C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的改良和鉴定

目的 建立一种体外纯化及培养扩增C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的简单有效方法.方法 利用骨髓MSCs在体外培养皿中培养时具有贴壁生长的特性,采用全骨髓法分离培养C57/BL6小鼠MSCs,通过体外培养和连续传代达到纯化和扩增MSCs目的,并与以优化.倒置显微镜下观察细胞形态变化情况;利用四唑盐比色(MTT)法测定MSCs的生长曲线;流式细胞仪(FCM)鉴定MSCs膜抗原.结果 C57/BL6小鼠胫骨全骨髓细胞在分离后与含15％优质胎牛血清DMEM/F12培养基混合,约5～10 min后即可见大量有核细胞贴壁,细胞形态为圆形,24～48 h后可见贴壁细胞转变为椭圆形、多角形及短梭形,7～12 d时细胞呈长梭形并达到90％单层融合.通过传代细胞进一步纯化及扩增.细胞传代后2d内处于潜伏期,3d后进入生长期,5d后进入平台期.第4代MSCs进行FCM检测CD45、CD44、CD29和CD54阳性率分别为2.4％、83.2％、95.1％和94.1％.激光免疫共聚焦结果显示造血细胞表面标物CD34和CD45阴性,而CD44和CD105阳性.结论 C57/BL6小鼠全骨髓贴壁法能有效得到分离纯化的MSCs,用此方法培养的C57/BL6小鼠MSCs生长稳定,增殖能力活跃,具有MSCs的一般生物学特性,可以为组织工程提供理想的种子细胞.     

C57/BL6小鼠急性心肌梗死模型制备方法的总结与改良

目的对C57/BL6小鼠急性心肌梗死模型建立方法进行总结和改良,以提高建模可靠性、稳定性及可重复性,减少死亡率。方法40只C57/BL6小鼠,腹腔内注射苯巴比妥钠全身麻醉后气管切开并插管,小动物呼吸机辅助呼吸。常规消毒铺巾后,切开左胸前区皮肤,经左侧第3、4肋间进入胸腔暴露心脏,左前降支冠状动脉结扎造成急性心肌梗死。对围手术期可导致失败和死亡的原因如麻醉、人工辅助呼吸、开胸过程及结扎冠状动脉位置等进行分析和改进。结果成功建立了C57/BL6小鼠急性心肌梗死模型。术后24hC57/BL6小鼠存活率为95%,4周时存活率为92.5%。结论通过方法改进,能快速有效地建立C57/BL6小鼠急性心肌梗死模型,并降低建模过程中C57/BL6小鼠的死亡率。     

CM-DiI标记在小鼠骨骼肌卫星细胞移植治疗心肌梗死中的示踪研究

目的探讨 CM-DiI 标记小鼠骨骼肌卫星细胞后移植治疗心肌梗死的体外体内示踪作用。方法 CM-DiI 标记提纯后小鼠骨骼肌卫星细胞,检测标记率及荧光情况,观察 CM-DiI 对细胞增殖分化的影响。小鼠心梗模型心肌内注射标记后的卫星细胞,于移植后 1、3、7、14、21、28 天取出心脏行冰冻切片,观察移植细胞在体存活分化情况。结果 CM-DiI 标记骨骼肌卫星细胞效率达 (93.3±0.95)%,3 代后仍保持红色荧光,对细胞增殖及分化无明显影响。标记细胞移植 1 天后即可见细胞团聚,3 天后细胞排列整齐,4 周后仍可见移植细胞。结论 CM-DiI 细胞标记液标记骨骼肌卫星细胞,安全简单,并可示踪移植后细胞的存活分化情况。     

磷脂组成对莪术油脂质体性质的影响

目的:研究磷脂组成对莪术油脂质体药剂学性质的影响.方法:香草醛硫酸显色法测定莪术油的含量;乙醇注入法制备莪术油脂质体;葡聚糖凝胶柱法测定包封率.比较了不同磷脂组成莪术油脂质体的粒径、电位、包封率、稳定性等药剂学性质.结果:葡聚糖凝胶柱层析可完全分离含药脂质体与游离药物,上柱回收率为(100.09±3.37)%(n=5).莪术油氢化大豆磷脂(HSPC)脂质体的载药效果和沉降稳定性最差.莪术油复合磷脂脂质体的包封率与普通大豆磷脂(SPC)脂质体相当,但沉降和泄漏稳定性明显优于SPC脂质体.结论:复合磷脂脂质体作为莪术油的载体能够显著改善其稳定性.     

小鼠成体骨骼肌卫星细胞提取及纯化方法的改进

目的建立一种快速高效的小鼠成体骨骼肌卫星细胞的提取、纯化的实验方法。方法通过布比卡因预处理激活肌卫星细胞,48小时后,以混合酶一步消化法及改良纯化法从成年骨骼肌中分离高纯度卫星细胞,并与普通差速贴壁法、反复差速贴壁法及Percoll非连续密度梯度离心法等纯化方法相比较。结果通过改良提取、纯化法所得到的骨骼肌卫星细胞纯度可达到(82.53±3.16)%,明显高于普通差速贴壁法、反复差速贴壁法及Percoll非连续密度梯度离心法(P<0.05),并具有很好的增殖及分化能力。结论通过采用改良成体骨骼肌卫星细胞提取及纯化法,能快速高效地获取高纯度肌卫星细胞。     

星点设计-效应面法优化虎杖姜炙炮制工艺

目的：采用星点设计-效应面法对姜炙虎杖的炮制工艺进行优化,为姜炙虎杖炮制规范提供科学依据。方法：以姜汁用量、炒制温度、炒制时间为自变量,以虎杖苷、白藜芦醇、大黄素的综合评分作为指标,采用Design Expert进行二次项回归拟合,优选最佳工艺并验证。结果：效应面优化后,姜炙虎杖的最佳炮制工艺为姜汁用量17%,炒制温度240℃,炒制时间11 min。结论：优化姜炙虎杖炮制工艺时采用星点设计-效应面法,得到的模型具有较高拟合度,预测性良好。