氧化苦参碱抑制人肝癌细胞EGF和EGFR表达的研究

目的:探讨氧化苦参碱对人肝癌细胞EGF及EGFR表达的影响。方法:将肝癌细胞株BEL-7402在37℃、5%CO2条件下培养、传代。按氧化苦参碱浓度分为1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml3组,对照组不加氧化苦参碱,每组设6个平行孔,每孔加入细胞1×105/ml,培养24h、48h和72h,分别进行EGF及EGFR的免疫组化染色。结果:不同浓度的氧化苦参碱均抑制EGF和EGFR在人肝癌细胞的表达,随着培养时间的延长,EGF和EGFR表达阳性率下降显著,在1000μg/ml组24h、48h和72h的EGF和EGFR阳性率均较500μg/ml组和250μg/ml组同时段的阳性率下降显著(P〈0.05,P〈0.01)。500μg/ml组和250μg/ml组同时段的阳性率无明显差异。结论:氧化苦参碱对EGF和EGFR的抑制途径可能是其抗肝癌机制之一。     

Twist在大肠癌中的表达及其与临床病理指标的关系

目的探讨肿瘤相关基因Twist表达在大肠癌临床病理诊断中的应用价值。方法应用鼠抗人Twist单克隆抗体采用S-P免疫组织化学方法检测112例不同类型大肠癌组织及40例正常肠粘膜组织中Twist的表达并与临床病理指标比较。结果在112例大肠癌组织中,Twist基因阳性表达78例;在正常组织中其阳性表达为15例,两者比较具有显著统计学差异(χ2=11.21,p=0.001);进一步综合临床病理资料统计分析,Twist在大肠癌组织中表达与肿瘤的分化程度、肿瘤浸润、淋巴结转移、Duke’s分期有关(p值分别为0.008、0.017、0.044、0.011),均有显著差异;而与病人年龄、性别无关(p值为0.286、0.887)。结论Twist基因表达检测能较好的判断大肠癌肿瘤分化程度、浸润、淋巴结转移等,在大肠癌诊断中作用明确,对临床病理学诊断有明确的指导作用。     

左室功能减退窦性心律患者心房肌短暂外向钾电流mRNA表达的变化

探讨心力衰竭患者易患心房颤动(AF)的可能发生机制之一。采集左室功能减退组患者(n=18例)和左室功能正常组患者(n=18例)的右心耳组织,应用逆转录聚合酶链反应技术(RTPCR)以3磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)为内参照,测定心房肌KV4.3α的mRNA表达水平,反应心房肌短暂外向钾电流(Ito1)的变化。结果:与左室功能正常组相比,左室功能减退组心房肌KV4.3α的mRNA表达减低46.20%(0.83±0.07vs0.45±0.09,P<0.01)。结论:左室功能减退患者心房肌KV4.3αmRNA表达降低。     

肝癌的基因表达谱研究

以基因表达谱芯片对人正常肝及肝癌组织基因表达的差异进行研究比较.将4096条人cDNA用点样仪点在特制的玻片上制备成表达谱芯片;利用肝和肝癌组织的mRNA通过逆转录方法,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上,制备成cDNA探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描,重复4次实验,通过计算机数据处理判定基因是否在上述2种组织中有表达差异,筛选出差异表达的基因903条.基因芯片技术可同时定量研究数以千记的基因表达水平,从而鉴定参与肿瘤发生的基因.     

骨髓CD34^＋干细胞种植人工血管应用于血管置换后血清中6-k-PGF1α和TXB2变化的研究

目的研究骨髓CD34^＋细胞分别种植于人工血管后血清6-k-PGF1α和TXB2的变化情况,并探讨其与新生内膜增生、血栓形成的关系。方法选杂种犬12条,依人工血管不同分为ePTFE血管实验组（4条）和涤纶血管实验组（4条）及ePTFE对照组（2条）和涤纶对照组（2条）,实验犬采自体骨髓,提取CD34^＋细胞种植覆膜人工血管,对照犬采用单纯自体血预凝人工血管,手术将血管植入同一条犬的下腔静脉和腹主动脉。在术前、术后3天、7天、14天、30天、60天时股静脉采血测定血小板,血清PGF1α、TXB2浓度和PGF1α／TXB2的比值,并在60天时获取全部人工血管标本,光镜和电镜观察新生内膜增生和血栓形成情况。结果实验组血小板和TXB2浓度先上升后下降并维持在一定水平,而对照组明显上升后维持在一个较高水平。实验组血清PGF1α和P／T的比值先降低后升高,而对照组明显降低后维持在一个较低水平;对照组新生内膜较实验组明显增生,并有血栓形成。结论骨髓CD34^＋干细胞种植入工血管应用于血管置换后能有效抑制PGF1α和P／T比值的过度降低、TXB2和血小板的过度升高,从而抑制内膜的过度增生和血栓形成。     

他莫昔芬对人肝癌细胞增殖及ER表达影响的研究

目的:研究他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)对入肝癌HepG2细胞增殖和HepG2细胞ER表达的影响.方法:按照TAM的浓度不同分为7.5 μmol/L、15 μmol/L、30 μmol/L 3组,对照组不加TAM,每孔加入1 ×105 mL-1细胞0.1mL,培养24、48和72 h,采用MTT法测定抑制率;细胞免疫组化染色观察TAM对肝癌细胞ER的表达的影响.结果:TAM抑制人肝癌细胞增殖及ER表达,并具有时间一浓度依赖.结论:TAM可能通过影响肝癌细胞ER的表达抑制肝癌细胞增殖.     

