miR-29b介导的TGF-β/Smad信号通路对大鼠肝纤维化进程的影响

目的:初步研究微小RNA-29b(mi R-29b)介导的TGF-β/Smad信号通路在肝星状细胞(HSC)活化中的作用及其对大鼠肝纤维化进程的影响。方法:构建肝纤维化大鼠模型并分离其HSC,同时通过体外获取并鉴定正常大鼠HSC。运用RT-qPCR和Western blot检测以上获取细胞中mi R-29b、TGF-β/Smad信号通路相关蛋白和肝纤维化标志蛋白的变化水平,并通过双萤光素酶报告基因检测系统鉴定mi R-29b对TGF-β1的直接靶向结合情况。结果:随着HSC活化加深,mi R-29b的表达量逐渐减少(P 0. 01),而HSC活性标志物I型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达量逐渐增加(P 0. 01)。在TGF-β/Smad信号通路中,Smad2/3/4的表达显著增加,而Smad7的表达明显下降(P 0. 01)。双萤光素酶报告基因检测结果显示,mi R-29b可直接结合于TGF-β1 3’UTR的"UCUCUCCGU"序列,表明TGF-β1为mi R-29b的一个下游靶基因。结论:mi R-29b可参与抑制HSC的活化和迁移,进而抑制肝纤维化进程,而其生物学功能可能是通过直接靶向抑制TGF-β1进而调控TGF-β/Smad信号通路实现的。     

应用温水灌注改良结肠镜插入方法140例临床分析

结肠镜检查是大肠疾病患者应用最广泛的检查方法.与钡餐造影和胶囊内镜检查比较,结肠镜检查具有省时、省力、省钱的特点,而且结肠镜下可以比较直观地发现病灶,必要时可同时进行内镜下治疗及活检.因此,结肠镜检查广泛应用于临床.但进行内镜检查时的不适感使多数患者存在顾虑.温水灌注法结肠镜检查是指在结肠镜检查时注入温水,此操作方法是否比普通注气法优越有待进一步研究.我们对结肠镜检查的操作方法进行改进,并对其临床疗效进行观察.     

促动力药联合微生态制剂对便秘患者结肠镜检查前肠道准备的效果分析

目的:研究提高便秘患者结肠镜检查前肠道准备效果的方法。方法:观察组A组检查前3天服用莫沙必利,5 mg,tid,酪酸梭菌散剂1 g,tid,检查前6 h服用复方聚乙二醇电解质散溶液2 L;观察组B组检查前3天服用莫沙必利,5 mg,tid,检查前6 h服用复方聚乙二醇电解质散溶液2 L;对照组检查前6 h服用复方聚乙二醇电解质散溶液2 L。结果:观察组A组86例,优良81例;B组82例,优良74例;对照组80例,优良56例。结论:促动力药联合微生态制剂可明显改善便秘患者结肠镜检查前肠道准备的效果,且不良反应显著降低。     

多种人结肠癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株的建立及耐药机制初步研究

目的:通过建立多种5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的人结肠癌细胞株,探讨耐药的结肠癌细胞的生物学特性与耐药机制。方法:选用人结肠癌HT-29、LoVo和SW480细胞,通过高浓度5-FU反复接触结合药物浓度递增法建立耐药株HT-29/5-FU、LoVo/5-FU和SW480/5-FU。不同浓度5-FU作用所建立的耐药细胞株及其亲本细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、qRT-PCR、Westernblot检测细胞对5-FU的敏感性、周期分布、耐药相关分子[P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、ATP结合盒超家族G成员2(ABCG2)]及第十号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)与蛋白激酶B(Akt)的mRNA和蛋白的表达,并用Akt活性检测试剂盒检测细胞Akt活性。结果:与各自的亲本细胞比较,构建的HT-29/5-FU、LoVo/5-FU和SW480/5-FU对5-FU的IC50均明显升高(均P0.05),耐药指数分别为7.213、5.849和15.940。随着5-FU处理浓度的升高,亲本细胞和耐药细胞G0/G1期细胞数量均明显增加(均P0.05),但同一浓度5-FU处理下,各耐药株G0/G1期细胞数量均明显少于其对应亲本株(均P0.05)。与各自的亲本细胞比较,对应耐药株的P-gp、MRP1、ABCG2、Akt的mRNA和蛋白表达水平均明显升高,而PTEN表达均明显降低(均P0.05),且Akt活性均明显提高(均P0.05)。结论:成功建立了结肠癌5-FU耐药细胞株,其耐药机制可能与PTEN下调所致的PI3K/Akt降低PI3K/Akt通路活化有关。     

CDH17 对那可丁耐药性结肠癌细胞 裸鼠移植瘤模型的影响

目的 研究下调肝肠钙黏连蛋白（CDH 17）基因对那可丁耐药的结肠癌细胞裸鼠移植瘤模型的 影响。方法 以结肠癌细胞为研究材料,复制结肠癌细胞裸鼠移植瘤模型。同时构建干扰质粒,从基因和 蛋白水平对CDH17 进行干扰,成功构建慢病毒载体。通过转移酶介导的末端标记法（TUNEL）检测下调 CDH 17 基因对结肠癌细胞的影响。结果 实时聚合酶链反应和Western blot 检测证实成功构建CDH17 的干 扰表达载体;TUNEL 检测表明下调CDH 17 基因可以促进对那可丁耐药的结肠癌细胞裸鼠移植瘤模型细胞凋 亡。结论 下调CDH 17 基因可以促进那可丁耐药性结肠癌细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

