黄芪甲苷合成差异基因克隆和鉴定

黄芪甲苷(AstragalosideIV,ASI)是黄芪中的有效成分之一,具有抗炎,改善心肌,脑缺血,促淋巴细胞繁殖,促抗体生成等作用。但由于其在黄芪中含量低,以及缺乏必要的化学合成中间体,限制了其临床药用,通过基因工程方法提高其表达量将有助于其应用。本文应用了差减杂交方法(SSH)结合斑点杂交,从黄芪甲苷合成差异株系中分离鉴定了19个黄芪甲苷合成差异基因片断,其中7个具有同源序列,同源性约80%以上,而另外12个未发现同源序列,推测可能是新基因片断或者是全长cDNA的3’末端序列。     

大规模培养的黄芪毛状根急性毒性研究

对黄芪毛状根、野生黄芪和栽培黄芪的急性毒性进行了初步研究,结果表明三者均符合药典规定的毒性要求,可安全药用。     

颗粒结合型淀粉合成酶过量表达显著提高黄芪毛状根中黄芪甲苷含量(英文)

黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASI)是药材黄芪中的活性成分之一。由于目前对于黄芪皂苷代谢途径知之甚少,使得通过直接转入皂苷母核合成相关基因从而提高黄芪毛状根中黄芪甲苷含量的方法不能施行。考虑到皂苷中的糖基侧链,增加活性葡萄糖代谢流入也许可以增加黄芪甲苷的最终转化效率。为了验证这个假说,该文将ADP-葡萄糖代谢相关基因颗粒结合型淀粉合成酶(Granule-bound starch synthase,GBSS)转入黄芪毛状根中,分子鉴定表明其基因已经整合进黄芪毛状根基因组,并且在mRNA水平增加了表达;GBSS酶活性分析表明,转基因株系平均酶活增加了约21.8倍;PAS染色结果表明,转基因株系中的多糖成分显著增加;与此同时,ASI含量亦提高了4倍。研究结果表明,通过转入活性糖代谢相关基因方法提高皂苷产量的方法切实可行。     

黄芪甲苷提取与测定方法的研究

 目的 研究黄芪甲替提取方法及HPLC检测条件。方法 色谱柱：Inertsil ODS-3(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相：乙腈-水(35：65);流速：1.0 ml·min〈sup〉-1〈/sup〉;蒸发光散射检测器参数：蒸发温度：100°C,雾化温度：80°C,出口温度：60°C,载气流速：1.5ml·min〈sup〉-1〈/sup〉。结果 80%甲醇索氏提取4h,水饱和正丁醇萃取3次,0.15 mol·L·min〈sup〉-1〈/sup〉氢氧化钠或40 %氨水洗涤3次;黄芪甲苷线性范围为4.582～22.913,平均回收率为100.4%,RSD=4.27%。结论 本法简便、灵教、准确。     

黄芪化学质量标准的初步研究

目的通过比较中国药典规定的2种黄芪药材中皂苷类、黄酮类和多糖类物质的含量,确定了黄芪化学质量标准的评价指标.方法HPLC-ELS法测定黄芪甲苷的含量,RP-HPLC法测定10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷的含量,硫酸-苯酚法测定黄芪总多糖的含量.结果蒙古黄芪的黄芪甲苷、总黄酮、10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷、总多糖的含量分别是0.710±0.030mg/g,45±4.243mg/g,19.955±0.813μg/g,73.310±0.962mg/g,膜荚黄芪的黄芪甲苷、总黄酮、10-羟基-3,9-二甲氧基紫檀烷、总多糖的含量分别为1.186±0.024mg/g、46±1.414mg/g、84.640±3.069μg/g、48.800±1.245mg/g.结论本法具有一定的实用性,并对中药材化学质量标准的研究提出了一种新的思路.     

