急性T淋巴细胞白血病中SIL－TAL－1融合基因的分子生物学研究

ＴＡＬ－１基因位于１号染色体短臂１ｐ３２。在急性Ｔ淋巴细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）中，２５％的患者该基因５’端发生丢失（约１００ｋｂ），与ＳＩＬ基因５’端相融合，形成ＳｉＬ－ＴＡＬ－１融合基因。我们用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＲＴ／ＰＣＲ）方法检测ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因转录本。在１７例Ｔ－ＡＬＬ中４例检测到该融合ｍＲＮＡ，并证明该转录本由ＳＩＬ基因第１外显子与ＴＡＬ－１基因第３外显子拼接而成。对该法的敏感度测定显示，可从１０￣６个正常细胞中检测出１个肿瘤细胞，并在２例缓解期标本中检测到微量残留白血病（ＭＲＤ）。此外，对３例有融合转录本患者的ＤＮＡ进行ＰＣＲ检测发现，其ＴＡＬ－１基因５’端丢失的位点相同，均为Ｔａｌ￣（ｄ１）重组。可见，ＴＡＬ－１基因的改变是Ｔ－ＡＬＬ一个有用的克隆标志，为其诊断和残留白血病检测提供了十分重要的依据。     

赖氨匹林抑制乳腺癌细胞增殖的机制初探

背景与目的:有研究证实非类固醇类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)通过抑制环氧合酶(cyclooxygenase,COX)-2干扰致癌作用,但并不是唯一机制。本实验探讨非选择性环氧合酶-2抑制剂赖氨匹林(aspisol)对体外培养的雌激素受体(ER)阴性(MDA-MB-231)和阳性(MCF-7)人乳腺癌细胞增殖的影响及其ERK(extracellular sigal-regulated kinase,细胞外信号调节蛋白激酶)信号通路的影响。方法:应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞技术测定凋亡率,Western blot方法检测赖氨匹林对两种乳腺癌细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)/磷酸化(P-ERK)的表达的影响。结果:1~10 mmol/L赖氨匹林可抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞的生长,且其作用具有剂量和时间依赖性,药物浓度越大,时间越长,抑制作用越明显,差异有显著性(P<0.01)。赖氨匹林(1,5,10 mmol/L)作用24 h后诱导MDA-MB-231细胞的早期凋亡率分别为(5.76±1.02)%、(10.28±1.95)%、(15.41±2.14)%,与对照组(0.27±0.17)%比较,差异有显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性。赖氨匹林(1,5,10 mmol/L)作用24 h后诱导MCF-7细胞的早期凋亡率分别为(4.62±1.05)%、(6.86±2.51)%、(11.40±3.56)%,与对照组(0.21±0.11)%相比,差异有显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性。赖氨匹林可不同程度下调两种乳腺癌细胞P-ERK的表达水平(P<0.01),但不影响总ERK表达(P>0.05)。结论:赖氨匹林对ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞均有抑制增生,诱导凋亡的作用,其作用机制与抑制乳腺癌ERK信号通路有关。     

ERK1/2 MAPK在赖氨匹林对MCF-7细胞增殖抑制中的作用

背景与目的:探讨赖氨匹林(Aspisol)在抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,对ERK1/2 MAPK信号转导通路的影响.材料与方法:采用免疫细胞化学方法测定MCF-7细胞中环氧合酶-2(COX-2)的表达.采用噻唑蓝(MTY)比色法检测Aspisol对MCF-7增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用Western blot分别检测ERKl/2、p-ERK]/2蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:在MCF-7细胞中未检测到COX-2的表达.Aspisol对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P＜0.01).Aspisol可诱导MCF-7细胞凋亡,并随着剂量的增大细胞的凋亡率升高(P＜0.05).Aspisol抑制MCF-7细胞pERK蛋白的表达(P＜0.05),但不影响总ERKI/2蛋白的表达(P＞0.05);Aspisol可促进Bax蛋白表达(P＜0.05),但抑制Beb2的表达(P＜0.05).结论:Aspisol影响ERKI/2 MAPK信号转导通路,调节凋亡相关蛋白表达是其抑制MCF-7细胞增殖的作用之一.     

阿司匹林赖氨酸盐在体外对人乳腺癌细胞的抑制作用及其机制

目的：探讨非选择性环氧合酶-2（cyclooxygenese-2,COX-2）抑制剂阿司匹林赖氨酸盐对乳腺癌MDA-MB-231细胞株COX-2、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinaseses-9,MMP-9）蛋白表达的影响。方法：不同浓度的阿司匹林赖氨酸盐作用于MDA-MB-231细胞24h后,HE染色观察细胞形态学的变化;采用MTT法检测阿司匹林赖氨酸盐对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的抑制作用;应用Western印迹法分别检测阿司匹林赖氨酸盐对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株COX-2、MMP-9蛋白表达的影响。结果：光学显微镜下阿司匹林赖氨酸盐处理组的细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。阿司匹林赖氨酸盐对MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖有明显抑制作用（P〈0.01）。与对照组相比,阿司匹林赖氨酸盐可显著抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞COX-2、MMP-9蛋白的表达,并呈剂量-依赖效应（P〈0.05）。结论：阿司匹林赖氨酸盐可抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞COX-2、MMP-9蛋白的表达。     

牛磺酸以p38丝裂原活化蛋白激酶依赖方式减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨牛磺酸时在体心肌缺血30 min再灌注60 min大鼠心肌组织中p38 MAPK信号转导通路活性的影响.方法:在体结扎左冠状动脉前降支及再通制备缺血再灌注损伤模型,右颈动脉插管至左心室检测心功能参数,TTC染色法检测各组心肌梗死面积,western blot法检测心肌组织p38及其磷酸化的表达情况.结果:与假手术组相比,缺血30min再灌注60min后,p38磷酸化表达明显增加(P<0.05),应用不同剂量牛磺酸后,p38磷酸化表达明显减少(P<0.05),但并不影响总p38蛋白的表达(P>0.05),并且缺血心肌的梗死面积随着牛磺酸剂量的增加而明显减少(P<0.05).结论:牛磺酸可以减少心肌细胞坏死和凋亡,保护心脏功能,这可能与抑制p38MAPK信号转导通路有关.     

