HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155真核重组载体构建

目的分别构建人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白、羧基端截断的中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,以便进一步研究其转录激活功能及对宿主细胞信号传导通路的影响。方法设计合成3对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBVX基因、MHBst78与MHBst155编码基因片段;用HindⅢ,KpnⅠ双酶切HBVⅩ基因;用HindⅢ和BamHⅠ双酶切MHBst78与MHBst155编码基因片段后,分别定向插入到真核表达载体pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切重组体显示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBVX基因、羧基端截断的HBV中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,为进一步研究HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155对宿主细胞信号转导通路的影响奠定基础。     

针刺治疗50例血管性头痛疗效观察

血管性头痛是临床常见的一种疾病，单纯西药治疗效果不佳．且停药后易复发。笔者采用中医针刺治疗50例，取得一定的疗效。现报告如下：     

用异体牙冠修复后牙牙冠大面积缺损的初步体会

1991年以来,我们采用异体牙冠修复后牙牙冠严重的缺损,收到良好的效果,现将经过一年以上随访观察的6个病例修复情况报道如下。临床资料下颌第一磨牙3例,上颌第一磨牙2例,上颌第2双夹牙1例。牙冠缺损均在2/3以上。各壁均在龈上,全部经根管治疗观察2周无不良反应后,采用2个以上桩针固位修复。材料来源:1.正畸时拔除的异体牙。2.牙周病无法保留而拔除的牙;3.无功能而拔除的牙;4.外伤性根折而牙冠完整,无法再植或粘接的离体牙。     

荧光定量逆转录聚合酶链反应在HCV感染检测中的应用

目的 了解荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)在丙型肝炎病毒(HCV)感染中的临床应用价值。方法 用FQ-RT-PCR检测63份怀疑HCV感染的临床样本，并同时采用酶联免疫吸附试验(ELIA)检测抗HCV，用全自动生化检测仪测定丙氨酸转氨酶(ALT)水平，了解样本中HCV-RNA含量与抗HCV及ALT的相关性。结果 63份样本中有40份HCV-RNA含量高于80拷贝／ml，57份抗HCV阳性，26例ALT异常，经统计分析每两者间具有明显相关性。结论FQ-RT-PCR技术检测HCV-RNA特异性强，灵敏度高，具有良好的应用价值。     

几种性传播疾病病原体检测芯片的制备

目的 :为了同时多样本检测和鉴别淋病奈瑟球菌、沙眼衣原体和解脲脲支原体 3种重要的性传播疾病病原体 ,制备了寡核苷酸检测芯片。方法 :针对 3种病原体和荧光素酶基因设计特异的引物和寡核苷酸探针 ,采用硫代和氨基双功能探针修饰技术制备寡核苷酸芯片 ,以荧光标记多重不对称PCR技术为基础 ,通过将单链PCR产物与芯片杂交实现对性传播疾病病原体的检测。结果 :对 10种与待检病原体无关的菌及定量有限稀释的荧光素酶和 3种病原体基因质粒模板进行芯片检测 ,结果表明芯片对待检病原体特异 ,其检测 4种基因的灵敏度均为 5×10 3 拷贝质粒。对 2 4份性传播疾病患者标本进行芯片检测 ,沙眼衣原体感染率为 10 0 % ,与淋病奈瑟球菌混合感染率为 83.3% (2 0 / 2 4 ) ,与传统PCR诊断结果完全一致。在 2 4份标本中 ,淋病奈瑟球菌、沙眼衣原体和解脲脲支原体三重感染病例芯片诊断为 3例 ,混合感染率为 12 .5 % (3/ 2 4 ) ;而传统PCR诊断为 4例 ,混合感染率为 16 .7% (4/2 4 ) ,两种方法的符合率为 75 %。结论 :该芯片是一种可靠检测 3种病原体的方法 ,它可快速提供有关患者混合感染的情况 ,因而为指导个性化治疗提供及时可靠的诊断依据。     

基因芯片技术鉴定出血性大肠杆菌O157∶H7和霍乱弧菌O139

目的:建立一种同时快速检测肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7和霍乱弧菌O139的基因芯片,并验证该芯片的特异性和敏感性。方法:选择EHEC O157∶H7的产志贺样毒素基因stx1、stx2和β-葡糖醛酸糖苷酶基因(u idA);霍乱弧菌O139的肠毒素A亚单位(ctxA)、毒力协调菌毛A亚单位(tcpA)、糖基转移酶(glycosotransferaseLPSgt)基因序列分别设计引物和探针,反向引物用荧光素Cy3标记,探针在3′端氨基修饰。在优化的PCR和杂交反应条件下,分别进行三重PCR扩增,产物混合后与芯片进行杂交,产生特异性荧光信号,进一步筛选探针。随后将筛选出的探针制备芯片用于检测临床样本。结果:PCR产物在相应探针处均产生特异性杂交信号,临床样本检测结果表明,此芯片比常规细菌学检测方法灵敏。结论:所研制的同时定性检测EHEC O157∶H7和霍乱弧菌O139的基因芯片是特异、灵敏而且快速的,为这两种肠道致病菌感染的快速诊断提供了新的方法。     

全国卫生经济学教学研讨会纪要

笔者徐文思、阎维君记叙了我国第一次卫生经济学教学研讨会的基本内容。来自全国各地院校的卫生经济学老、中、青教师聚集一堂,共研教学,交流经验,对提高教学质量,加强师资队伍建设有着十分重要的意义。会议认为,我国卫生经济学师资队伍已初具规模,但其数量严重不足,素质有待提高,远不能适应事业发展的需要。加强师资队伍建设迫在眉睫。这是提高卫生经济学教学质量的关键。会议还对师资队伍、教材、教学资料建设等方面的问题,提出了不少建设性意见。     

应用张力带钢丝治疗髌骨骨折62例

近年来，随着生物力学研究的不断发展和进步，骨科应用生物力学原理进行治疗的方法也越来越多。其中以张力带治疗骨折应用最多。我院1994—2003年应用张力带钢丝治疗髌骨骨折62例，现报告如下。     

肝穿刺108例组织病理与临床分析

我科于1993年1月～1994年1月对108例肝病患者进行肝穿组织病理检查,现将临床与病理诊断分析如下。     

微小RNA-23b-3p通过靶向TGFBR3促进人心房肌成纤维细胞纤维化相关基因表达

目的:探究微小RNA-23b-3p(mi R-23b-3p)对人心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用及其可能作用靶基因。方法:分离并体外培养房颤患者心耳中原代心房肌成纤维细胞,并用细胞免疫荧光染色实验鉴定;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-23b-3p与潜在靶基因转化生长因子β受体3(TGFBR3) 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用; CCK-8、Ed U染色及Transwell实验检测细胞活力、增殖及迁移能力,RT-qPCR和Western blot法检测TGFBR3及纤维化相关基因的m RNA和蛋白表达。结果:在人心房肌成纤维细胞中过表达mi R-23b-3p不影响细胞的活力、增殖及迁移能力,但可显著增强细胞中纤维化相关基因COL1A1、COL3A1和ACTA2的表达(P 0. 05或P 0. 01)。双萤光素酶报告基因实验显示mi R-23b-3p与TGFBR3 3'-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot结果证实mi R-23b-3p可在转录水平抑制TGFBR3表达。过表达mi R-23b-3p和沉默TGFBR3均能显著促进人心房肌成纤维细胞中Smad3激活和纤维化相关基因表达(P 0. 05或P 0. 01)。结论:TGFBR3是mi R-23b-3p的作用靶基因,并介导mi R-23b-3p促进心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。