那可丁对人结肠癌5-Fu耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu耐药性的影响

目的 探讨那可丁（Nos）对人结肠癌5-氟尿嘧啶（5-Fu）耐药株耐药性的影响及其机制。方法 构建人结肠癌耐药株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu，MTT法筛选出Nos对各组细胞的半数抑制浓度（IC50），观察细胞形态变化，利用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡水平；RT-qPCR及Western blot检测细胞P38表达和激活水平，以及耐药相关蛋白的表达。结果 成功构建耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu和SW480/5-Fu。与对照组比较，Nos干预后的结肠癌耐药细胞株HT-29/5-Fu、LoVo/5-Fu及SW480/5-Fu细胞周期明显阻滞在G₀/G₁期（P<0.01），凋亡率升高，而P38表达及磷酸化受到显著抑制（P<0.01），与耐药相关的多药耐药相关蛋白、肺耐药相关蛋白及P-glycoprotein表达显著降低（P<0.01）。结论 Nos对耐5-Fu的人结肠癌细胞具有一定的毒性作用，降低了耐药细胞耐药性，作用机制可能与抑制P38的表达和磷酸化有关。     

那可丁通过下调钙黏素17 及Wnt3a/β -catenin 信号通路抑制结肠癌SW480 细胞迁移

[摘要] 目的: 探讨那可丁（Nos）对结肠癌SW480 细胞钙黏素17（CDH17）表达的影响及其对细胞迁移的作用机制。方法:选用SW480 细胞,分为对照组、空载组（si-EV）、CDH17 干扰组（si-CDH17）、Nos 处理组和CDH17 干扰+Nos 处理组（si-CDH17+Nos）,其中CDH17 干扰采用小干扰RNA（siRNA）敲低CDH17 水平,Nos 处理使用半数抑制质量浓度（55.30±2.21）μg/ml。用qPCR检测SW480 细胞CDH17 mRNA表达水平,用Hoechst33258 染色法和Transwell 实验检测细胞的凋亡和迁移能力,用ELISA检测细胞中VEGF、MMP2 和MMP9 含量,用WB检测细胞CDH17、Wnt3a 和β-catenin 蛋白表达水平。结果: 与对照组相比,Nos组、si-CDH17 组和si-CDH17+Nos 组的CDH17 mRNA及蛋白表达水平明显降低（均P<0.01）,细胞凋亡增加、迁移能力减弱,细胞中VEGF、MPP2 和MPP9 含量及Wnt3a 和β-catenin 蛋白表达水平显著降低（均P<0.01）,且si-CDH17+Nos 组比si-CDH17 组效果更显著（P<0.01）。结论: Nos 可诱导人结肠癌SW480 细胞凋亡、抑制其迁移能力,其机制可能与下调CDH17 表达抑制Wnt3a/β-catenin信号通路有关。     

质子泵抑制剂与小肠细菌过度生长的相关性及双歧杆菌三联活菌胶囊疗效观察

[目的]探讨质子泵抑制剂(proton pump inhibitors,PPIs)与小肠细菌过度生长(small intestinal bacterial overgrowth,SIBO)发生的相关性,并初步研究双歧杆菌三联活菌胶囊对SIBO的治疗效果。[方法]选择2016-06-2018-06期间在我科就诊服用常规剂量PPI但不同疗程(分别为4周、8周、12周)的反流性食管炎患者80例为研究对象,通过乳果糖氢气呼气试验(LHBT)诊断SIBO。所有患者在受试前均完成LHBT检测,比较受试前及应用不同疗程PPI后患者SIBO的发生率,并将48例SIBO阳性者随机分成益生菌组(服用双歧杆菌三联活菌)及对照组(服用安慰剂淀粉),均为胶囊制剂,3次/d,每次2粒,疗程为28 d,比较2组患者治疗前后SIBO阳性转阴率、治疗有效率之间的差异。[结果]80例患者受试前SIBO发生率为13.75%(11/80),38例PPI应用4周患者SIBO发生率为42.11%(16/38),24例PPI应用8周患者SIBO发生率为70.83%(17/24),18例PPI应用12周患者SIBO发生率为83.33%(15/18),组间比较差异有统计学意义(P0.05)。益生菌组、对照组SIBO阳性者转阴率分别为54.17%、16.67%,2组比较差异有统计学意义(P0.05);益生菌组、对照组临床症状治疗有效率分别为83.33%、41.67%,2组比较差异有统计学意义(P0.05)。[结论]长期应用PPI可导致SIBO的发生,且PPI使用时间与SIBO阳性率呈正相关,应用益生菌治疗可以纠正SIBO。