氧化修饰低密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞周期及增殖细胞核抗原的影响

应用流式细胞仪对氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）刺激动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３、Ｐ２７及ｃ－ｅｒｂＢ蛋白表达的影响进行了观察。结果发现：Ｏｘ－ＬＤＬ和天然低密度脂蛋白（Ｎ－ＬＤＬ）刺激培养人动脉ＳＭＣ细胞增殖时其Ｓ期细胞百分率增加，且Ｏｘ－ＬＤＬ的作用比Ｎ－ＬＤＬ强，表明Ｏｘ－ＬＤＬ和Ｎ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ细胞增殖时与Ｓ期细胞的增加有关；Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖的同时ＰＣＮＡ蛋白阳性率增加，而与Ｐ５３、Ｐ２７和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达无关。提示ＰＣＮＡ可能参与了Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ的细胞增殖作用；特异性蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＧＦ１０９２０３Ｘ能降低Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖过程中ＰＣＮＡ的阳性率，表明该细胞增殖过程中ＰＣＮＡ表达的抑制可能与ＰＫＣ信号传递通路有关。     

同型半胱氨酸对培养大鼠心肌细胞牛磺酸摄取及其影响机…

目的：观察同型半胱氨酸（ＨＣＹ）对培养大鼠心肌细胞牛磺酸摄取的影响及其影响机制。方法：应用（＾３Ｈ）－牛磺酸同位素检测技术，测定ＨＣＹ不同浓度或在ＨＣＹ作用下牛磺酸作用不同时间对牛磺酸摄取量的影响，以及应用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｈ７和多粘菌素观察大鼠心肌细胞在ＨＣＹ作用下对牛磺酸摄取量的影响。     

内皮素1和血管紧张素Ⅱ对大鼠肝细胞核核苷三磷酸酶活性的影响

核被膜核苷三磷酸酶 (nucleosidetriphosphatase ,NTPase)为通过细胞核孔复合体转运mRNA的限速酶。本实验探讨内皮素 1(ET 1)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对大鼠肝细胞核NTPase活性的影响。体外分离的大鼠肝细胞核与ET 1或AngⅡ单独或分别与ET 1的ETA受体拮抗剂JKC30 1、ETB受体拮抗剂BQ788或AngⅡ的AT1受体拮抗剂Losartan、AT2 拮抗剂PD12 3177共同孵育肝细胞核 ,分别测定ATP和GTP作底物时 ,肝细胞核NTPase活性。结果发现ATP和GTP作底物时 ,ET 1(10 -11～ 10 -9mol/L)或AngⅡ (10 -11～ 10 -9mol/L)孵育肝细胞核均浓度依赖地增强其NTPase活性 (均P <0 0 1) ,ET 1和AngⅡ对NTPase的刺激作用可分别被JKC30 1(10 -6mol/L)和Losartan (10 -6mol/L)阻断 (P <0 0 1)。ET 1和AngⅡ共同孵育后 ,核NTPase活性与ET 1或AngⅡ单独孵育相比显著增加 (均P<0 0 1)。结果表明 :ET 1和AngⅡ可分别通过ETA和AT1受体刺激肝细胞核NTPase活性     

核被膜核苷三磷酸酶

核被膜上的核苷三磷酸酶通过提供能量以促进细胞核内成熟mRNA从核内向胞装进行转移,这一转运过程是制约细胞成熟mRNA能否表达出蛋白质的一重要环节,现已经知道调节该酶活性的因素除成熟mRNA的polyA结构上,还有很多其它的因素。     

硝基还原酶/CB1954自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞杀伤效应的实验研究

目的:体外观察大肠杆菌硝基还原酶/[5-(1-氮丙啶)-2,4-二硝基苯甲酰胺](以下简称NTR/CB1954)自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞的杀伤效应,探索一种新的宫颈癌基因治疗方法.方法: 利用PCR技术从Escherichia coli K12的基因组中扩增出编码NTR的基因nfsB,酶切后,连接到真核表达载体pcDNA3上,获得重组载体pcDNA3-nfsB,lipofectamineTM2000脂质体转染法将pcDNA3-nfsB转染Hela细胞,筛选稳定表达细胞株,应用RT-PCR以及SDS-PAGE检测NTR在Hela细胞中的表达,MTT法检测NTR/CB1954对Hela细胞活力的影响,流式细胞术检测亚二倍体细胞率改变,PI/Hoechest33258双染荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡率.结果: 成功构建了真核表达载体pcDNA3-nfsB,获得稳定表达NTR的Hela细胞株,在mRNA水平以及蛋白水平检测到NTR在Hela细胞中的表达,NTR/CB1954自杀基因系统明显影响Hela细胞的活力,增加了Hela细胞的凋亡率.结论: NTR/CB1954自杀基因系统对Hela细胞在体外通过凋亡产生明显的杀伤效应.     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca2+转运的影响

目的：观察ＤＮＡ与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法：应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网,并用４５ＣａＣｌ２作为示踪剂,观察质粒ＤＮＡｐｃＤＮＡ３和ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ对肌质网钙转运功能的影响。结果：两种质粒均可明显增加肌质网Ｃａ２＋摄取,呈明显的量效关系,并且也可促进肌质网钙释放。结论：外源质粒ＤＮＡ可影响肌质网钙转运功能。     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca^2＋转运的影响

目的：观察ＤＮＡ与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法：应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网,并用＾４５ＣａＣｌ２作为示踪剂,观察质粒ＤＮＡ ｐｃＤＮＡ３和ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ对肌质网钙转运功能的影响。结果：两种质粒均可明显增加肌质网Ｃａ＾２＋摄取,呈明显的量效关系,并且也促进肌质网钙释放。结论：外源质粒ＤＮＡ可影响肌质网钙转运功能。     

同型半胱氨酸诱导小鼠金属硫蛋白生成

同型半胱氨酸（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，Ｈｃｙ）是甲硫氨酸代谢过程中产生的一种含硫氨基酸，临床和流行病学资料表明，高Ｈｃｙ血症是心血管疾病的一个独立危险因素。已证实Ｈｃｙ具有损伤血管内皮、刺激血管平滑肌增殖和促进胶原合成等生物学效应。Ｈｃｙ细胞损伤作...     

内质网应激反应基因表达调控的多样性

内质网通过激活未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),包括蛋白合成暂停、内质网分子伴侣和折叠酶等蛋白表达上调、诱导内质网相关性降解(ER-associated degradation,ERAD),以至细胞功能不能恢复,最后诱导内质网相关性细胞凋亡,清除受损细胞,保护机体生存。所有这些内质网相关反应都是各种应激信号刺激内质网,引起多种内质网应激基因表达的结果。转录、翻译以及翻译后加工各个环节对内质网应激时基因的表达产生调控,且方式各不相同。