不同代次兔髓核细胞冻存后的生物学特性比较

目的:比较不同代次兔髓核细胞冻存后的生物学特性,找出适合作为种子细胞冻存的兔髓核细胞代次。方法:取3～4月龄新西兰大白兔10只,麻醉后在严格无菌条件下分离胸腰椎间盘(T1/2～L7/S1)髓核细胞,体外传代培养,分别取一、二、三、四、五代细胞冻存2～3个月后复苏,取一代未冻存细胞作为对照组(A组,n=10);一、二、三、四、五代冻存后复苏的细胞作为实验组(分别为B、C、D、E、F组,各组n=10),在相同条件下培养2周,培养第2天时采用台盼蓝染色测定细胞成活率;培养第2d、5d、10d、14d时采用MTT法检测细胞生长活性,采用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖(PG)含量;培养第14d时采用阿利新兰染色法测定糖胺聚糖(GAG)合成总量,用RT-PCR法检测各组细胞Ⅱ型胶原基因的表达情况。检测细胞浓度均为1×105个/ml。采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果:培养第2d时B、C组细胞成活率接近A组(P>0.05);D、E、F三组细胞成活率明显低于A、B、C组(P<0.05)。不同时间点各组细胞均有不同程度的增殖,A、B、C、D四组生长趋势较接近,A、B、C三组相同时间点生长活性比较差异无统计学意义(P>0.05),D组与同一时间点A组比较有显著性差异(P<0.05),E组第10d和第14d以及F组各时间点间比较差异无显著性(P>0.05);A、B、C三组各时间点的PG含量及GAG含量高于相应时间点D、E、F组(P<0.05);A、B、C三组的Ⅱ型胶原基因表达量高于D、E组(P<0.05),明显高于F组(P<0.01)。结论:不同代次兔髓核细胞冻存后生物学特性不同,第一、二代细胞冻存后能较好保持髓核细胞特性,可作为种子细胞进行低温保存。     

椎间盘组织工程种子细胞的选取、鉴定及培养难点

目的对椎间盘组织工程种子细胞的选取、鉴定及培养难点做一综述。方法应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中1988/2012关于组织工程纤维环支架的文章,在标题和摘要中以"组织工程;椎间盘;种子细胞;细胞鉴定;细胞培养;综述"为检索词进行检索。结果共检索到112篇文章,按纳入和排除标准对文献进行筛选,保留42篇文章进行综述。结论目前组织工程椎间盘研究目的是治疗椎间盘退变性疾病。但在研究和治疗过程中仍存在很多难点,还需要进一步研究。     

兔不同节段椎间盘髓核细胞培养特性的比较

目的:探讨兔颈段、胸段及腰段椎间盘髓核细胞的培养特性.方法:3～4月龄兔10只,麻醉后,在无菌条件下手术分离整段脊柱,分别取颈段(C1/2～C7/T1)、胸段(T1/2～T1/L1)、腰段(L1/2～L7/S1)髓核细胞进行培养,于培养后的24h计算贴壁率.并于贴壁后的第3、7、14及21天计算细胞死亡/成活比,判断细胞活力并检测蛋白多糖的含量.结果:颈段、胸段、腰段细胞贴壁率差异具有显著性,腰段细胞贴壁牢最高(P<.01).不同节段之间,在多个时间点观察髓核细胞死亡/存活比差异具有显著性,腰段椎间盘髓核细胞的死亡/成活比最低(P<0.01).不同节段之间,不同时间点观察的蛋白多糖含量差异具有显著性,且腰段椎间盘髓核细胞的蛋白多糖含量最高(P<.01).结论:腰段椎间盘髓核细胞较颈段及胸段的髓核细胞生长状态好,兔腰椎髓核细胞更适宜作为细胞培养的种子细胞.     

自体骨或同种异体骨植骨结合交锁髓内钉固定治疗股骨干骨不连的疗效观察

目的探讨自体骨或同种异体骨植骨结合交锁髓内钉固定治疗股骨干骨不连的疗效。方法 34例股骨干骨不连分为A、B两组,A组采用自体骨植骨结合交锁髓内钉固定,B组采用同种异体骨植骨结合交锁髓内钉固定。结果 34例均获平均73周随访,B组骨折平均愈合时间较A组长,差异有统计学意义(P<0.05);两组术后50周膝关节HSS评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论自体骨与同种异体骨结合交锁髓内钉治疗股骨干骨不连固定可靠,疗效确切,均有利于膝关节功能恢复,但自体骨植骨疗效优于同种异体骨。     

沉默PGRN基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的：探讨沉默颗粒蛋白前体（PGRN）基因对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法：按照脂质体法将siRNA PGRN、siRNA NC转染至RA滑膜成纤维细胞MH7A，记为siRNA NC组、siRNA PGRN组，对照组（Control）未进行转染处理；将siRNA PGRN转染RA滑膜成纤维细胞MH7A后，加入丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路激活剂Anisomycin，记为siRNA PGRN+Anisomycin组。采用qRT-PCR检测各组细胞PGRN mRNA表达水平；噻唑蓝（MTT）、克隆形成实验检测各组细胞增殖能力；流式细胞术检测各组细胞凋亡变化；Western blot检测各组细胞PGRN、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原（PCNA）、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、MAPK通路蛋白表达。结果：与Control组、siRNA NC组相比，siRNA PGRN组内PGRN mRNA及蛋白表达、克隆形成率、存活率明显降低，凋亡率明显升高，Cyclin D1、PCNA、Bcl-...