘联合减毒活疫苗（combined live attenuated measles，mumps，rubella and varicella vaccine，MMRV）的生产工艺。方法  根据现有疫苗病毒原液生产工艺，将麻疹病毒沪-191纯化株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRD-Ⅱ株和水痘-带状疱疹病毒Oka株在原代鸡胚成纤维细胞或人二倍体细胞MRC-5株中制备高滴度病毒原液，并超低温保存。筛选无明胶冻干稳定剂配方。按国外已上市同类产品的病毒配比，研究MMRV中4种病毒的原液配制滴度及成品配制比例，建立最佳冻干工艺。结果  用筛选出的适合于MMRV的无明胶冻干稳定剂配方进行试验，确定病毒原液的配制滴度为，麻疹4.6 lg半数细胞培养感染量（50% cell culture infective dose，CCID₅₀）/ml、腮腺炎5.8 lgCCID₅₀/ml、风疹4.3 lgCCID₅₀/ml、水痘4.8 lg噬斑形成单位（plaque forming unit，PFU）/ml。使成品中腮腺炎病毒滴度至少达到麻疹和风疹和水痘病毒的10倍，水痘病毒滴度高于现有单价水痘疫苗。连续制备3批MMRV，平均病毒滴度为，麻疹4.5 lgCCID₅₀/ml、腮腺炎5.1 lgCCID₅₀/ml、风疹4.3 lgCCID₅₀/ml、水痘4.6 lgPFU/ml；平均水分为1.2%。其他项目检定均合格。结论  建立了MMRV的生产工艺，可以稳定生产出达到国外同类产品质量标准并符合我国4种单价减毒活疫苗国家标准的产品。     

S79株流行性腮腺炎病毒不同代次的序列研究

目的观察流行性腮腺炎(腮腺炎)病毒(MuV)S79株各代病毒的蛋白基因在传代过程中是否发生变化,对比S79株主代病毒(S79-1-3)、蚀斑纯化病毒(S79-1-P7-3③)及ME(Enders株)病毒的基因差异。方法S79株主代病毒及蚀斑纯化病毒在原代鸡胚细胞(CEC)上连续传递12代,观察每代病毒培养特性及高变区SH基因序列,又选择其中的CEC5、6、10、15代,以及在鸡胚尿囊腔中传代的ME株病毒,测定各个主要基因序列(N、NS1/P、M、F及HN基因),对核苷酸序列和它相应的氨基酸序列以及基因差异进行计算机分析。结果S79株主代病毒及其蚀斑纯化病毒在CEC上连续传递12代,其培养特性、致细胞病变(CPE)及病毒滴度基本稳定。S79株主代病毒及其蚀斑纯化病毒与ME株病毒同属A基因型。S79株疫苗各个代次之间高变区SH基因未见突变。S79株的5、6、10、15代病毒在各个主要基因区域有散在基因的有意义突变比例极低。S79-1-3中不同亚株之间的比例可能会随传代而发生变化,比较认为经过蚀斑纯化的S79-1-P7-3③株在传代中较S79-1-3株更为稳定。结论S79株病毒与文献报道的JL2株十分相似,经连续传代总体的核苷酸差异<0.5%。S79-1-3主代病毒在药典规定代次范围内甚为稳定。经纯化的各代S79病毒则更为稳定,从分子水平上提示其在CEC15代内都可作为工作代毒种使用。     

腮腺炎病毒的基因分型及当前疫苗的免疫效果

腮腺炎是由腮腺炎病毒所导致的急性全身性传染病。腮腺炎病毒只有一个血清型,目前基于其SH基因序列的差异可以区分出A～K 11个基因型。一般使用聚合酶链反应(PCR)与逆转录酶(RT) - PCR分子生物学方法来研究病毒的基因。不同疫苗株的免疫效果有区别,1剂接种与2剂接种的效果也在监测中。已初步建立动物模型可供病毒致神经毒性研究。有报道认为病毒基因型之间存在抗原性差异,但病毒各基因型间有交叉保护作用存在,所以目前使用的疫苗都是安全、有效的     

