甲状腺素对生物组织器官中CAMP的影响及实验探讨

通过对小鼠注射过量的甲状腺素使之成为甲亢模型。采用特异结合蛋白的饱和分析法测定小鼠体内各组织器官中CAMP的含量。结果表明甲亢型小鼠各组织器官中的CAMP水平上升，与对照组比较均有显著性差异。由此证明甲状腺素具有增加生物组织器官中CAMP的作用。     

多型别人乳头瘤病毒在膀胱癌中的表达

目的：探讨人乳头瘤病毒与泌尿系肿瘤关系。方法：用ＰＣＲ检测５０例膀胱癌组织中人乳头瘤病毒的感染情况。结果：ＨＰＶ１６、１８型检测阳性率１０％，ＨＰＶ通用型（即６、１１、１６、１８、３１、３３）检测阳性率６０％。其感染与病理分级无关。结论：多型别混合感染是膀胱癌的病因之一     

血红素氧合酶-1对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的　探讨钴卟啉 (CoPP)诱导的血红素氧合酶 (HO) 1高表达对大鼠肾缺血再灌注损伤 (IRI)的保护作用。方法　建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型 ,随机将动物分为假手术组 ,对照组和实验组。动态检测血尿素氮 (BUN)、肌酐 (Cr)、超氧化物岐化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)的含量以及进行肾组织光镜形态学观察和酶联免疫吸附试验 (ELISA)和Westernblot分析HO 1。结果　对照组BUN、Cr升高 ,SOD下降 ,MDA升高 ,HO 1中度提高 (14 4.5± 13 .6) ,肾组织结构紊乱。实验组除HO 1含量大幅提高外 (62 9.4± 78.9) ,尚能显著逆转上述改变 ,两组间差异具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论　CoPP预处理诱导HO 1在肾缺血之前高表达可通过清除氧自由基 (OFRs)而减轻大鼠肾IRI。     

人类α-1,2-岩藻糖苷转移酶在猪血管内皮细胞的表达及作用

目的：探讨人类α-1，2-岩藻糖苷转移酶（HT）基因在猪血管内皮细胞（PIECs）的表达及意义。方法：将人HT基因重组质粒通过脂质体转染进猪血管内皮细胞，经G418筛选（500mg／L），用流式细胞仪检测HT的表达，表达阳性细胞与人血清共同孵育检测细胞的生存率。结果：流式细胞仪检测结果显示，未经转染HT基因的PIECS的H抗原表达率是13．80％，平均荧光强度很低是32．39，α-Gal表达率是99．98％，平均荧光强度是1347．09；转HT基因的PIECS其H抗原表达率是40．17％，平均荧光强度是143．66，α-Gal表达率是41．15％，平均荧光强度是158．72。转HT基因的细胞在人血清的作用下生存率明显高于未转染的细胞。结论：转染HT基因的PIECs明显提高了H抗原的表达。同时降低了α-Gal的表达．为转基因动物实验探讨克服异种移植超急性排斥反应（HAR）提供理论依据。     

人衰变加速因子基因在猪血管内皮细胞中的表达

目的 通过转基因方法使猪的血管内皮细胞表达人DAF蛋白，抑制猪供人移植超急性排斥反应。方法 体外培养猪腹主动脉内皮细胞，用透射电镜方法进行鉴定。脂质体转染法将含有人DAF基因的真核表达载体PSFFV－DAV转染进猪的血管内皮细胞，经G418筛选（浓度为100mg/L)12d，获得具有抗性的克隆，进而增殖，传代，保种。通过流式细胞仪检测转染细胞DAF的表达情况。结果 转染了基因的细胞与未转染基因的细胞在流式细胞仪检测中其莹光强度分别为82.18和1.69。转染的细胞5代后其荧光强度为71.96。结论 转染了人DAF基因的细胞荧光强度明显高于对照组。导入的外源基因在细胞内能高效、稳定地表达，为转基因猪的建立奠定一定的基础。     

重组人ht基因表达载体的构建及其意义

目的通过基因工程技术构建人α1，2岩藻糖苷转移酶（ht）基因表达载体，以期HT在猪细胞表达，削减异种抗原α-Gal的合成。方法HindⅢ／XbaⅠ双酶切pcDNA3和pRc／CMV—htcDNA2种质粒，回收所需酶切片段，进而连接、转化感受态细菌，纯化pcDNA3-htcDNA重组质粒，对其进行多酶切、PCR和测序鉴定。结果多酶切反应产物电泳可见内切酶Pvu Ⅰ酶切产生6．5kb片段，Bgl Ⅱ酶切产生4．6kb和1．9kb片段，Apa Ⅰ酶切产生5．6kb和0．9kb片段，Hindm／xba Ⅰ酶切产生5．4kb和1．1kb片段，结果与设计相符。PCR反应扩增出1098bp的htcDNA核心片段。序列测定结果与Genbank中htcDNA序列比对，表明在pcDNA3质粒多克隆位点成功定向连接了htcDNA全长序列。结论成功构建了pcDNA3-htcDNA重组质粒。     

乳头瘤病毒与细胞空穴症在膀胱癌中的表达

ＰＣＲ技术是近年发展起来的一种体外扩增特异ＤＮＡ片段的技术，并在分子生物学的各个领域得到了广泛的应用。研究采用这一技术测定膀胱组织中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ），同时光镜观察肿瘤细胞空穴症形态学特点，以初步探讨ＨＰＶ与细胞空穴症的关系。１材料与方法本院泌...     

核干因子在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨核干因子(NS)基因在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:利用RT-PCR及免疫组化方法对前列腺癌、良性前列腺增生(BPH)及高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)组织中NS基因的表达进行检测,并探讨NS蛋白表达水平与前列腺癌患者临床指标的关系。结果:前列腺癌中NSmRNA表达水平显著高于BPH中的表达水平,NS蛋白在前列腺癌中的强阳性、阳性及弱阳性表达率分别为48.8%、36.6%及12.2%,在BPH中分别为4.0%、32.0%及56.0%,在HGPIN中分别为5.0%、25.0%及60.0%,在前列腺癌中的表达水平显著高于BPH及HGPIN中的水平,具有统计学意义(P<0.05)。NS基因表达水平与前列腺癌的分化程度呈负相关,细胞分化程度越差,NS基因表达水平越高。结论:前列腺癌中高表达NS基因,NS基因在前列腺癌的不良分化和恶性增殖中可能起着重要作用。     

膜反应性溶解抑制物在细胞及小鼠体内的表达

目的 观察外源基因在猪血管内皮细胞及小鼠体内表达情况.方法 体外培养猪血管内皮细胞,脂质体转染法将pcDNA3-ICAM-2-Enhancer CD59cDNA转染猪的血管内皮细胞,以未转染的猪血管内皮细胞为阴性对照,人血细胞为阳性对照,经G418筛选(浓度为100 mg/L)获得具有抗性的克隆,通过流式细胞仪检测转染细胞的表达情况.通过显微注射将CD59基因片段导入小鼠授精卵,对出生的小鼠进行基因检测.结果 pcDNA3-ICAM-2-Enhancer-CD59cDNA重组质粒在细胞中表达强度为63.1%;转CD59基因小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表达强度为73.38%.结论 以人细胞间黏附因子Ⅱ(ICAM-2)为启动子并带增强子的CD59重组基因在猪的血管内皮细胞及小鼠体内均高效特异表达.