NF-κB/p65特异的RNAi腺病毒载体的构建及其对p65表达的抑制效应

目的构建NF-κB p65亚基特异的RNA干扰（RNAi）腺病毒表达载体，并验证其对p65亚基的基因沉默效应。方法设计合成三对针对p65 mRNA不同位点的短发夹RNA（shRNA）编码序列，克隆到穿梭载体中，通过体外同源重组将短干扰RNA（siRNA）表达盒转移到腺病毒骨架质粒，构建RNAi腺病毒表达载体；在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法进行病毒滴度测定；腺病毒感染人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞，Western印迹法和免疫细胞化学法验证构建的RNAi腺病毒对p65蛋白表达的抑制效应。结果成功构建了NF-κB p65亚基特异的RNAi腺病毒表达载体，获得高滴度的腺病毒液；RNAi腺病毒感染ECV304细胞后可以高效抑制p65蛋白的表达，且对p65蛋白表达的抑制作用可持续6d以上。结论应用RNAi腺病毒表达载体能有效阻断目的基因的表达。     

甲状腺过氧化物酶抗体在甲状腺疾病中的应用价值

目的：观察不同甲状腺疾病以及自身免疫性甲状腺疾病（AITD）不同临床阶段患者血清甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）浓度的变化,进而探讨其临床应用价值。方法选取2012年3月~2013年3月在本院内科住院治疗的甲状腺疾病患者共175例,其中结节性甲状腺肿38例、弥漫性毒性甲状腺肿37例、单纯性甲状腺肿35例、亚急性甲状腺炎10例、慢性淋巴细胞性甲状腺炎45例、甲状腺良性肿瘤10例;取健康志愿者35例作为对照组。通过化学发光法测定各组TPOAb以及不同组患者血清中TPOAb的浓度及阳性发生率。结果结节性甲状腺肿、单纯性甲状腺肿与弥漫性毒性甲状腺肿患者血清中TPOAb浓度及阳性率均高于亚急性甲状腺炎和慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论ATD患者中的TPOAb浓度明显升高,TPOAb浓度大小对对ATD的诊断有一定的参考价值。     

脑脊液腺苷脱氨酶测定在诊断结核性脑膜炎中的价值

目的:探讨腺苷脱氨酶(ADA)测定在结核性脑膜炎诊断中的意义.方法:对2004年4月～2008年4月收治的共90例结核性脑膜炎患者,脑脊液均检测ADA,以ADA＞33U/L作为阳性阈值,同时完善其他相关检查.结果:所有患者中脑脊液ADA>33IU/L达90%(81例).结论:脑脊液ADA测定对结核性脑膜炎的诊断有很高的临床价值,在男、女性之间无明显差别,其检测方法简便,诊断的敏感性高于其他实验室及器械检查,值得推广做为常规检测.     

超声探测甲状腺结节内钙化的临床意义

近年研究发现高频超声探测甲状腺结节内钙化对良恶性病变的诊断有重要意义.     

妊娠糖尿病患者血清脂联素表达及与炎症因子、胰岛素抵抗关系

目的:探讨血清脂联素(APN)在妊娠糖尿病患者中的表达特征及其与炎症因子、胰岛素抵抗的关系。方法:选取118例孕妇和50例非妊娠妇女,分别纳入观察组与对照组。观察组孕妇根据糖耐量测试结果分为糖尿病组(50例)与非糖尿病组(68例)。对所有研究对象进行血清APN、肿瘤坏死因子α(INF-α)、白介素-6(IL-6)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平。对比并分析血清APN与炎症因子及HOMA-IR的关系。结果:观察组hs-CRP、IL-6、TG、HOMA-IR、TNF-α水平均高于对照组,APN水平低于对照组(P0.05)。妊娠糖尿病组的hs-CRP、IL-6、HOMA-IR、TNF-α水平均高于妊娠非糖尿病组,APN水平低于妊娠非糖尿病组(均P0.05),两组TG水平比较无差异(P0.05)。spearman相关分析结果显示,APN与IL-6、hs-CRP、TNF-α、HOMA-IR均呈负相关(P0.05)。结论:妊娠糖尿病孕妇的血清APN表达下调,可造成炎症反应失衡,引起胰岛素抵抗,其与炎症因子、胰岛素抵抗存在着负相关关系。     

