调节性核糖核酸酶 1对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨调节性核糖核酸酶 1(Reg1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用及机制。方法 2018年 8月至 2020年 2月构建高糖诱导的 RGC-5视网膜神经节细胞损伤模型,实验分为四组: Con组(正常糖 +未转染的 RGC-5细胞)HG组(高糖 +未转染的 RGC-5细胞)、 pcDNA3-Reg1组(高糖 +转染 Reg1过表达质粒的 RGC-5细胞)、 pcDNA3-NC组(高糖 +转染对、照质粒的 RGC-5细胞)。实时荧光定量聚合酶链式反应检测 Reg1、白细胞介素( IL)-1β、IL-6、IL-12、肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)的表达;蛋白质免疫印迹检测 Reg1、B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化的胱天蛋白酶 3(cleaved caspase-3)、磷酸化 p65(p-p65)、磷酸化核因子 κB抑制蛋白 α(p-IκBα)的表达;免疫荧光染色检测 Reg1、p-p65的表达; TUNEL染色检测凋亡水平;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中各炎性因子的含量。结果 Con组中 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 1.00±0.21、1.00±0.15、1.00±0.18,HG组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 2.49±0.36、3.86±0.42、3.17±0.39,pcDNA3-Reg1组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为6.77±0.72、8.18±0.67、6.30±0.51,pcDNA3-NC组 Reg1的相对荧光强度、 mRNA相对表达量、蛋白质相对表达量分别为 2.75±0.40、3.59±0.38、2.85±0.34,HG组、 pcDNA3-NC组 Reg1相对荧光强度、 mRNA和蛋白质相对表达量高于 Con组,且低于 pcDNA3Reg1组( P<0.05)。 Con组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 1.73±0.22)%、1.00±0.28、1.00±0.20、1.00±0.17,HG组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 14.79±0.83)%、0.29±0.11、5.25±0.66、4.93±0.52,pcDNA3Reg1组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 3.77±0.34)%、0.58±0.43、2.51±0.45、2.58±0.33,pcDNA3-NC组 TUNEL+细胞比例、 Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3分别为( 14.55±0.90)%、0.21±0.14、5.14±0.59、4.77±0.46,Con组、 pcDNA3-Reg1组 TUNEL+细胞比例、 Bax、cleaved caspase-3蛋白质相对表达量低于 HG组、 pcDNA3-NC组,而 Bcl-2蛋白质相对表达量高于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。 Con组、 pcDNA3-Reg1组细胞 IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α mRNA相对表达量,及上清液蛋白质含量低于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。 Con组、 pcDNA3-Reg1组 p-p65相对荧光强度,及 p-p65、p-IκBα蛋白质相对表达量低于 HG组、 pcDNA3-NC组( P<0.05)。结论高糖状态下 RGC-5视网膜神经节细胞高表达 Reg1,上调 Reg1表达可以降低细胞凋亡及炎症,可能与抑制 NFκB信号通路活化有关。     

原花青素调控miR-21表达对糖尿病视网膜病变大鼠血管内皮细胞功能及视网膜神经节细胞的保护机制研究

目的 观察原花青素对miR-21的影响,探讨原花青素对糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）大鼠血管内皮细胞功能及视网膜神经节细胞的保护机制。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),采用不同浓度（5、25、50、75、100 mg/L）原花青素处理细胞24 h后,用CCK-8法检测细胞增殖活性并筛选出原花青素50 mg/L进行后续实验,采用细胞划痕实验法测定细胞迁移能力,采用定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测miR-21的表达;将30只大鼠分为正常组、模型对照组和原青花素250 mg/kg组,正常组不经处理,模型对照组和原青花素250 mg/kg组经过腹腔注射链脲佐菌素诱导大鼠DR,原青花素250 mg/kg组经过灌胃250 mg/kg原花青素干预2周,采用显微镜观察视网膜细胞情况,TUNEL法测定神经节细胞凋亡情况,定量PCR检测miR-21的表达。 结果 原花青素抑制HUVECs增殖的效果呈浓度依赖性,5 mg/L组与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）,25 mg/L、50 mg/L、75 mg/L和100 mg/L组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。50 mg/L迁移能力较对照组减弱,miR-21表达下调（P＜0.05）;模型对照组和原花青素250 mg/kg组大鼠视网膜miR21表达量高于正常组,模型对照组高于原花青素250 mg/kg组（P＜0.05）。模型对照组和原花青素250 mg/kg组大鼠视网膜神经节细胞凋亡指数大于正常组,模型对照组大于原花青素250 mg/kg组。 结论 原花青素能够抑制血管内皮细胞增殖、迁移,并抑制DR大鼠视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜病变,其机制可能与下调miR-21表达有关。     

原发性闭角型青光眼患者睡眠质量调查分析

目的:探讨原发性闭角型青光眼患者的睡眠情况以及睡眠质量影响因素。方法:选取2017年9月至2019年3月菏泽市中医医院收治的原发性闭角型青光眼合并睡眠障碍患者70例作为观察组;同时间段选取睡眠正常患者70例作为对照组。针对2组患者睡眠状况,利用匹兹堡睡眠质量指数完成对应评定,针对其睡眠质量影响因素,利用自行设计问卷展开调查分析。结果:观察组原发性闭角型青光眼患者入睡时间评分为(1. 58±0. 22)分;睡眠质量评分为(1. 48±0. 16)分;睡眠效率评分为(1. 30±0. 21)分;睡眠时间评分为(1. 09±0. 03)分;安眠药物评分为(0. 21±0. 12)分;睡眠紊乱评分为(1. 49±0. 59)分;日间功能评分为(0. 87±0. 15)分;评价总分为(7. 69±1. 25)分;对照组患者入睡时间评分为(0. 71±0. 23)分;睡眠质量评分为(0. 65±0. 13)分;睡眠效率评分为(0. 16±0. 02)分;睡眠时间评分为(0. 71±0. 05)分;安眠药物评分为(0. 05±0. 01)分;睡眠紊乱评分为(0. 91±0. 45)分;日间功能评分为(0. 71±0. 13)分;评价总分为(3. 85±1. 13)分;最终发现,观察组PSQI各项评分以及总分均高于对照组明显(P 0. 05);对观察组睡眠质量影响因素进行分析,主要体现为对术后失明过于担心、病程 1年、眼睛表现出疼痛症状以及环境因素几方面。结论:对于原发性闭角型青光眼患者而言,诸多会呈现出睡眠障碍的现象,以心理因素对睡眠质量造成主要影响,对此需要具有针对性展开对应干预,以将原发性闭角型青光眼患者睡眠质量显著提升。