不同稳定剂配方的麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗的稳定性研究

目的 对比不同冻干稳定剂配方对麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗(measles,mumps,rubella and vericella combined live attenuated vaccine,MMRV)稳定性的影响,初步筛选出最佳配方。方法 对比2种含明胶（配方1、2）和1种无明胶冻干稳定剂配方（配方3）对MMRV在37、25及2～8 ℃保存后关键质量指标的影响。结果 37 ℃加速稳定性试验中,仅配方3产品4种病毒滴度均在合格范围内。25 ℃加速稳定性试验中,配方1产品1个月时腮腺炎和水痘病毒滴度即全部低于质量标准下限,配方2、3产品放置6个月,所有4种病毒滴度均在质量标准范围内,但配方2腮腺炎及水痘病毒滴度均处于标准下限。2~8 ℃长期稳定性试验中,配方1产品放置6个月,腮腺炎及水痘病毒滴度均低于质量标准下限,配方2、3产品的病毒滴度稳定性可分别保持18和24个月。结论 针对MMRV开发的无明胶冻干稳定剂配方3在冻干和保存过程中对4种病毒的活性保护效果最佳,其产品有效期至少为2年,并有进一步延长的潜力。研究结果也为日后研发降低明胶使用含量的麻疹系列疫苗冻干稳定剂配方提供了支持。     

乙型流感疫苗生产用毒株NYMCBX-51B主要抗原的基因特征及传代稳定性研究

目的 了解2013年流感疫苗生产用乙型病毒株NYMC BX-51B主要抗原血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)的基因特征,并研究该疫苗株的传代稳定性.方法 对制备的乙型流感病毒株主种子批、工作种子批及收获液病毒进行全面的生物学特性检定.采用逆转录-PCR法从主种子批、工作种子批及疫苗病毒收获液中扩增HA及NA基因片段,并进行全基因序列测定及分析.对7株不同年份的乙型疫苗株及野毒株的HA氨基酸序列进行比对,绘制氨基酸种系发生树.结果 该毒株主种子批和工作种子批的抗原性与WHO2013年推荐的毒株一致,种子批和收获液病毒的生物学特性均符合我国2010年版药典标准.HA基因序列长度为1 755 bp,编码584个氨基酸;NA基因序列长度为1 401 bp,编码466个氨基酸.各代次流感病毒HA和NA的基因核苷酸和氨基酸序列均相同,与GenBank发布的序列完全一致,同源性为100％.2013年乙型疫苗株的HA氨基酸序列与2010和2012年相比,同源性分别为94.3％和98.4％.结论 2013年乙型流感疫苗株NYMCBX-51B主要抗原基因传代稳定,一般生物学特性符合我国药典要求.2013年疫苗株的HA氨基酸序列与2010年相比进化距离较远.     

腮腺炎疫苗免疫效果研究进展

目前广泛使用的腮腺炎减毒活疫苗株有Jeryl Lynn株、Leningrad-3株以及它们的衍生株.疫苗的免疫效果为80%-100%,差异较其他同类疫苗大,可能的原因首先是这些病毒株是几个亚株形成的混合物.在某些疫苗生产用细胞上连续传代,亚株的比例会出现变化;但最近发现,人类HLA和免疫调节相关细胞因子及其受体基因多样性对腮腺炎疫苗接种效果有重要影响;有可能是以上两者结合导致了现阶段腮腺炎免疫效果的较大差异,而后者也许是更主要的原因.2004年以来,英国、美国和西班牙均发生了疫苗接种人群中的腮腺炎流行,疫苗的保护效果随时间而减弱是其主要原因.目前仍应遵照WHO的建议,提供及时的追加免疫机会以维持人群的免疫水平.     

诱导广谱和持久免疫的流感疫苗的开发

2004年2月26～27日,世界卫生组织(WHO)在日内瓦召开了"诱导广谱和持久免疫的流感疫苗的开发"会议.希望能够通过这次会议明确现有认识的不足以加快开发新型流感疫苗.     

两种工艺制备的麻疹减毒活疫苗加速稳定性可比性研究

目的  通过强制降解试验,对细胞工厂与转瓶培养两种工艺制备的麻疹减毒活疫苗进行加速稳定性可比性研究。方法  取细胞工厂与转瓶培养工艺制备的麻疹减毒活疫苗单次收获液和原液各3批于25 ℃保存10 d,疫苗成品3批于37 ℃保存10 d。按照中国药典2015版三部和企业标准进行病毒滴度检定。利用Minitab 19比较两种工艺产品的病毒滴度降解曲线。结果  所有样品的降解曲线均符合麻疹病毒的热敏感性。2种工艺制备的麻疹减毒活疫苗单次收获液病毒滴度第1组分别下降1.51和1.56 lg细胞培养半数感染量（CCID₅₀）/ml,第2组均下降1.33 lg CCID₅₀/ml,第3组均下降1.54 lg,原液分别下降1.20和1.43 lg CCID₅₀/ml,成品分别下降1.33和1.30 lg CCID₅₀/ml。2种工艺产品的降解曲线相似。结论   细胞工厂与转瓶培养工艺生产的麻疹减毒活疫苗具有相似的加速稳定性。