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1.
目的:构建串联的MYC反应元件修饰人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶基因Fcy1表达的复制缺陷型腺病毒载体。方法:将串联的MYC反应元件修饰的hTERT核心启动子及下游酵母胞嘧啶脱氨酶基因Fcy1克隆到穿梭质粒pDC316上,上辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞获得重组复制缺陷型腺病毒并在HEK293细胞中扩增重组病毒。PCR法及斑形成实验鉴定重组腺病毒和病毒滴度。结果:成功获得由6倍和18倍MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1基因表达的复制缺陷型腺病毒载体。结论:MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1基因表达的腺病毒载体为进一步研究骨肉瘤转录靶向基因治疗奠定了基础。 相似文献
2.
3.
阿立哌唑与富马酸喹硫平治疗精神分裂症疗效观察 总被引:3,自引:0,他引:3
【目的】比较阿立哌唑与富马酸喹硫平治疗精神分裂症的疗效及不良反应。【方法】将80例精神分裂症患者随机分为阿立哌唑组与富马酸喹硫平组各40例。阿立哌唑剂量为10~30mg/d,富马酸喹硫平为400~800mg/d,疗程8周。采用阳性阴性症状量表(PANSS)评定疗效,采用副反应量表(TESS)和锥体外系副反应量表(RSESE)评定不良反应。【结果】阿立派唑有效率为87.5%,富马酸喹硫平有效率为85.0%,两组治疗效果无显著性差异。但副反应富马酸喹硫平组明显高于阿立哌唑组。【结论】阿立哌唑为一种安全有效且耐受性较好的抗精神病药。 相似文献
4.
目的:使用骨钙素启动子构建骨组织特异性小发卡状RNA表达载体.方法:实验于2003-11/2004-09在解放军第四军医大学全军骨科研究所和全军整形外科中心完成.以HEK293细胞基因组为模板,利用聚合酶链反应扩增人骨钙素启动子.将骨钙素启动子、针对虫荧光素酶的小发卡状RNA编码序列和多腺苷酸信号依次克隆至pGL3-control载体的相应酶切位点,经双酶切鉴定和DNA测序证实后命名为pGL3-OCP-shLuc.将pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control分别共转染人胚胎肾细胞HEK293和人骨肉瘤细胞MG-63,48 h后测定虫荧光素酶活性,计算相对活性.结果:使用特异性引物成功扩增出长度为830 bp的人骨钙素启动子聚合酶链反应产物.DNA测序结果证实pGL3-OCP-shLuc中的小发卡状RNA表达框与设计完全一致.pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control共转染HEK293细胞后,虫荧光素酶相对活性与对照组相比没有明显差异,而共转染MG-63细胞后虫荧光素酶相对活性显降低,剔出效率约为69.8%.结论:成功使用人骨钙素启动子构建了小发卡状RNA表达载体,并实现了骨组织特异性RNA干扰,为将RNA干扰技术引入骨肉瘤基因治疗领域奠定了基础. 相似文献
5.
6.
背景与目的:本实验组根据PSA具有的肿瘤定位及丝氨酸蛋白酶活性,设计并已获得了包含促细胞凋亡的BH3结构域、抗肿瘤血管形成的VEGF拮抗肽K237和bFGF拮抗肽DG2结构域以及可被PSA特异性水解短肽的复合型多肽APP216的纯化蛋白,并运用细胞培养初步验证了其在体外对前列腺癌细胞的杀伤作用,本文进一步探讨该多肽对人前列腺癌肿瘤异种移植物的杀伤作用,为抗前列腺癌新药的研究奠定基础。方法:利用检测荷瘤裸鼠血清PSA浓度、各组荷瘤裸鼠肿瘤体积、重量变化、各组荷瘤裸鼠治疗前后体重的变化以及病理组织学观察来评估包含有BH3、K237、DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列的多肽药物APP216对分泌PSA的前列腺癌细胞系22RV,荷瘤裸鼠及不分泌PSA的前列腺癌细胞系PC3荷瘤裸鼠的肿瘤细胞杀伤作用。结果:前列腺癌细胞22RV,的荷瘤裸鼠治疗后比治疗前血清PSA浓度下降了71.1%、肿瘤体积下降51%,治疗组肿瘤重量比对照组低52%,组织病理学观察镜下可见坏死瘤组织。而前列腺癌细胞PC3的荷瘤裸鼠治疗组肿瘤重量与对照组无明显差别;治疗前后肿瘤体积变化无统计学意义,组织病理学观察癌细胞生长活跃。所有裸鼠重要脏器均未见病理损伤。结论:APP216多肽对分泌PSA的前列腺癌细胞荷瘤裸鼠具有良好的抑制瘤细胞增殖的作用。而对于不分泌PSA的前列腺癌细胞荷瘤裸鼠抑瘤效果不佳。并且该蛋白对其他重要脏器无毒性。 相似文献
7.
