差异表达新基因BQ135232 ORF的分子克隆与真核表达

 目的 研究差异表达新基因BQ135232的结构功能以及真核表达。方法 应用生物信息学方法分析BQ135232 mRNA基因序列，初步了解其基本性状，构建表达载体，转染真核细胞（CHO/dhfr-）。结果 BQ135232具备作为免疫原的基本条件，构建表达载体pcDNA3-BQ-ORF-GPI，成功转染CHO/dhfr-。结论 完成差异表达新基因BQ135232的真核表达，为后续的蛋白功能研究奠定基础。     

新基因BQ135232生物信息学分析及免疫原性研究

目的 研究差异表达新基因的免疫原性,探索其在肿瘤免疫学治疗中的应用价值.方法 应用生物信息学方法,对新基因BQ135232进行分析,初步了解其基本性状;构建表达载体,转染真核细胞,并提取表达产物;表达产物冲击肿瘤患者DC,活化自体淋巴细胞,然后与自体肿瘤细胞共培养,观察杀伤效果.结果 新基因BQ135232位于第12号染色体上,其上有一个开放阅读框架(ORF),编码192个氨基酸肽链--BQ-ORF,BQ-ORF上有2处特异性抗原表位.成功构建表达载体pcDNA3-BQ-ORF-GPI,转染CHO/dhfr-细胞系.经G418,MTX筛选阳性克隆细胞株,提取表达蛋白产物.以提取表达蛋白产物冲击膀胱肿瘤患者体外培养DC,活化自体淋巴细胞,在与白体膀胱肿瘤细胞共培养体系中,可观察到肿瘤细胞变性、坏死.结论 新基因BQ135232表达蛋白具备一定的免疫原性,有可能成为肿瘤生物学治疗的一个新靶点.     

两类移行上皮细胞癌的分子生物学基础

目的　探讨两类移行上皮细胞癌中端粒酶活性和脆性组氨酸三联基因 (FHIT)缺失率 ,从而区别两类移行上皮细胞癌的生物学特性。　方法　采用TRAP HSLC定量检测端粒酶活性 ,原位PCR检测FHIT基因缺失率。　结果　两类移行上皮细胞癌端粒酶活性不同 ,Ⅰ类癌第一主峰面积一般 <30 0 0 ,Ⅱ类癌第一主峰面积往往 >30 0 0 ;Ⅰ类癌FHIT基因表达缺失率为 4 / 15 ,Ⅱ类癌FHIT基因表达缺失率为 8/ 11,阳性率差别具有显著性意义 (P >0 .0 5 )。　结论　两类移行上皮细胞癌具有不同的生物学特性     

外周血中前列腺特异性抗原mRNA表达的临床意义

多年临床实践表明 ,前列腺特异性抗原 (prostaticspecificantigen ,PSA)在前列腺癌的诊断和治疗中有重要作用。但是PSA并不能协助前列腺癌的早期诊断 ,很多患者在确诊时已属晚期 ,这也是前列腺癌治疗效果不尽人意的重要原因之一。为寻找更为准确可靠的前列腺癌诊断指标 ,我们采用RT PCR技术对前列腺癌患者进行研究 ,为前列腺癌转移的分子生物学行为提供理论依据 ,并希望在前列腺癌的诊断方面有所突破。一、资料与方法1.临床资料 :病例组 :选取天津医科大学第二医院和天津市肿瘤医院 2 0 0 1年 2月～ 2 0 0 2年 5月住院前列腺癌患者3 3…     

糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1融合蛋白在CHO/DHFR-细胞的稳定表达

目的建立稳定表达糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B71(GPIB71)的CHO/DHFR-细胞表达体系。方法用Lipofectin介导法将真核细胞高效表达载体pCDNA3GPIB71和pSV40DHFR共转染CHO/DHFR-细胞,经免疫荧光流式细胞术检测,并提取膜蛋白进行Westenblot检测。结果经G418筛选和MTX加压扩增,获得高效表达目的蛋白的细胞株。膜蛋白经WesternBlot检测具有生物活性。结论GPIB71在CHO/DHFR-细胞中高效表达,为临床应用与研究奠定了基础。     

DNA展示技术的原理及应用

分子文库的展示技术是功能基因组学研究中的一个重要工具.为了避免噬菌体展示系统等体内展示技术中体内过程对展示效果的影响,人们陆续开发了多种以基因表达产物与自身DNA模板或mRNA模板特异结合为基础的无细胞展示技术,其中以DNA模板作为展示对象的DNA展示技术不仅在展示库容量方面具有相当的优势,而且操作过程简捷方便,具有广阔的开发和应用前景.