转基因黄芪毛状根中黄芪甲苷含量的HPLC-ELSD法测定

目的:测定转黄芪毛状根中黄芪甲苷含量。方法:利用HPLC-ELSD法测黄芪甲苷含量。结果:转透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla Haemoglobin gene,vgb)黄芪毛状根、非转基因黄芪毛状根和山西产黄芪药材黄芪甲苷含量差异大。结论:转vgb黄芪毛状根黄芪甲苷含量远远高于非转基因黄芪毛状根和黄芪药材。     

顶椎前凸截骨术治疗胸椎或胸腰段骨质疏松性驼背畸形

目的:探讨顶椎前凸截骨术(apicallordosatingosteotomy)加短节段内固定(minimalsegmentsfixation)矫正胸椎或胸腰段骨质疏松性驼背畸形的临床效果。方法:26例65￣81岁(平均71.5岁)的胸椎或胸腰段骨质疏松性驼背畸形患者接受顶椎截骨加短节段内固定术,随访2.1￣6.1年,平均3.2年,观察矫正效果和并发症情况,并对患者的满意度进行调查。结果:平均手术时间137min,平均失血量717ml。8例胸椎驼背畸形患者的Cobb角由术前平均82.7°(75°￣97°)矫正至平均25.8°(18°￣30°),18例胸腰段驼背畸形患者的Cobb角由术前平均56.3°(47°￣71°)矫正至-1.8°(-11°￣7°)。矢状面失衡由术前平均12.1cm矫正至术后平均4.9cm。局部后凸角从术前平均53.6°矫正到平均-9.1°,平均椎体楔形角从17.7°矫正至-26.6°。17例有神经损伤的患者术后均获得改善。无严重并发症发生。所有患者疼痛缓解,对自己外型及整体感觉改善感到满意。结论:顶椎截骨加短节段内固定术治疗胸椎或胸腰段骨质疏松性驼背畸形的效果满意,并发症较少。     

流动育龄妇女一孩生育服务登记办理现状及对策研究

目的:了解流动人口一孩生育服务登记的办理情况和存在的问题,提出政策建议。方法:利用2014年国家流动人口动态监测数据库,采取分层、多阶段、与规模成比例的PPS方法进行抽样。以被抽中的2012年以来应该办理一孩生育服务登记的12 403名流动已婚育龄妇女为主要研究对象,分析其生育登记现状及影响因素,并召开专家及计划生育管理人员座谈会。结果:在12 403名流动育龄妇女中,53.6%的办理过登记,通过承诺制登记率为44.2%。流入地发出协查信息,户籍地正常反馈率只有30.6%。定性研究发现承诺制存在弊端。结论:流动育龄妇女一孩生育登记率较低,信息核查困难,"承诺制"登记存在弊端。建议加强管理方信息登记和核查责任,将"承诺制"纳入社会征信体制,积极落实便民措施。     

杠杆力矫正法治疗重度僵硬的脊柱侧凸畸形

目的评估后路杠杆力矫正法(cantilever bending technique)治疗重度(Cobb角≥70°)及僵硬(柔韧性≤30%)的脊柱侧凸畸形的治疗效果及临床应用价值。方法回顾性研究采用杠杆力矫正法治疗的包括各种病因导致(包括先天性、特发性或神经肌肉性)的重度且僵硬的脊柱侧凸畸形患者41例。依据患者随访的影像学资料、并发症发生情况及改良式脊柱侧凸研究学会(Modified SRS Outcomes Instrument)病患满意度问卷(SRS-24)评估临床效果及价值。结果脊柱侧凸的主弯(majorcurve)平均Cobb角为98°(75°~133°),柔韧性为18%(2%~27%),术后矫正率为67.1%(51%~74%),手术前的冠状面失衡约2.5cm,术后为0.8cm,手术无任何严重并发症发生。除了1例需要做前路松解术外,其余患者均采用后路杠杆力矫正法矫治即可达到满意的矫正结果。无论脊柱侧凸畸形的病因是哪一种类型,均获得了满意的手术疗效。结论杠杆力矫正法用以治疗矫正任何病因的重度僵硬的脊柱侧凸畸形的临床应用价值在于省略了前路脊柱松解术,减少并发症发生率及提高患者的满意度。     

发根农杆菌Ri质粒及其在植物基因工程中的应用

发根农杆菌诱导生成的毛状根具有生长迅速，遗传稳定，易于扩大培养等优点，具有良好的应用前景。文章综述了发根农杆菌及Ri质粒的特性、结构、分类、功能和侵染过程，毛状根的特点、转化、鉴定和在植物基因工程中的应用。