白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的 通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增，了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点．方法 采用RT—PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ24个基因片段，分析其TCR Vβ基因的表达情况，GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性．结果 经24个Vβ引物所分别进行的RT—PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况，发现10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同，病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建，仅表达5-22个亚家族基因；9例GVHD患者外周血仅表达2—8个TCR Vβ亚细胞生长．结论 移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制，部分基因片段呈选择性扩增．GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达，并有克隆性T细胞生成．     

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增,了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点.方法采用RT-PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ 24个基因片段,分析其TCR Vβ基因的表达情况,GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性.结果经24个Vβ引物所分别进行的RT-PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况,发现 10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建,仅表达5～22个亚家族基因;9例GVHD患者外周血仅表达2～8个TCR Vβ亚家族,其中7例均表达Vβ3.对6例GVHD患者的基因扫描显示,均存在克隆性T细胞生长.结论移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制,部分基因片段呈选择性扩增.GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达,并有克隆性T细胞生成.     

CML患者CD4+和CD8+T细胞的TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的：了解慢性粒细胞白血病慢性期（CML-CP）患者外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞中TCR Vβ亚家族T细胞的基因表达和克隆性.方法：利用RT-PCR分别扩增19例CML-CP患者外周血单个核细胞（PBMCs）、CD4^＋和CD8^＋细胞TCR Vβ亚家族基因的CDR3,阳性产物进一步经基因扫描分析其克隆性.结果：CML患者外周血CD4^＋和CD8^＋细胞分别表达部分（1～21个）Vβ亚家族,均以Vβ13的表达率最高,其次为Vβ9,多数患者的一些Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖,主要出现于CD8^＋细胞中,分别以Vβ21（CD4^＋）和Vβ11（CD8^＋）亚家族的克隆性增殖多见.结论：CML患者外周血CD4^＋和CD8^＋细胞的TCR Vβ谱系均存在限制性分布,患者存在的克隆性增殖CD4^＋和CD8^＋T细胞可能与宿主抗CML抗原反应有关,它们可能在抗CML效应中起主要作用.     

CD3ζ链基因在脐带血T细胞及其CD4+和CD8+T细胞亚群中的表达特点

目的 了解脐带血T细胞及其CD4 和CD8 T细胞亚群的信号传导分子CD3ζ基因的表达特点.方法 采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR和相对定量分析法检测60例脐带血单个核细胞和12例纯化脐带血CD4 及CD8 T细胞的CD3ζ基因的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算CD3ζ基因相对mRNA表达量,60例健康成人作为对照.并根据荧光定量PCR熔解曲线特点和序列分析了解CD3ζ基因突变情况.结果 全部脐带血和健康成人外周血单个核细胞均表达CD3ζ基因,不同个体CD3ζ基因表达量有所差异,脐带血T细胞CD3ζ基因相对mRNA表达量为6.7%±5.56%,CD4 和CD8 T细胞的CD3ζ基因相对mRNA表达量分别为6.74%±2.0%和6.88%±1.76%,三者CD3ζ基因表达量均明显高于健康成人(P=0.000,P=0.034,P=0.000).序列分析结果显示尚未发现国外文献所报道的ζ链剪接异构体.结论 本研究率先报道了脐带血T细胞及其CD4 和CD8 T细胞亚群的CD3ζ基因mRNA的表达水平,为进一步了解脐带血T细胞免疫学特点提供新的基础资料.     

超抗原SEA联合PML-RARα对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响

目的探讨超抗原SEA联合PML-RARα多肽对外周血T细胞TCR邯亚家族基因表达的影响。方法分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肽与正常人外周血单个核细胞共同培养，20d后收集增殖细胞，利用RT-PCR及基因扫描技术分析诱导后增殖T细胞TCR Vβ亚家族的利用和克隆性增殖的特点。结果单纯SEA诱导后，T细胞表达了11个TCR Vβ亚家族，且仍为多克隆增殖。单纯PML-RARα多肽诱导后，T细胞限制性表达8个Vβ亚家族，其中Vβ13、Vβ14表现出寡克隆或寡克隆趋势。PML-RARα多肽联合SEA共同诱导，其T细胞表达TCR Vβ亚家族依然呈明显的限制性，且Vβ13、Vβ 14亚家族呈寡克隆、双克隆及寡克隆趋势。结论SEA能协同PML-RARα多肽诱导的T细胞克隆性活化与增殖。     

