脂蛋白脂肪酶基因突变的研究

目的：筛查国人脂蛋白脂肪酶(LPL)基因的突变，并探讨其与高甘油三酯血症的关系。方法：对高甘油三酯血症组(48例)和正常甘油三酯对照组(121例)的各扩增片段进行分析，电泳图谱异常者进行PCR产物测序。对于频率较高的多态性位点，引入限制性核酸内切酶位点利用PCR-RFLP进行鉴定。结果：在高甘油三酯血症人群中，检出2例内含子3受位剪接点上游6bp的C→T转换的突变杂合子，1例外显子5Pm^207→Leu突变杂合子，在全部样品中检出1例Ser^447→stop突变纯合子，50例Ser^447→stop杂合子。结论：天津地区人群中存在着LPL基因突变，除Ser^447→stop外，内含子3和外显子5的突变多与高甘油三酯血症相关，可能是高甘油三酯血症的遗传易感因子。     

如何培养医学类高职院校学生学习药理学的兴趣

学习兴趣,是对所学内容的喜好和关切情绪,是掌握扎实理论知识的前提。在医学类高职院校里,学生学习药理学的兴趣不高。本文通过分析其原因,从优化绪论内容,丰富教学方法,改革课堂小结,关爱学生四个方面,论述如何培养学生学习药理学的兴趣。     

国人脂蛋白脂肪酶基因突变的筛查

目的筛查天津地区脂蛋白脂肪酶基因突变情况,并探讨其对血脂水平的影响。方法利用聚合酶链反应—单链构象多态性分析技术对386例样本(血脂正常组278例,血脂异常组108例)的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。对于频率较高的多态性位点,引入限制性核酸内切酶位点利用聚合酶链反应限制片长多态性进行鉴定。结果在386例样本中,共检出4种突变,检出率为14.5%,其中1例为目前国内外未见报道的外显子3 Leu103→Leu同义突变杂合子,1例为目前亚洲首报的外显子5 Pro207→Leu突变杂合子,3例内含子3受位剪接点上游6 bp的C→T转换的突变杂合子,1例Ser447→stop突变纯合子,50例Ser447→stop突变杂合子。结论我国天津地区人群存在着广泛的脂蛋白脂肪酶基因变异,既具有与大多数国家相同的Ser447→stop多态性位点,也具有自身的特点。     

金黄色葡萄球菌锰超氧化物歧化酶的表达纯化及活性分析

目的克隆表达、纯化金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)并测定其活性。方法使用Clustal Omega比对不同来源Mn-SOD的序列,使用Swiss model网站预测金黄色葡萄球菌Mn-SOD的三级结构。提取细菌DNA,以此为模板PCR扩增获得Mn-SOD基因并将其与pET28a连接,构建pET28a-Mn-SOD重组质粒。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)获得重组菌BL/pET28a-Mn-SOD,使用IPTG诱导表达重组Mn-SOD,通过镍柱亲和层析纯化Mn-SOD蛋白并测定不同pH条件下的酶活性。结果金黄色葡萄球菌Mn-SOD具有Mn-SOD的特征序列和锰离子结合位点。成功得到重组质粒pET28a-Mn-SOD,转化大肠埃希菌BL21后表达相对分子质量为24.8×10^3的Mn-SOD,使用Ni^2+柱纯化后得到高纯度的Mn-SOD,且在pH值为7.5时活性较高,约为3 200 U/mL。结论成功构建了pET28a-Mn-SOD重组质粒能,表达的Mn-SOD重组蛋白纯化后仍具有SOD活性。     

双主动脉弓的产前超声诊断及鉴别诊断

目的：研究产前超声在诊断及鉴别诊断双主动脉弓的价值。方法本文回顾性分析5例在我院产前超声诊断,并在引产后病理解剖确诊的双主动脉弓胎儿的产前超声表现。结果产前超声诊断的双主动脉畸形5例：1例为右弓优势左弓劣势型,4例为左右弓平衡型;其中,3例产前确诊为双主动脉弓畸形,2例误诊为右位主动脉弓、左导管及迷走左锁骨下动脉;双主动脉弓畸形典型的产前超声表现为：在三血管气管切面上,升主动脉于气管前分叉为左右两支绕行于气管两侧,左右两支在气管后汇合为降主动脉,围绕气管呈"O"型改变。结论三血管气管切面是诊断胎儿双主动脉弓畸形的重要切面,产前超声在鉴别常见的血管环上有重要的临床价值。     

一种新的脂蛋白脂肪酶基因突变（C^56→T）

目的：筛查国人（天津地区）脂蛋白脂肪酶基因突变情况，并探讨其对血脂水平的影响。方法：利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术，对386例患者（血脂正常组278例，血脂异常组108例）的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查，对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果：在386例样本中，检出1例外显子3 C^56→T（Leu^103→Leu）同义突变杂合子。结论：新LPL突变（C^56→T）的发现，对进一步阐述IJPL结构与功能的关系有重要的参考价值。     

