聚乙二醇修饰尿酸酶的研究(英文)

目的:为了降低尿酸酶的免疫原性并提高其稳定性,利用PEG修饰剂对尿酸酶进行修饰,以期获得性质更优的治疗痛风的药物。方法:用相对分子质量为40kD,活化基团为羟基琥珀酰亚胺的PEG修饰剂对尿酸酶进行修饰,并比较修饰前后在酶解稳定性、pH稳定性及温度稳定性方面的差异,以及PEG修饰对体内半衰期,免疫原性的影响。结果:发现PEG修饰后尿酸酶的酶解稳定性显著提高,PEG化尿酸酶保留了原有尿酸酶80%的活性,体内半衰期从45min延长至696min。PEG化尿酸酶与抗体的结合能力为原型蛋白的1/8。体内的免疫原性也明显降低。结论:化学修饰后的尿酸酶可望成为潜在的治疗痛风的有效药物。     

前列腺特异抗原质控品的制备与评价

目的制备性能稳定的前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)质控品,用作PSA定量检测试剂临床检测的质量控制。方法将人源PSA蛋白以不同稀释配方稀释成低、中、高3个浓度,制备液体和干粉两种形式的质控品,用Abbott定量检测试剂进行活性检测,考察PSA质控品的稳定性能。结果 PSA液体质控品使用未灭活血清稀释,制备过程简单,瓶间差较低,冷藏保存可至少稳定8个月,冷冻保存可至少稳定18个月;PSA干粉质控品使用含有10%人血清、50 g/L甘氨酸和4g/L人血清清蛋白的PBS制备,冻干粉外观均匀,复溶后澄清透明,干粉在37℃和复溶后25℃可稳定放置4周,冷藏保存至少稳定12个月。结论制备的PSA液体质控品和干粉质控品使用方便,稳定性能够满足室内质控要求,具有较好的市场前景。     

人心肌肌钙蛋白I冻干质控品的制备及评价

目的制备性能稳定、具有良好免疫反应性的冻干人心肌肌钙蛋白I亚基(cTnI),用作cTnI定量检测试剂的质控品。方法利用基因工程方法构建表达载体,转化大肠埃希菌后,诱导表达重组cTnI,经纯化后制备冻干质控品,同时考察该质控品的稳定性。结果成功诱导表达可溶性cTnI蛋白,其冻干品与标准参考物质SRM 2921具有相同的免疫反应性,且该质控品用于检测具有良好的精密度和稳定性。结论制备的冻干cTnI使用方便、结果稳定,可以满足室内质控要求,适合作为cTnI定量试剂盒的质控品。     

聚乙二醇化尿酸酶体内外稳定性研究

目的研究聚乙二醇化尿酸酶体内外稳定性。方法以酶活为指标,考察聚乙二醇修饰尿酸酶和尿酸酶的温度稳定性(4~80℃)、酸碱稳定性、抗胰蛋白酶水解能力和小鼠体内半衰期。结果4~60℃条件下,修饰的尿酸酶的稳定性大于尿酸酶,在70℃时,两者活性均迅速降低。pH 5.2~6.0及pH 9.2~10.0之间,尿酸酶活性迅速降低,而修饰的尿酸酶却保留了较高的活性。抗胰蛋白酶水解中,尿酸酶在作用200 min后,活性降至最高值的20%;而修饰的尿酸酶仍保留70%的活性。体内稳定性试验表明,修饰的尿酸酶和尿酸酶的半衰期分别为1 530和45 min。结论聚乙二醇修饰可以增加尿酸酶的稳定性和抗胰蛋白酶水解能力,延长体内半衰期。