基于HIF-1α/NLRP3信号通路探讨大补肺汤对高原低氧大鼠急性肺损伤的干预作用

摘要：目的：探讨大补肺汤通过调控HIF-1α/NLRP3信号通路及相关分子的表达,从而对高原低氧大鼠急性肺损伤的干预作用。方法：60只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组、大补肺汤低、中、高剂量组,每组10只。适应饲养3 d后给药,空白组和模型组大鼠灌胃给予等量生理盐水,大补肺汤低、中、高剂量组分别连续灌胃14 d。阳性药物组给予地塞米松,腹腔注射,进舱前连续给药3 d。除空白组外,第15 d起各组大鼠于实验动物低压模拟舱中进行低氧暴露,连续3 d。第18天实验结束后处死动物,检测大鼠肺组织湿干重比（wet to dry ratio,W/D）;HE染色法观察大鼠肺组织形态;ELISA法检测血清中IL-1β、IL-18的水平;蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）与RT-qPCR法分别检测大鼠肺组织中HIF-1α、NLRP3、GSDMD、caspase-1蛋白和mRNA表达。结果：W/D值结果表明与空白组相比,模型组大鼠肺湿干重比显著升高（P < 0.01）;与模型组相比,阳性药物组及大补肺汤高、中、低剂量组大鼠肺湿干重比显著降低（P < 0.01或P < 0.05）。HE结果显示与空白组相比,模型组大鼠肺组织可见肺泡间隔增厚,肺间质充血、水肿,炎性细胞浸润,肺泡腔内可见少量渗出;与模型组相比,各给药组肺泡壁增厚减轻,肺间质充血、水肿及炎性细胞浸润明显减轻。ELISA结果显示大鼠血清中IL-1β、IL-18水平在模型组中均显著高于空白组（P < 0.05,P < 0.01）,与模型组相比,各药物组大鼠血清中IL-1β、IL-18水平均显著下降（P < 0.05）。此外,WB与RT-qPCR结果显示与空白组相比,模型组大鼠肺组织HIF-1α、NLRP3、GSDMD和caspase-1蛋白及mRNA相对表达显著升高（P < 0.01）;与模型组相比,大鼠肺组织药物组HIF-1α、NLRP3、GSDMD和caspase-1蛋白及mRNA相对表达显著降低（P < 0.05或P < 0.01）,以阳性药物组及大补肺汤高剂量组作用效果最显著。结论：大补肺汤可调控HIF-1α/NLRP3信号通路,抑制细胞焦亡、减轻炎症反应,对高原低氧大鼠急性肺损伤具有一定的保护作用。     

基于HIF-1α/NF-κB/NLRP3信号通路探讨黄芪百合颗粒对高原低氧模型大鼠急性脑损伤的保护作用

目的：观察黄芪百合颗粒对高原低氧模型大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路的影响。方法：60只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组（5 mg·kg-1）、黄芪百合颗粒高、中、低剂量组（4.1、2.05、1.025 g·kg-1）。其中各中药组连续灌胃给药14 d,1次/d,连续3 d腹腔注射地塞米松作为阳性药物组;第15天将模型组、地塞米松组、黄芪百合颗粒高、中、低剂量组至动物低压模拟舱中模拟高海拔低压低氧环境进行暴露,持续暴露3 d,腹主动脉采血并分离血清,处死后摘取脑组织;苏木素-伊红（HE）染色法观察脑组织病理变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠HIF-1α、NLRP3、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、NF-κB、消皮素D(GSDMD)和胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白的表达水平;实时荧光定量聚合...     

