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手足口病CA16型VP1亚单位疫苗的构建制备及免疫原性初步分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 制备CA16型VP1蛋白疫苗并进行免疫原性初步分析,为手足口病CA16疫苗的深入研究提供资料.方法 利用RT-PCR技术获得CA16 VP1基因,克隆到载体pFastBac HT A,与Bacmid DNA重组,转染Sf9昆虫细胞,重组CA16 VP1蛋白与Al(OH)_3佐剂混合制备重组CA16 VP1蛋白疫苗,腹腔免疫BALB/c小鼠,2次免疫后进行免疫效果初步评价.结果 用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western blot法,证明重组CA16 VP1蛋白在昆虫细胞Sf9中得到表达,用ELISA和微量中和法检测到免疫小鼠血清有特异IgG和中和抗体产生,最佳免疫抗原剂量为20μg,其特异IgG效价为1:1600,中和抗体效价为1:250;通过淋巴细胞增殖试验和细胞因子测定,证明诱导T细胞应答,诱发Th1/Th2型免疫应答.结论 CA16 VP1基因克隆成功,并在Sf9昆虫细胞中获得表达,构建的蕈组CA16 VP1亚单位疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为今后研制手足口病CA16疫苗奠定了基础. 相似文献
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目的研究牛磺胆酸对佐剂性关节炎大鼠血清中IgG、细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平的影响,进一步探讨该药物的作用机制。方法用Freund′s完全佐剂复制佐剂性关节炎大鼠模型,观察牛磺胆酸对大鼠足肿胀的作用;检测药物对大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响。结果与模型组比较,牛磺胆酸促进佐剂性关节炎大鼠足肿胀,显著提高IgG、IL-1β、IL-6的含量,而对TNF-α含量则无影响。同时对免疫器官胸腺和脾脏的重量无影响。结论牛磺胆酸可增强佐剂性关节炎大鼠的免疫功能,对细胞因子的生成有调节作用。 相似文献
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采用大鼠足跖肿胀法和紫外可见光光度法,研究了天然牛黄,胆红素含量不同的培植牛黄以及鸡胆汁对大鼠角叉菜胶性和甲醛性的足跖肿胀率和炎性组织中PGE2含量的影响。结果表明,天然牛黄,中胆红素培植牛黄,低胆红素培植牛黄和鸡胆汁均能显著地抑制角叉菜胶和甲醛致炎后的大鼠足跖肿胀和炎性组织中的PGE2含量。 相似文献
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目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对氧糖剥夺/复供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)所诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法以连二亚硫酸钠合并无糖Earle’s液造成氧糖剥夺,继而恢复为完全培养基以建立体外OGD/R模型,以Hoechst33342/PI双染及流式细胞术观察细胞受损和凋亡情况;以JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(mitochondrial membranepotential,MMP);以Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果 PGSF可明显改善细胞形态并降低细胞受损和凋亡百分率,抑制MMP水平的降低,增加Bcl-2/Bax表达比值。结论 PGSF对OGD/R诱导的PC12细胞凋亡具有明显抑制作用,机制与其调节Bcl-2和Bax的表达及稳定MMP有关。 相似文献
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目的:按6.82 mg/(kg·bw)大鼠单剂量口服臭豆碱,用反相离子对高效液相色谱方法,测定大鼠肾组织中不同时间点臭豆碱的浓度。方法:高效液相色谱法,色谱柱为大连产HYP-ODS柱(200 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃;流动相由水相-异丙醇-乙腈(150∶15∶20体积比)组成。水相部分每1000 mL中含SDS 0.5g,三乙胺3.5 mL,85%磷酸2 mL(用三乙胺调至PH 3.0);流速1.0 mL·min-1紫外检测波长309 nm。结果:经DASver1.0药代动力学软件处理数据,臭豆碱在肾组织符合一室模型,其动力学参数为:Tmax(60)min,Cmax(13747.80)μg/L,T1/2(113.34)min,T1/2ka(16.19)min,AUC(3033978)μg/L·min,Vd/F(16.193 L/kg),CL/F(0.005)L/min/kg。结论:臭豆碱灌服后,可迅速分布到肾脏,具有消除快、蓄积时间短的特点。 相似文献
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目的:观察活性炭纳米粒子(activated carbonna noparticles,ACNP)吸附5-Fu在体内外对5-Fu肿瘤作用的影响,探讨ACNP的作用机制。方法:用紫外分光光度法检测ACNP对5-Fu的吸附性能;分别采用MTT实验和S180小鼠、H22小鼠动物肿瘤模型观察了ACNP在体外和体内对5-Fu抗肿瘤作用的影响;采用流式细胞术测定ACNP对细胞周期的影响;采用甲基绿-派洛宁染色法观察ACNP对细胞凋亡的影响。结果:ACNP在常温下对5-Fu有良好的吸附性能,符合经验公式M=0.295C1.919;ACNP吸附5-Fu后对BGC-823的抑制生长作用显著高于相等浓度的5-Fu组,有良好的量效及时效关系;ACNP吸附5-Fu后对S180小鼠的抑瘤率及对H22小鼠的生命延长率均显著高于含药量相等的5-Fu组;ACNP可以将BGC-823细胞阻滞在S期、与5-Fu合用可以诱导BGC-823的早期凋亡。结论:ACNP吸附5-Fu具有显著的体内外抗肿瘤活性,与5-Fu合用诱导细胞早期凋亡,将细胞周期阻滞在S期,ACNP的载体效应可能是增强5-Fu药理学作用的机制之一。 相似文献
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目的:研究新肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的制备方法。方法:依据昆虫细胞偏爱密码子优化EV71 P1和EV71 3CD基因,将二者分别克隆至供体质粒pFastBac Dual多角体蛋白启动子pPh和pP10上;构建重组pFastBac Dual EV71 P1-3CD质粒,并与Bacmid质粒转座后,获得重组杆状病毒表达质粒转染至Sf9细胞,应用PCR、免疫荧光、SDS-Page和Western blot方法鉴定EV71 VLPs表达情况,最后利用蔗糖密度梯度离心的方法纯化EV71 VLPs。结果:经昆虫密码子优化的EV71 P1和EV71 3CD基因,利用Bac-to-Bac系统成功组装了EV71 VLPs,纯化EV71VLPs的浓度为0.817 mg/ml,纯度>90%。结论:成功地构建了重组杆状病毒EV71 P1-3CD Bacmid表达质粒,并表达和纯化了EV71 VLPs,这为今后EV71 VLPs疫苗的研究奠定了基础。 相似文献