脐带血和成人外周血TCR Vγ和Vδ亚家族的分布和克隆性研究

目的探讨脐带血和健康成人外周血TCR Vγ和Vδ基因谱系的分布情况及克隆性特点。方法利用RT-PCR法检测16例脐带血和10例健康成人外周血单个核细胞TCRVγ(Ⅰ～Ⅲ)和Vδ(1～8)各亚家族的表达,了解各亚家族的分布和利用情况;阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析其CDR3长度,了解T细胞的克隆性。2例成人胸腺组织作为对照。结果脐带血T细胞的Vγ基因表达主要集中在VγⅠ和VγⅡ,而Vδ基因则平均表达(4.63±1.03)个亚家族,主要集中在Vδ1、2、3、8中表达。健康成人外周血T细胞除了1例不表达VγⅢ之外,其余均表达全部Vγ基因,而在Vδ基因中则平均表达(3.6±0.52)个亚家族,并以Vδ1、2和3为多见,Vδ4和Vδ5未能在外周血中检测到,而Vδ5和Vδ8的表达则明显低于脐带血(P=0.009,P=0.001);2例成人胸腺组织表达除Vδ4和Vδ6之外的其他Vγ和Vδ亚家族。基因扫描显示16例脐带血中有1例在VγⅠ和5例分别在Vδ2、Vδ4和Vδ6中出现寡克隆性,10例成人外周血中有9例在不同亚家族中出现克隆性T细胞,其余均呈多克隆性。结论脐带血TCRVγ和Vδ亚家族T细胞和健康成人外...     

G-CSF和GM-CSF对髓系白血病细胞增殖的影响

目的 了解粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对髓系白血病细胞增殖的影响。方法 采用甲基纤维素半固体培养法培养白血病细胞集落（ＣＦＵ－Ｌ）,观察Ｇ－ＣＳＦ和ＧＭ－ＣＳＦ对１１例ＡＭＬ和ＣＭＬ患者外周血ＣＦＵ－Ｌ形成的影响。结果 ＣＭ－ＣＳＦ对ＣＦＵ－Ｌ的促进作用明显高于Ｇ－ＣＳＦ（Ｐ＝０．０１２）,而Ｇ－ＣＳＦ对ＣＦＵ－Ｌ形成影响与对照组没有显著性差别（Ｐ＝０．４９５）。结论 Ｇ－ＣＳＦ对髓系白血病细胞体外增殖无明显影响,作为髓系白血病大剂量化疗的支持治疗可能更为安全。     

AML-M1型患者TCR Vβ T细胞家族表达抑制情况

目的 了解急性髓细胞白血病Ｍ１亚型（ＡＭＬ－Ｍ１）患者ＴＣＲ Ｖβ亚家族Ｔ细胞的分布特点。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ扩增８例Ｍ１患者外周血的单个核细胞的ＴＣＲ Ｖβ２４个亚家族基因,分析了其ＴＣＲ Ｖβ亚家族的利用情况。结果 不同标本中可检测到２～８Ｖβ亚家族的Ｔ细胞,不同患者中Ｖβ亚家族Ｔ细胞颁不尽相同。结论 Ｍ１患者外周血ＴＣＲ Ｖβ Ｔ细胞家族表达部分受抑制,提示患者细胞免疫功能的部分缺陷。     

系统性红斑狼疮中A20表达特点的研究

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3,也称A20)、核因子κB(NF-κB)、黏膜相关淋巴瘤易位基因1(MALT1)及其转录本1(MALT1V1)的mRNA表达特点。方法:采用real-time PCR法检测21例SLE患者(其中合并硬皮症2例,合并类风湿关节炎1例,合并淋巴瘤1例)及31例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1、A20、NF-κB和MALT1V1 mRNA的表达情况。结果:SLE样本中,A20 mRNA表达水平较健康人明显降低(P0.01),MALT1和NF-κB也较健康人降低(P0.01)。在健康人组,A20和NF-κB mRNA的表达水平未呈现明显相关性,MALT1和NF-κB则呈正相关(P0.05);而在SLE组中,A20和NF-κB mRNA则显示出显著正相关(P0.05),MALT1和NF-κB则不存在相关性。SLE中MALT1V1表达量显著低于正常人(P0.05),相关性研究还显示,健康人中A20和MALT1V1存在正相关关系(P0.01),在SLE中则不存在(P0.05)。结论:本研究首先提供了MALT1-A20-NF-κB通路在SLE中的表达特点。SLE患者异常低表达A20,这可能与患者低免疫耐受相关,其与NF-κB表达的正相关性情况可能与其它因素的调控有关,有待进一步证实。     

基因扫描分析AML-M_(2a)病人外周血的TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性增殖

目的　了解AML -M2a患者外周血中TCRVβ亚家族T细胞的分布和克隆性情况 .方法　利用RT -PCR扩增 14例AML -M2a患者外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ亚家族基因的CDR3,了解TCRVβ亚家族T细胞的分布 .阳性产物进一步经基因扫描分析了解其克隆性 .结果　 14例AML -M2a患者选择性表达 3～ 10个Vβ亚家族 ,其中部分Vβ亚家族呈寡克隆增殖 .结论　AML -M2a患者TCRVβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖 ,可能是机体对M2a细胞刺激所产生的特异性免疫反应 .