NF-κB信号通路对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用

目的 研究高糖尤其是波动性高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的影响,以及NF-κB信号通路在高糖诱导HUVEC凋亡中的作用。 方法 构建针对NF-κBp65 mRNA序列1566位点的重组RNAi腺病毒表达载体,并利用RNAi腺病毒抑制HUVEC p65表达。应用流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）研究NF-κB信号通路在高糖诱导HUVEC凋亡的作用。 结果 高糖（20.5 mmol/L或30.5 mmol/L）可以促进HUVEC凋亡。NF-κBp65 特异腺病毒感染HUVEC后,可以明显抑制高糖刺激的NF-κBp65核蛋白转录,使核内p65蛋白表达处于基础水平。TUNEL结果示高糖作用后5 d,高糖组细胞凋亡率显著高于正常葡萄糖组（25.81％±1.77％比8.20％±0.63％,P < 0.05）,Ad-DEST＋高糖组（26.10％±0.98％）与单独高糖组的细胞凋亡率差异无统计学意义（P > 0.05）。Ad-1566＋高糖组的细胞凋亡率（11.49％±0.92％）比Ad-DEST＋高糖组显著下降（P < 0.01）。TUNEL法及流式细胞术检测结果均显示NF-κBp65 特异腺病毒可以降低高糖诱导的HUVEC凋亡。结论 高糖可以促进HUVEC凋亡。腺病毒感染HUVEC可以明显抑制高糖刺激的NF-κBp65核转录,从而保护高糖作用的HUVEC凋亡。     

2型糖尿病周围神经病变患者的血脂分布情况及相关危险因素分析

目的探讨高密度脂蛋白对2型糖尿病周围神经病变患者的影响。方法选择2008—2012年本院收治的80例2型糖尿病伴神经周围病变患者作为研究组,另外随机选取80例无周围神经病变的2型糖尿病作为对照组,对比分析2组患者的一般资料及血糖血脂指标。结果研究组有糖尿病家族史者多于对照组（P〈0．05）,病程明显较对照组长（P〈0．05）。2组Hb舢C、FBG、TC水平差异无统计学意义（P〉0．05）;研究组HDL、HDL2、HDL3均低于对照组,LDL、LDLa、TG高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。多因素Logistic回归分析结果显示：病程（B=2．417,OR=9．996）和HDL2（p=-1．336,OR=6．752）是糖尿病患者周围神经病变的独立危险因素（P〈0．05）。结论糖尿病患者发生周围神经病变可能与病程及HDL2水平下降有关,对于以上类型患者应进行综合性调脂治疗,从而防治周围神经病变。     

甲状腺结节1051例回顾性分析

甲状腺结节是临床常见的疾病.本研究回顾性总结我院手术治疗的甲状腺结节病例资料,以期为甲状腺结节的诊断和处理提供参考.     

PKB/Akt-NF-κB通路与糖尿病血管内皮细胞功能的调节

糖尿病血管病变是糖尿病患者致死率和致残率增高的最主要原因。血管内皮细胞是介于循环血液和管壁之间的第一道屏障,与糖尿病血管病变的病理生理联系尤为密切。蛋白激酶B(PKB)/Akt、核因子(NF)-κB是细胞内重要的信号分子,它们之间相互作用、相互影响,在血管内皮细胞中协同调控内皮细胞的炎症、凋亡、增殖等。本文对PKB/Akt-NF-κB的关系及其对糖尿病血管内皮细胞功能的调节作一综述。     

用RNA干扰腺病毒载体研究Wnt/β-连环蛋白信号途径对人甲状腺细胞增殖的影响

目的 以糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)特异的RNA干扰(RNAi)腺病毒表达载体作为研究工具,从转录后水平抑制GSK-3β基因表达,探讨Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路对人甲状腺细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)腺病毒表达载体,在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度;RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞,Western印迹法检测其对GSK-3β蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi腺病毒抑制GSK-3β表达,BrdU法检测原代培养人甲状腺细胞增殖活性.结果 成功构建了GSK-3β特异的RNAi腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液;RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞后,GSK-3β蛋白的表达受到明显抑制,β-catenin蛋白表达显著增加(1.324±0.057 vs 0.935±0.029,P<0.05);腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞1、3、5、7 d后,RNAi腺病毒组比空病毒组细胞增殖率明显增加(1.473±0.035 vs 1.312±0.043、1.226±0.045 vs 0.959±0.066、0.776±0.041 vs 0.605±0.054、0.337±0.018 vs 0.259±0.021,P<0.05).结论 构建的目的RNAi腺病毒表达载体能有效抑制GSK-3β基因的表达;Wnt/β-catenin信号通路在人甲状腺细胞的增殖中有重要影响.