抗前列腺癌多肽APP216的体外活性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨抗前列腺癌多肽APP216对体外培养的前列腺癌细胞的杀伤作用,为抗前列腺癌新药的研究奠定基础。方法:利用MTT实验、细胞凋亡染色及流式细胞仪,检测包含有BH3、K237、DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列的多肽药物APP216对分泌PSA的前列腺癌细胞系LNCaP、22RV1及不分泌PSA的前列腺癌细胞系PC3m、DU145的杀伤作用。结果:APP216(270 μg/mL)处理48h后,前列腺癌细胞系LNCaP、22RV。的细胞生存率分别为22%和34%,72h后为10%和8%;前列腺癌细胞系PC3m、DU145的细胞生存率分别为90%和95%,72h后为87%和92%。APP216作用后,分泌PSA的前列腺癌细胞胞核呈致密浓染,或呈碎块状,有凋亡小体出现;不分泌PSA的PC3m细胞则未发现改变。APP216(270 μg/ml)处理48h后,分泌PSA的LNCaP细胞凋亡率为36.26%,不分泌PSA的PC3m细胞凋亡率仅为1.63%。结论:APP216多肽对分泌PSA的前列腺癌细胞有杀伤作用,可诱导肿瘤细胞发生凋亡;而对于不分泌PSA的前列腺癌细胞则效果不佳。证实了该多肽可被PSA特异性酶切;同时,BH3结构域可通过HIV-TAT的转导作用转入细胞内诱导凋亡。 相似文献
8.
目的:观察放-化疗联合治疗对原发性鼻腔NK/T细胞淋巴瘤的近期疗效。方法:52例确诊为原发性鼻腔NK/T细胞淋巴瘤患者,随机分为治疗组与对照组。对照组接受单纯放疗治疗,治疗组接受放-化疗联合治疗。化疗加放疗1~2个疗程后,在放疗过程中,加用静脉注射左旋门冬酰胺酶每次20mg/m^2。两组患者治疗结束后1个月内评价疗效。结果:治疗组临床疗效明显好转,完全缓解率为73.1%,高于对照组(42.3%),两组比较有显著性差异(P〈0.05)。结论:放-化疗联合治疗原发性鼻腔NK/T细胞淋巴瘤近期疗效较好。 相似文献
9.