赖氨匹林对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导作用

目的 研究赖氨匹林（Aspisol）对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导作用。方法采用四甲荃偶氮唑蓝（MTr）比色法检测赖氨匹林对A375细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜下观察A375细胞形态学变化,流式细胞仪（FCM）检测不同浓度的赖氨匹林诱导A375细胞的早期凋亡率。结果不同浓度的赖氨匹林对A375细胞均有明显的生长抑制作用,且其作用具有时间和浓度依赖性,差异具有非常显著性（P〈0．01）。不同浓度的赖氨匹林对A375细胞作用24h后,均可诱导其发生早期凋亡,并且呈浓度依赖性,差异具有显著性（P〈0．05）。结论赖氨匹林能抑制A375的增殖,诱导其发生凋亡。     

赖氨匹林对乳腺癌ERK信号通路活性及Bcl-2、Bax表达的影响

目的：探讨非选择性环氧合酶一2抑制剂赖氨匹林对体外培养的MDA—MB-231人乳腺癌细胞ERK信号转导通路活性以及Bcl-2、Bax家族蛋白表达的影响。方法：应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞凋亡率，免疫印迹技术检测赖氨匹林对乳腺癌细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）／磷酸化（p—ERK）、Bcl-2、Bax表达的影响。结果：与对照组相比，（1-10）mmol／L赖氨匹林作用24h、48h、72h明显抑制MDA—MB-231细胞生长，具有剂量、时间依赖性。（1、5和10）mmol／L赖氨匹林作用24h，细胞早期凋亡率分别为5．81％、10．52％、15．63％，对照组为0．27％。赖氨匹林可下调MDA—MB-231细胞P—ERK的表达水平，但不影响总ERK表达，同时上调Bcl-2的表达，下调Bax的表达。结论：赖氨匹林对MDA—MB-231细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用，其作用机制与抑制乳腺癌ERK信号通路、影响Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

赖氨匹林诱导人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的研究

[目的]研究赖氨匹林（aspis01）对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导作用,并初步探讨其诱导A375细胞凋亡的可能机制。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测赖氨匹林对A375细胞增殖的抑制作用：采用吖啶橙（AO）／溴化乙啶（EB）双染法进行A375细胞形态学观察：流式细胞仪（FCM）检测不同浓度的赖氨匹林诱导A375细胞的早期凋亡率：应用Westernblot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。[结果]（1）不同浓度的赖氨匹林对A375细胞均有明显的生长抑制作用,且其作用具有时间和浓度相关性（P〈0．01）。（2）AO／EB双染后可见：给药组早期凋亡细胞多于对照组．并且随着赖氨匹林浓度的增加．早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞均增多。（3）不同浓度的赖氨匹林对A375细胞作用24h后．均可诱导其发生早期凋亡．并且呈浓度相关性。（4）赖氨匹林可上调Bax蛋白的表达,下调Bel-2蛋白的表达。[结论]赖氨匹林可以抑制A375细胞的增殖,诱导其凋亡．此作用可能与调节Bax／Bcl-2蛋白的表达水平有关．     

急性T淋巴细胞白血病中SIL—TAL—1融合基因的分子生物学研究

ＴＡＬ－１基因位于１号染色体短臂１ｐ３２。在急性Ｔ淋巴细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）中，２５％的患该基因５＇端发生丢失（约１００ｋｂ），与ＳＩＬ基因５＇端相融合，形成ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因。我们用筑巢式逆转录／多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ ＲＴ／ＰＣＲ）方法检测ＳＩＬ－ＴＡＬ－１融合基因转录本。在１７例Ｔ－ＡＬＬ中４例检测到该融合ｍＲＮＡ，并证明该转录本由ＳＩＬ基因第１外显子与ＴＡＬ－１基因第３外显     

赖氨匹林对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及其机制研究

目的探讨ERK1/2信号通路在赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌HeLa细胞抑制中的作用。方法分别采用MTT比色法、标准细胞集落形成分析法和Annexin V/PI双染法分析不同浓度aspisol(1、5、10mmol·L-1)对HeLa细胞增殖、细胞集落形成及细胞凋亡的影响;Western blot方法检测细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)/磷酸化(P-ERK1/2)和COX-2的表达。结果 aspisol(1、5、10mmol·L-1)可呈浓度依赖性抑制HeLa细胞的生长、降低克隆形成数量、诱导HeLa细胞的早期凋亡率、下调P-ERK1/2及COX-2的表达水平(P<0.01),但不影响总ERK表达(P>0.05)。结论 aspisol对宫颈癌HeLa细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,其作用机制可能与抑制ERK1/2的活化进而下调COX-2的表达有关。