HPLC-FLD测定大鼠血浆中的10-羟基喜树碱方法学研究

目的 建立一种简单、准确的测定大鼠血浆中10-羟基喜树碱含量的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD).方法 用1%冰醋酸-甲醇溶液处理血浆样品,采用高效液相色谱-荧光检测器,以喜树碱为内标.色谱柱:Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:以5%乙腈为流动相A,乙腈为流动相B,流速为1.2 mL·min-1,荧光检测器激发波长和发射波长分别为Ex=380 nm,Em=515 nm.采用室温梯度洗脱,进样体积为50μL.结果 本试验采用两条分段函数,大鼠血浆中10-羟基喜树碱在1.25~20 ng·mL-1及20~320 ng·mL-1范围内线性良好,线回归系数分别为0.9998和0.9995.方法 准确度为98.9%~103.8%,10-羟基喜树碱高、中、低3个浓度的提取回收率均大于80%.日内精密度RSD<4.2%,日间精密度RSD<4.8%.结论 该方法 操作简便,灵敏度高,精密度和准确度好,适用于大鼠血浆中10-羟基喜树碱含量的测定.