P糖蛋白介导多药耐药逆转的研究进展

肿瘤的化疗是其综合治疗的一个重要方面,而多药耐药(MDR)的影响是导致化疗失败的重要原因。国内外对逆转MDR也进行了很多研究工作,在各种引起MDR的机制中,以P糖蛋白(Pgp)介导的MDR占重要方面,针对逆转Pgp介导的MDR的研究也较多,主要包括化学逆转剂、单克隆抗体和基因水平调控等方面。     

应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰抑制乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的 观察应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)调节染色体组蛋白低乙酰化水平对乳腺癌细胞增殖的作用,并进一步检测Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21Waf/cipl蛋白及mRNA表达变化来探讨其分子作用机制.方法 乳腺癌细胞系MCF-7细胞经0.75-4.0 mmol/L VPA作用后,MTT法检测细胞生长抑制、PI标记流式细胞术检测细胞周期、间接免疫荧光法分析CyclinA、Cyclin D1、Cyclin E、P21Waf/cipl蛋白表达、RT-PCR检测分析Cyclin A、Cyclin DI、Cyclin E、P21Waf/cipl mRNA表达.结果 经0.75-4.0 mmol/L VPA作用24、48、72、96 h,试验组细胞生长抑制率逐渐升高,且呈时间、剂量依赖趋势;对照组细胞增殖周期G1、S、M期所占比例未见明显改变,而实验组则随药物浓度、作用时间的不同而出现不同程度的细胞增殖周期G1期阻滞,G1期比例由56.7%-78.9%不等,与对照组比较其升高差异有统计学意义(P<0.01).试验组P21Walf/cipl蛋白、mRNA表达被明显上调、Cyclin D1蛋白及mRNA表达被明显下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);而CyclinA、CyclinE蛋白和mRNA表达则未见明显变化(P>0.05).结论 通过应用组蛋白特异性脱乙酰酶抑制剂调节组蛋白乙酰化修饰可明显抑制乳腺癌细胞生长、诱导细胞增殖周期阻滞;丙戊酸钠作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂可明显抑制乳腺癌细胞增殖,其作用机制是通过上调P21Walf/cipl mBNA、蛋白表达,下调Cyclin D1 mRNA和蛋白表达分别和/或协同实现.     

血清丙酮酸激酶在血液病的诊断和治疗中的应用

目的探讨血清丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)活性变化在血液系统疾病的诊断和疗效观察中的作用.方法用速率法测定血清PK活性.结果非白血病组和慢性粒细胞白血病组血清PK活性正常,与对照组比较无差异(P＞0.05);急性淋巴细胞白血病组、急性单核细胞白血病组、急性粒细胞白血病组酶活性分别呈轻度升高(140±11 IU/L)、中度升高(241±32 IU/L)、高度升高(495±151 IU/L),与对照组(63±18 IU/L)比较有显著差异(P＜0.05或P＜0.01).酶活性随治疗好转而逐渐降低,病情完全缓解时,酶活性稳定在正常范围内.结论检测血清PK活性可作为血液系统疾病诊断和疗效的动态观察的重要指标.     

反义整合素αV、β3基因抑制裸鼠种植性肝癌生长的研究

目的 探讨反义整合素αV、β3基因治疗裸鼠皮下种植性人肝细胞肝癌的效果.方法 4周龄雄性裸鼠120只分为4组,皮下接种人肝癌细胞系HepG2,建立种植瘤肝癌模型.应用电转染方法分别用整合素αV、β3及αVβ3反义基因治疗,观察肿瘤体积及重量,应用免疫组化和TUNEL技术分别检测肿瘤微血管密度及细胞凋亡情况.结果 对照组、αV组、β3组及αVβ3组肿瘤重量分别为(1.38±0.92)g、(1.28±0.27)g、(1.30±0.34)g、(1.08±0.16)g,各组间比较差异有统计学意义(q12=4.76,q13=3.73,q41=14.28,P＜0.05);微血管密度分别是(17.53±1.88)、(16.06±1.92)、(15.83±2.00)、(14.86±1.69),各组间比较差异有统计学意义(q12=3.91,q13=4.55,q41=7.13,P＜0.01);肿瘤细胞凋亡指数分别为10.53%±3.29%,19.80%±4.06%,21.93%±3.26%,24.03%±4.45%,各组间比较差异有统计学意义(q12=29.41,q13=33.52,q14=39.7,P＜0.01).结论 反义整合素αV、β3基因治疗对肿瘤的生长有明显的抑制作用,联合应用整合素αVβ3反义基因治疗对肿瘤生长的抑制作用更为显著.