成纤维细胞Ⅰ型胶原基因shRNA载体的构建及干扰效果

目的 构建有效针对人成纤维细胞Ⅰ型胶原基因的shRNA干扰载体,检测RNA干扰后对病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响.方法 设计合成4对针对人Ⅰ型胶原基因的shRNA靶序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4),将合成的shRNA片段通过重组技术克隆到真核表达载体pmU6,经酶切与测序验证表明成功构建针对人Ⅰ型胶原基因的shRNA干扰载体(Col-shRNA1、Col-shRNA2、Col-shRNA3、Col-shRNA4),并将该干扰载体与空载体分别通过脂质体转染人的病理性瘢痕成纤维细胞(依次为Col-shRNA1组、Col-shRNA2组、Col-shRNA3组、Col-shRNA4组、空载体转染组),另选未处理的成纤维细胞作为空白对照组,采用RT-PCR与羟脯氨酸含量测定试剂盒检测该干扰载体的干扰效应.结果 酶切与测序结果表明成功构建了针对人Ⅰ型胶原基因的shRNA干扰载体.Ⅰ型胶原基因mRNA的相对表达水平在空白对照组与空载体转染组之间差异无统计学意义(P＞0.05);而干扰组Col-shRNA(1～4)与空载体转染组之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).空白对照组与空载体转染组的羟脯氨酸含量及胶原合成差异无统计学意义,干扰组(Col-shRNA1、Col-shRNA2、Col-shRNA3、Col-shRNA4)的羟脯氨酸含量和胶原合成与空载体转染组比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 成功构建了4组有效针对人Ⅰ型胶原基因的shRNA干扰载体,它们均能明显抑制病理性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原基因的表达与减少细胞胶原的合成,其中Col-shRNA1对成纤维细胞Ⅰ型胶原基因表达的干扰效果最强.     

干、鲜石荠苎精油含量及其化学成分的比较研究

目的 研究干、鲜石荠苎精油含量与化学成分的变化。方法 采用水蒸汽蒸馏法测定精油含量，色谱／质谱／数据系统联用方法分析精油化学组成。结果 干石荠苎的精油含量为1．502％～1．760％，鲜石荠苎的精油含量为0．345％～0．365％。从鲜石荠苎的精油中检测到114个分离峰，鉴定出以甲基丁香油酚(64．935％)、石竹烯(9．333％)、Lu草烯(6．455％)、β-金合欢烯(4．638％)、侧柏嗣(3．238％)、桧烯(1．586％)、肉豆蔻醚(1．015％)为主的65种成分，占精油总量的97．85％，其中41种为首次报道。从干石荠的精油中检测到142个分离峰，鉴定出与鲜石荠苎的精油相同的60种成分。结论 干、鲜石荠苎精油百分含量有显著差异，而两者的化学组成基本相同，但是干石荠苎精油中的大多数成分的含量普遍降低。石荠苎精油的化学组成相当复杂，含有多种生物活性物质，如甲基丁香油酚具有麻醉镇痛作用，侧柏嗣有平喘止咳作用；桉叶油素等有抑菌、抗病毒作用；有些成分可作为食用香料和增香剂，特别是甲基丁香油酚的含量高达64．935％，因而具有重要的开发价值。     

基于聚焦解决模式的健康教育对癫痫患者的影响

目的:探讨基于聚焦解决模式的健康教育对癫痫患者的影响。方法:将2015年4月～2017年8月收治的104例癫痫患者以随机抽签法分为观察组和对照组各52例,对照组采用常规健康教育,观察组采用基于聚焦解决模式的健康教育干预;比较两组治疗依从性,出院后3、6、12个月再发作情况,干预前后生活质量[采用健康调查量简表(SF-36)]评分及满意率。结果:观察组治疗依从率、SF-36评分及满意率均明显高于对照组(P 0. 05),患者出院后6、12个月再发作率明显低于对照组(P 0. 05)。结论:将基于聚焦解决模式的健康教育应用于癫痫患者中,有利于提高患者治疗依从性,降低患者出院后再发作风险,同时能够显著改善患者生活质量及满意率。     

阿糖胞苷对HL60细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)对急性早幼粒白血病细胞HL60增殖、凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法 Ara-c与HL60细胞共同孵育后,应用光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化,通过四唑盐(MTT)法分析不同剂量Ara-C对细胞增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析Ara-C对细胞凋亡和Bcl-2蛋白的影响,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究bcl-2基因表达的影响。结果 250μg／ml Ara-C对HL60细胞作用48 h后,光学显微镜下可见细胞呈核固缩、深染及染色质边集等多种形态改变,透射电子显微镜下可见典型的凋亡细胞,MTT检测显示Ara-C能明显抑制细胞的生长。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随作用时间的延长而增加,而Bcl-2蛋白则随之下降。RT-PCR结果显示,bcl-2 mRNA的表达亦随着药物作用时间的延长而下降。结论 Ara-C能诱导HL60细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA水平。     

阿糖胞苷对HL60细胞凋亡及其Bcl-2蛋白表达的影响

目的　探讨阿糖胞苷对白血病细胞的作用及其机制。方法　以人急性早幼粒白血病细胞HL6 0为淋巴细胞 ,分别应用HE染色和透射电镜观察Ara C对HL6 0细胞形态学的影响及其超微结构的变化 ;应用流式细胞术及免疫细胞化学研究Ara C对细胞凋亡和Bcl 2蛋白表达的变化。结果　细胞形态不规则 ,核深染 ,染色质聚边等多种形态改变。电镜下可见典型的凋亡特征。流式细胞仪分析结果显示 ,细胞凋亡率随药物浓度增加和作用时间延长而增加 ,Bcl 2蛋白的表达则下降。结论　Ara C能诱导HL6 0细胞凋亡 ;下调Bcl 2蛋白的表达 ,这可能是Ara C诱导细胞凋亡的机制之一。     

南瓜多糖的提取与分离工艺的优化

目的 研究南瓜多糖的提取与分离工艺的优化。方法 采用正交实验L9(3^4)对南瓜多糖的水提取工艺进行优化设计，通过单因素实验确定南瓜多糖分离的最佳工艺．结果 南瓜多糖提取工艺各因素的最佳水平为A3B2C1D3(料液比1：3，在70℃下提取3次，每次4小时)。南瓜多糖提取工艺各因素中因素D(提取次数)和因素A(料液比)的差异对多糖得率有显著性影响，而因素B(提取时间)与因素C(提取温度)的差异无显著性影响。以乙醇沉淀多糖(终浓度70％)Sevag试剂去除游离蛋白(多糖溶液与Sevag试剂的体积比2t1，反复脱蛋白7次，每次30min)；H2O2溶液脱色(终浓度4％，50℃保温2h)能达到良好的效果。粗多糖得率为1．92％；总糖含量为79．3％。结论 本文建立的优化工艺可为南瓜多糖的分离制备提供参考．根据正交实验统计分析结果，为了省时节水节能，采用少量短时多次提取工艺(料液比1：2，在70℃下提取3次，每次3小时)较为合理。