氧化极低密度脂蛋白促进猪主动脉平滑肌细胞内脂类堆积的机制及其细胞毒作用

200μg／ml的氧化极低密度脂蛋白（OX－VLDL）与猪主动脉平滑肌细胞（SMC）温育48h后，细胞内甘油三酯（TG）含量为不加脂蛋白对照组的3．2倍（P＜0．01），细胞内总胆固醇（TC）含量为对照组的1．22倍（P＜0．05）。荧光素异硫氰酸酯（FITC）标记OX－VLDL的结合试验表明：SMC可摄取完整的OX－VLDL（Kd=48．82μg／ml，Bmax=2067ng／mgcellprotein）。竞争抑制试验表明，OX－VLDL及正常低密度脂蛋白（N－LDL）均对FITC－OX－VLDL的结合摄取表现出明显的竞争作用，两者的作用相似。以上结果表明，SMC能通过受体途径可饱和性地摄取完整的OX－VLDL，进而形成泡沫细胞。同时还发现OX－VLDL与SMC长时间温育（24h以上）会损伤细胞，造成部分细胞脱落。这对动脉粥样硬化及急性冠状动脉综合征发病机制研究及其预防和治疗都有重要的指导意义。     

PCR-SSCP法测定人载脂蛋白E基因型

目的：建立一种既可以测定人载脂蛋白E常见基因型，又可以筛查罕见异构体的新方法。方法：利用RFLP和SSCP法对人载脂蛋白E编码基因的PCR扩增产物进行基因型的检测和分析，采用双脱氧DNA链合成终止法进行PCR产物直接测序，确认基因型的测定结果。结果：两种方法测得的基因型结果完全相符，并经测序证实结果正确。结论：PCR-SSCP法对于单碱基突变的高检出率使其具有筛查罕见异构体的可能，同时该法还可以准确快捷地进行人载脂蛋白E常见基因型的测定。     

双启动子shRNA真核表达载体的构建

目的:构建含有双启动子的shRNA真核表达载体.方法:通过PCR分别扩增带有BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ酶切位点的人U6启动子序列(U6-B/E)和带有Bgl Ⅱ、HindⅢ酶切位点的人U6启动子序列(U6-B/H),用BamH Ⅰ与EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1(+)与PCR产物U6-B/E后进行连接,重组质粒命名为psPRO.再用BglⅡ与HindⅢ双酶切psPRO与PCR产物U6-B/H后进行连接,构建含有双启动子的shRNA真核表达载体.结果:酶切鉴定以及DNA测序结果显示载体构建成功.结论:构建双启动子的shRNA真核表达载体,使其在细胞中表达2个不同的siRNA,不仅筛选方便,而且可以通过建立这种模式化工具载体,为今后RNA干扰实验研究的开展和深入提供手段.     

甲状腺激素对成骨样MG-63细胞甲状腺激素受体不同亚型表达的影响

目的 检测人类成骨样细胞MG-63中甲状腺激素受体(TR)的表达情况以及甲状腺激素(T3或T4)对其的影响.方法 用实时荧光定量PCR法对MG-63细胞中TR的主要4个亚型,α1、α1、β1、β2的mRNA表达进行了测定.结果 TRα1 mRNA的表达水平最高,为10.70±0.45;TRβ1仅及其半,为5.75±0.10;TRβ2不低,相当于TRβ1的60%,为3.34±0.08;TRα2的表达极低,仅为(3.66±0.59)×10-2.分别加入不同浓度的T3或T4,仅TRα1和TRα2对T3表现明显的降调节,且TRα1和TRα2的表达与相应T3浓度之间负相关,其他亚型无显著性变化,也无相关关系;同样浓度范围的T4作用各亚型,表达均无显著性变化.结论 在骨细胞发育分化中TRα1起关键作用.

Abstract：

Objective To examine the expression of thyroid hormone receptor isoforms (TR α1, α2, β1, and β2) in human osteoblast-like cell line MG-63 at the mRNA level and the effect of thyroid hormone (T3 or T4 ) on the expression. Methods Realtime quantitative PCR was performed. Results The expression of TRα1 mRNA was the highest, that was 10. 70± 0.45, TRβ1 was 5.75 ± 0. 10, TRβ2 was 3.34 ± 0. 08, and TRα2 was very low, only (3.66 ±0. 59) × 10-2. Only the expression of TRαl and TRα2 mRNA was down regulated significantly by the treatment of 10-10 ～ 10-6 mol/L T3, and there was a negative correlation between the expression of TRα1 or TRα2 mRNA and the concentration of T3. Conclusion TRα1 plays a primary role in mediating the effects of thyroid hormones in skeletal development.