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目的:体外观察大肠杆菌硝基还原酶/[5-(1-氮丙啶)-2,4-二硝基苯甲酰胺](以下简称NTR/CB1954)自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞的杀伤效应,探索一种新的宫颈癌基因治疗方法.方法: 利用PCR技术从Escherichia coli K12的基因组中扩增出编码NTR的基因nfsB,酶切后,连接到真核表达载体pcDNA3上,获得重组载体pcDNA3-nfsB,lipofectamineTM2000脂质体转染法将pcDNA3-nfsB转染Hela细胞,筛选稳定表达细胞株,应用RT-PCR以及SDS-PAGE检测NTR在Hela细胞中的表达,MTT法检测NTR/CB1954对Hela细胞活力的影响,流式细胞术检测亚二倍体细胞率改变,PI/Hoechest33258双染荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡率.结果: 成功构建了真核表达载体pcDNA3-nfsB,获得稳定表达NTR的Hela细胞株,在mRNA水平以及蛋白水平检测到NTR在Hela细胞中的表达,NTR/CB1954自杀基因系统明显影响Hela细胞的活力,增加了Hela细胞的凋亡率.结论: NTR/CB1954自杀基因系统对Hela细胞在体外通过凋亡产生明显的杀伤效应. 相似文献
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氧化修饰低密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞周期及增殖细胞核抗原的影响 总被引:5,自引:0,他引:5
应用流式细胞仪对氧化修饰低密度脂蛋白(Ox-LDL)刺激动脉平滑肌细胞(SMC)增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原(PCNA)、P53、P27及c-erbB蛋白表达的影响进行了观察。结果发现:Ox-LDL和天然低密度脂蛋白(N-LDL)刺激培养人动脉SMC细胞增殖时其S期细胞百分率增加,且Ox-LDL的作用比N-LDL强,表明Ox-LDL和N-LDL刺激SMC细胞增殖时与S期细胞的增加有关;Ox-LDL刺激SMC增殖的同时PCNA蛋白阳性率增加,而与P53、P27和c-erbB-2蛋白的表达无关。提示PCNA可能参与了Ox-LDL刺激SMC的细胞增殖作用;特异性蛋白激酶C(PKC)抑制剂GF109203X能降低Ox-LDL刺激SMC增殖过程中PCNA的阳性率,表明该细胞增殖过程中PCNA表达的抑制可能与PKC信号传递通路有关。 相似文献
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同型半胱氨酸对培养大鼠心肌细胞牛磺酸摄取及其影响机… 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:观察同型半胱氨酸(HCY)对培养大鼠心肌细胞牛磺酸摄取的影响及其影响机制。方法:应用(^3H)-牛磺酸同位素检测技术,测定HCY不同浓度或在HCY作用下牛磺酸作用不同时间对牛磺酸摄取量的影响,以及应用蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7和多粘菌素观察大鼠心肌细胞在HCY作用下对牛磺酸摄取量的影响。 相似文献
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核被膜核苷三磷酸酶 (nucleosidetriphosphatase ,NTPase)为通过细胞核孔复合体转运mRNA的限速酶。本实验探讨内皮素 1(ET 1)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对大鼠肝细胞核NTPase活性的影响。体外分离的大鼠肝细胞核与ET 1或AngⅡ单独或分别与ET 1的ETA受体拮抗剂JKC30 1、ETB受体拮抗剂BQ788或AngⅡ的AT1受体拮抗剂Losartan、AT2 拮抗剂PD12 3177共同孵育肝细胞核 ,分别测定ATP和GTP作底物时 ,肝细胞核NTPase活性。结果发现ATP和GTP作底物时 ,ET 1(10 -11~ 10 -9mol/L)或AngⅡ (10 -11~ 10 -9mol/L)孵育肝细胞核均浓度依赖地增强其NTPase活性 (均P <0 0 1) ,ET 1和AngⅡ对NTPase的刺激作用可分别被JKC30 1(10 -6mol/L)和Losartan (10 -6mol/L)阻断 (P <0 0 1)。ET 1和AngⅡ共同孵育后 ,核NTPase活性与ET 1或AngⅡ单独孵育相比显著增加 (均P<0 0 1)。结果表明 :ET 1和AngⅡ可分别通过ETA和AT1受体刺激肝细胞核NTPase活性 相似文献
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目的:观察DNA与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法:应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网,并用45CaCl2作为示踪剂,观察质粒DNApcDNA3和pcDNA3/ANF对肌质网钙转运功能的影响。结果:两种质粒均可明显增加肌质网Ca2+摄取,呈明显的量效关系,并且也可促进肌质网钙释放。结论:外源质粒DNA可影响肌质网钙转运功能。 相似文献
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质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca^2+转运的影响 总被引:4,自引:2,他引:2
目的:观察DNA与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法:应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网,并用^45CaCl2作为示踪剂,观察质粒DNA pcDNA3和pcDNA3/ANF对肌质网钙转运功能的影响。结果:两种质粒均可明显增加肌质网Ca^2+摄取,呈明显的量效关系,并且也促进肌质网钙释放。结论:外源质粒DNA可影响肌质网钙转运功能。 相似文献
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细胞增殖是细胞增殖信号作用于细胞膜或胞浆受体并经细胞内信号传递进而影响细胞周期的结果 ;与细胞增殖有关的细胞内信号传递系统包括 G蛋白、蛋白激酶 A和 C以及酪氨酸蛋白激酶系统等 ;细胞内信号在基因水平上的传递是细胞内信号传递系统的延续 ;细胞周期时相的改变是推动细胞增殖的重要原因。血管平滑肌细胞 ( VSMC)的增殖也不例外 ,但是致 VSMC增殖的细胞内信号传递过程的细节还不十分清楚 ,探讨 VSMC增殖的细节对于心血管疾病的防治有着重要的理论意义 相似文献
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同型半胱氨酸诱导小鼠金属硫蛋白生成 总被引:1,自引:0,他引:1
同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是甲硫氨酸代谢过程中产生的一种含硫氨基酸,临床和流行病学资料表明,高Hcy血症是心血管疾病的一个独立危险因素。已证实Hcy具有损伤血管内皮、刺激血管平滑肌增殖和促进胶原合成等生物学效应。Hcy细胞损伤作... 相似文献
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内质网应激反应基因表达调控的多样性 总被引:5,自引:1,他引:4
内质网通过激活未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),包括蛋白合成暂停、内质网分子伴侣和折叠酶等蛋白表达上调、诱导内质网相关性降解(ER-associated degradation,ERAD),以至细胞功能不能恢复,最后诱导内质网相关性细胞凋亡,清除受损细胞,保护机体生存。所有这些内质网相关反应都是各种应激信号刺激内质网,引起多种内质网应激基因表达的结果。转录、翻译以及翻译后加工各个环节对内质网应激时基因的表达产生调控,且方式各不相同。 相似文献