高原低氧诱导肠稳态失衡的分子机制及中药防治研究进展

低氧是限制人群在高原生存的因素之一，能够引起呕吐腹泻、心慌气短、急性昏迷等症状。患有急性高原病的人约80%至少有一种胃肠道不适的症状，如厌食、恶心、腹泻、呕吐等。研究高原低氧所致肠损伤的病理特点、发病机制及药物防治，有利于高原胃肠道疾病的诊治。因此，本文通过总结相关文献，就高原低氧造成肠道损伤的相关研究进行系统阐述，对高原低氧造成肠道形态学、肠道细胞、肠道菌群等肠稳态的改变，引起肠道炎症、氧化损伤等机制及中药防治进行总结，以期为科研工作者和临床工作者提供借鉴及信息参考。     

甘草黄酮A对低氧条件下胃癌细胞增殖和糖酵解的影响

目的 探讨低氧条件下甘草黄酮A对胃癌细胞增殖和糖酵解的影响。方法 筛选人胃癌AGS细胞予以5% O₂低氧环境培养48 h,分为5组：常氧组、低氧组、甘草黄酮A高、中、低浓度组（100、50、25 μmol·L^-1）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法和克隆形成实验检测甘草黄酮A对低氧条件下AGS细胞增殖的影响;划痕实验检测细胞迁移情况,蛋白免疫印迹法 （Western blot） 和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR） 检测AGS细胞中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白1 （GLUT1）、乳酸脱氢酶A（LDHA）、丙酮酸激酶M2（PKM2）、己糖激酶Ⅱ（HK2）的蛋白及mRNA表达水平。试剂盒检测葡萄糖摄取和HK的活性的表达情况。结果 CCK-8法实验结果表明,与低氧组比较,24 h时,甘草黄酮A高、中浓度组AGS细胞的增殖率显著降低（P<0.01）,48 h时,甘草黄酮A高、中、低浓度组AGS细胞的增殖率显著降低（P<0.01）。克隆形成实验结果表明,与常氧组比较,低氧组AGS细胞克隆形成数显著升高（P<0.01）;与低氧组比较,甘草黄铜A高、中、低浓度组AGS细胞的克隆形成数显著降低（P<0.01）。划痕实验表明,与常氧组比较,低氧组的AGS细胞迁移的能力升高（P<0.01）;与低氧组比较,甘草黄酮A高、中、低浓度组的AGS细胞各个时间段迁移细胞的能力显著降低（P<0.01）。Real-time PCR表明,与常氧组比较,低氧组GLUT1、LDHA、PKM2和HK2 mRNA明显升高（P<0.05,P<0.01）;与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组GLUT1、LDHA、PKM2、HK2 mRNA,甘草黄酮A中浓度组GLUT1、LDHA、HK2 mRNA、甘草黄酮A低浓度组HK2 mRNA明显降低（P<0.05,P<0.01）。Western blot表明,与常氧组比较,低氧组HIF-1α、GLUT1、LDHA、PKM2和HK2蛋白的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组的HIF-1α、GLUT1、LDHA、PKM2和HK2蛋白的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,甘草黄酮A中、低浓度的HK2蛋白的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。试剂盒检测葡萄糖摄取及HK活性结果表明,与常氧组比较,低氧组葡萄糖的摄取和HK的含量表达升高（P<0.01）,与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组葡萄糖的摄取和HK的含量表达及甘草黄酮A中浓度组HK的含量表达降低（P<0.01）。结论 甘草黄酮A可以抑制低氧条件下AGS细胞的增殖,其作用机制可能与抑制胃癌的糖酵解有关。     

归芪白术方联合奥沙利铂通过调节VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障

目的：探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过血管活性肠肽(VIP)/环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路调控下游水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白4(AQP4)从而保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。方法：将密度为1×10⁷个/mL的胃癌细胞株MFC制成细胞悬液，经荷瘤小鼠右腋下接种细胞悬液0.2 mL，构建胃癌荷瘤小鼠模型，造模成功后将小鼠随机分为5组，模型组、奥沙利铂组(10mg·kg^-1)、奥沙利铂加归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg^-1)，每组10只，另外余10只作为空白组。各组小鼠经灌胃或腹腔注射中药、奥沙利铂或生理盐水，治疗14 d。末次给药后，次日眼球取血分离血清并取其结肠样本。苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态的变化。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)含量；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组小鼠结肠组织中VIP、cAMP、PKA、AQP3...