Western blot 检测蛋白表达方法的改进

Western blot为常用的检测蛋白质的方法．其操作步骤较多，在抗体反应这一步骤中．常规方珐首先用靶蛋白特异性的非标记抗体与靶蛋白的抗原决定簇相结合．然后用Ⅰ-蛋白A或与辣根过氧化物酶耦联的抗免疫球蛋白抗体检测已结合上去的抗体，此法虽好，但有如下缺点：（1)信号放大有限．在蛋白质量少的隋况下无法得到满意结果，     

肿瘤候选抑制基因RASSF1A

新克隆的RASSF1A基因位于3p21．3，是新的肿瘤候选抑制基因，能明显抑制肿瘤细胞生长。RASSF1A失表达见于多种实性肿瘤组织，与RASSF1A启动子甲基化密切相关。RASSF1A启动子甲基化检测可能是很有用的临床指标。     

浅谈恶性淋巴瘤分类和诊断与高新技术应用的关系

文章分析恶性淋巴瘤的分类、诊断与高新技术应用的关系，研究表明现代医学新技术在淋巴瘤的诊断和分类方面起着十分重要作用。     

CD44和nm-23在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨CD44与nm-23在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与HCC分化、浸润、转移的关系。方法采用组织芯片和免疫组织化学(SP法)检测40例HCC组织中CD44和nm-23的表达。结果40例HCC中CD44与nm-23的阳性率分别为77.5%(31/40)、55.0%(22/40);癌组织中有22例表达nm-23,癌周肝组织中有5例表达,nm-23在肝细胞癌组织中的表达明显高于癌周肝组织(P<0.0001)。CD44表达与HCC的分化程度、包膜状况无关(P>0.05),而与肿瘤大小及转移密切相关(P<0.05)。nm-23表达与HCC的分化程度无关(P>0.05),而与HCC的大小、包膜状况和转移密切相关(P<0.05)。结论CD44与nm-23的表达与HCC的浸润转移密切相关,CD44可作为临床HCC预后评估的重要参考指标,nm-23可以作为判断HCC转移的标志。     

IL-6调节Twist的表达对肝癌细胞BEL-7402上皮-间质转化的影响

目的探讨白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)通过调节Twist的表达调控肝癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchy-mal transition,EMT)及侵袭转移的相关机制。方法用IL-6处理肝癌细胞BEL-7402,采用Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力。采用Western blot和qRT-PCR技术检测低表达Twist对E-cadherin和vimentin蛋白表达水平的影响和mRNA表达的变化。结果 IL-6处理BEL-7402细胞后侵袭和迁移能力明显提高。相较于空白对照组(CON组)和RNA干扰阴性对照组(RNAi-NC组),在转染组RNAi-Twist细胞中,E-cadherin蛋白和mRNA的表达水平明显增加;vimentin的蛋白表达水平明显下调,而mRNA的表达水平差异无显著性。加入50 ng/ml IL-6孵育细胞24 h后,CON组和RNAi-NC组E-cadherin蛋白和mRNA表达均较未处理时明显减少,RNAi-Twist组减少的趋势不明显;vimentin蛋白表达均较未处理时明显升高,而RNAi-Twist组升高不明显,相应mRNA的表达水平差异均无显著性。结论 IL-6可提高肝癌细胞BEL-7402体外侵袭、迁移能力,促进EMT过程,其机制可能通过调节Twist的表达,从而诱导发生EMT和侵袭转移。     

靶向CXCR1基因的shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的：构建靶向化学趋化因子受体1（CXCR1）的短发夹小干扰RNA（shRNA）质粒表达载体。方法：针对人CXCR1基因的mRNA序列,按RNA干扰靶位点的设计原则,设计并构建靶向CXCR1基因的3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,经酶切和测序确认构建成功后,转染胃癌细胞MKN45,RT-PCR和Western blot检测CXCR1 mRNA和蛋白的表达。结果：经酶切和测序证实,3个靶向CXCR1基因的shRNA真核表达质粒均构建成功;与未转染和转染阴性对照质粒的MKN45细胞比较,转染3种shRNA质粒的MKN45细胞,CXCR1 mRNA和蛋白水平均明显下调（均P<0.05）。结论：靶向CXCR1基因的shRNA真核表达质粒的成功构建,为进一步研究CXCR1在胃癌中的功能和实验性靶向治疗提供了初步的基础。

     

睾丸素的研究进展

Testin又称睾丸素,最初是从小鼠睾丸支持细胞增菌培养基中鉴定的一种分泌性糖蛋白,可通过受体联合蛋白与细胞表面紧密结合。通过对睾丸素的研究,人们发现睾丸素 mRNA分布于全身大多数器官,尤其以睾丸和卵巢表达最高。研究表明睾丸素可能为一种抑癌基因,且当睾丸素基因表达降低或缺失时,致癌物诱导的胃癌发生率更高。     

Fascin1基因表达对胃癌细胞系MKN45增殖与凋亡的影响

目的：探讨fascin1基因表达对胃癌细胞系MKN45增殖与凋亡的影响及其意义。方法：利用RNA interference(RNAi)技术稳定沉默fascin1基因的表达,Western blotting及RT-PCR检测干扰效率,用MTT比色法和平板克隆形成实验检测转染前后细胞体外增殖能力,用流式细胞术（FCM）及Hochest33258荧光染色法检测细胞凋亡的变化。结果：在稳定转染fascin1干扰质粒后,胃癌细胞系MKN45的fascin1表达明显下降;与未转染组和空白质粒转染组相比,fascin1干扰质粒转染组的增殖能力明显降低,但细胞凋亡变化不明显。结论：fascin1的表达与胃癌细胞系MKN45的增殖有关,而与凋亡无明显相关。     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选TGF-β1刺激胃癌细胞分泌蛋白的研究

目的 应用SELDI-TOF-MS技术对比分析胃癌细胞经转移生长因子β1(TGF-β1)刺激分泌后的蛋白质谱变化,为下一步筛选有意义的差异蛋白奠定理论和实验基础.方法 体外传代培养胃癌细胞株SGC7901,BGC823,MKN45,并分为实验组和对照组.实验组加入TGF-β1刺激,而对照组不加入TGF-β1刺激.培养24 h后收集细胞培养液并离心,与WCX2蛋白芯片杂交后,上机进行SELDI-TOF-MS检测.结果 (1)BGC823细胞受TGF-β1刺激后,与对照组比较发现了13个差异蛋白峰,质荷比(M/Z)是M4294,M4932,M4945,M4972,M4991,M5015,M5036,M5060, M5153, M5180,M5197,M8577,M8784.(2)MKN45细胞受TGF-β1刺激后,与对照组比较发现了18个差异蛋白峰,M/Z分别是M4292,M4931,M4945,M4972,M4990,M5014, M5152, M5178, M7055, M8190, M8570, M8652, M8670,M8780,M9963,M10098,M10523,M11653.(3)SGC7901细胞受TCF-β1刺激后,与对照组比较发现了8个有意义的差异蛋白峰,M/Z分别是M4945,M4972,M4992,M5015,M5180,M7056,M8573,M8604.(4)比较3种胃癌细胞经TGF-β1刺激后的蛋白质图谱,共发现2个有意义的共同差异蛋白峰,它们的M/Z分别是M4945,M4972.结论 筛选出与TGF-β1作用相关的胃癌特征性的生物标记物--M4945,M4972,这些生物标记为胃癌患者浸润、转移的早期预测和临床诊断的进一步研究奠定了基础.