背景:细胞干燥保存的研究报道较多,组织器官是否适用于干燥保存,尚缺乏证据。
目的:用海藻糖作为干燥保护剂,优化海藻糖载入大鼠皮肤的条件,探索皮肤干燥保存的可行性。
设计、时间及地点:观察性实验,于2007-11/2008-11在西北大学生命科学学院组织工程实验室完成。
材料:体质量150 g左右成年SD大鼠。海藻糖由Sigma公司提供。
方法:通过控制海藻糖浓度(50,300,500,800,1 000 mmol/L)、负载时间(0.5,4,7,9 h)和温度[4 ℃、4~37 ℃(相转变)和37 ℃],优化海藻糖导入大鼠皮肤的条件。将负载海藻糖的皮肤置于含100 g/L二甲基亚砜的DMEM冷冻液中孵育,程序冷冻仪以1 ℃/min的速率降温至-80 ℃后移入冷冻干燥机中进行冻干。将冻干皮肤水化复苏后分别用双醋酸羧基荧光素(CFDA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测皮肤活性,并以新鲜和甲醛固定皮肤的吸光度值作为阳性和阴性对照。以苏木精-伊红染色和观察皮肤组织结构,并进行自体移植。
主要观察指标:海藻糖在不同加载浓度、孵育温度和时间载入大鼠皮肤的情况。冻干皮肤水化后的形态学、组织学变化及其自体移植后存活情况。
结果:海藻糖浓度小于800 mmol/L,皮肤的海藻糖载入量随海藻糖浓度的升高而明显增(P < 0.05),浓度大于800 mmol/L,海藻糖载入量差异不显著。孵育温度为37 ℃组和相转变组皮肤海藻糖载入量明显高于4 ℃组(P < 0.05),相转变组与37 ℃组差异无统计学意义。皮肤孵育4,7,9 h的海藻糖载入量明显高于孵育0.5 h的载入量(P < 0.05),孵育时间为4,7,9 h之间的海藻糖载入量差异不显著,但孵育7 h后皮肤的海藻糖载入量不再增加。实验以海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37 ℃,孵育时间为7 h为优化的负载条件处理大鼠皮肤。冻干皮肤玻璃化状态良好,呈半透明状。水化后能够恢复到新鲜皮肤的大小和色泽,组织结构和细胞形态与新鲜皮肤组织无差别。冷冻干燥皮肤的活性明显高于甲醛固定的大鼠皮肤 (P < 0.05)。冻干保存的皮肤水化后移植回自体大鼠,可存活长达13 d。
结论:海藻糖可作为干燥保护剂进行大鼠皮肤冷冻干燥保存,海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37 ℃,孵育时间为 7 h是海藻糖载入大鼠皮肤的最佳条件。 相似文献
10.
目的:构建携带人端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)I540-PTD,I540-PTD4融合基因表达框的重组复制缺陷型腺病毒.方法:将pDC315-I540-PTD,pDC315-I540-PTD4与腺病毒基因组质粒pBHGloxdeltaE13Cre共转染HEK293细胞,出现典型的细胞病变反应后收获细胞,反复冻融法制备病毒粗提液,经扩增和纯化获得重组复制缺陷型腺病毒Ad-I540-PTD和Ad-I540-PTD4.使用终点稀释实验和空斑形成实验测定纯化后病毒滴度.采用聚合酶链式反应(PCR)对Ad-I540-PTD,Ad-I540-PTD4进行鉴定.使用病毒感染人骨肉瘤U2OS细胞后,进行免疫组化定性并观察I540-PTD,I540-PTD4的表达情况.结果:共转染10d后,HEK293细胞出现典型的细胞病变反应.经扩增、纯化后,终点稀释法和孔板形成法测定Ad-I540-PTD滴度分别为(8.9×10^12),(6.3×10^12)pfu/L;Ad-I540-PTD4滴度分别为(5.8×10^12),(5.4×10^12)pfu/L.以纯化的病毒为模板,使用自行设计的鉴定引物进行PCR均获得167bp目标片段.抗组胺酸标签抗体对病毒感染后的U2OS细胞免疫组化分析发现Ad-I540-PTD,Ad-I540-PTD4转染的U2OS细胞均呈强染,表明Ad-I540-PTD,Ad-I540-PTD4中携带的I540-PTD,I540-PTD4真核表达读框可在人类细胞内高效表达.结论:成功构建可高效表达I540-PTD,hTERTI540-PTD4的重组复制缺陷型重组腺病毒Ad-I540-PTD,Ad-I540-PTD4,为其作为基因疫苗诱发针对hTERT I540表位的抗瘤免疫奠定了基础. 相似文献