褪黑激素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响及机制研究

目的：探讨褪黑激素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响及作用机制。方法收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)。将HSFBs细胞根据不同的处理方法分为空白对照组、低浓度褪黑激素组、中浓度褪黑激素组、高浓度褪黑激素组、NVP-BEZ235处理组、NVP-BEZ235+褪黑激素组、褪黑激素+siRNA-PTEN组、褪黑激素+siRNA-scramble组。MTT法检测各组细胞的增殖情况,qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)、CyclinD1和Caspase-3的表达以及PI3k/AKt/mTOR通路相关蛋白p-Akt和p-mTOR的蛋白水平。结果与空白对照组比较,从低到高浓度褪黑激素均能够减少HSFBs细胞同一时间点OD值,上调PTEN和Caspase-3表达量,同时抑制CyclinD1、p-Akt和p-mTOR表达水平,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。同时与高浓度褪黑激素组比较,NVP-BEZ235+褪黑激素组中细胞增殖显著被抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);沉默PTEN后拮抗褪黑激素对HSFBs细胞增殖和PI3K/Akt/mTOR信号通路有抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论褪黑激素通过上调PTEN表达,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化从而抑制HSFBs细胞增殖。     

地拉罗司对大鼠窄蒂缺氧皮瓣模型促进微血管生成的实验

目的 探索术前应用地拉罗司(deferasirox)对大鼠乒乓拍样狭长窄蒂缺氧皮瓣模型微血管生成的促进作用及与用药时间的相关性.方法 成年雄性SD大鼠40只,随机分为对照组(8只),实验组(32只,分为1、3、5、7d组,每组8只).实验组:地拉罗司100 mg/kg分别连续灌胃1、3、5、7d;对照组:生理盐水100 mg/kg连续灌胃7d,灌胃结束后,次日行乒乓拍样窄蒂任意型皮瓣成形术,均于术后第7天取材,应用免疫组织化学、Western印迹及实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测CD34表达,应用实时荧光定量PCR检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 实验组较对照组皮瓣成活率明显提高,随着用药时间的增加,皮瓣微血管密度(MVD)、HIF-1α和VEGF均逐渐增高,7d达最高.结论 地拉罗司能诱导HIF-1α的分泌,促进VEGF产生,增加MVD表达,明显具有提高皮瓣对低氧的耐受,减少内皮细胞低氧后的坏死率,对缺血缺氧的窄蒂皮瓣具有较好的保护作用.     

微循环灌注压重建对皮瓣成活面积影响的实验研究

目的探讨应用负压封闭引流技术（VSD）对皮瓣成活面积的影响。方法 SD大鼠40只,随机分为5个组：1天组、2天组、3天组、4天组和6天组,即在每只大鼠的背部两侧各设计制作1块皮瓣,一侧为对照侧,另一侧为实验侧,皮瓣设计为：蒂宽=蒂长=0.8 cm,蒂部所携带直径为3.5 cm的皮瓣,形状类似＂乒乓球拍＂;皮瓣形成后给予实验侧皮瓣上安装负压封闭引流装置。各个组分别于手术后1 d、2 d、3 d、4 d和6 d观察皮瓣颜色、肿胀程度,切取0.3 cm×0.5 cm标本,第7天测量皮瓣成活面积。通过HE染色、免疫组化等,进行皮瓣组织学、CD34表达情况的观察。结果①负压封闭引流技术改善皮瓣淤血水肿,促进皮瓣成活,3 d达到最大成活面积。②负压封闭引流技术促进皮瓣微血管密度增大,促进血管新生。结论负压封闭引流技术重建皮瓣远端组织的微循环灌注压可改善皮瓣缺血缺氧状态,扩大皮瓣成活面积。     

芪桂活血汤联合针刺治疗气虚血瘀型糖尿病周围神经病变的临床研究

目的 探讨芪桂活血汤联合针刺治疗气虚血瘀型糖尿病周围神经病变（DPN）的效果。方法 选取2019年1月至2021年10月安徽省六安市中医院收治的99例DPN患者,根据随机数字表法将其分为三组,每组33例。对照组1接受针刺治疗,对照组2接受芪桂活血汤治疗,观察组接受芪桂活血汤联合针刺治疗,均连续治疗4周。比较三组临床疗效和中医证候积分、多伦多临床评分系统（TCSS）、腓总神经传导速度、视觉模拟评分（VAS）,记录不良反应发生情况。结果 观察组临床疗效优于对照组1、对照组2(P <0.05)。治疗后三组中医证候积分、TCSS评分、VAS评分均较治疗前降低,腓总神经的感觉神经传导速度（SNCV）和运动神经传导速度（MNCV）较治疗前升高（P <0.05）,且治疗后观察组中医证候积分、TCSS评分、VAS评分低于对照组1、对照组2,SNCV和MNCV高于对照组1、对照组2(P <0.05)。三组在治疗过程中均未出现明显不良反应。结论 芪桂活血汤联合针刺治疗气虚血瘀型DPN效果显著,能改善神经传导速度,缓解疼痛。     

地拉罗司通过诱导上皮细胞间质化改变促进窄蒂皮瓣微血管生成的实验研究

目的 探讨地拉罗司能否通过诱导上皮细胞发生间质化改变,从而促进皮瓣微血管生成.方法 雄性成年SD大鼠32只随机均分为Ⅰ组和Ⅱ组,2组又分别分为a、b组,每组各8只.Ⅰa组连续7d灌胃地拉罗司100 mg/kg,Ⅰb组连续7d灌胃等量生理盐水,灌胃结束后,次日行大鼠背部窄蒂皮瓣成形术,术中观察皮下微血管情况,术后第7天观察皮瓣愈合情况,并计算皮瓣成活面积百分比.Ⅱa组连续7d灌胃地拉罗司100 mg/kg,Ⅱb组连续7d灌胃等量生理盐水,灌胃结束后,次日行大鼠背部窄蒂皮瓣成形术,术后第3天皮瓣远端采集标本,免疫组化和Western blot法检测分化簇因子34(C D34)、E钙黏素、波形蛋白的含量,并计算皮瓣微血管密度.结果 Ⅰa组皮瓣下微血管生长较Ⅰb组旺盛.Ⅰa组皮瓣存活率100％,Ⅰb组存活率62.5％ (P ＜0.05);Ⅰa和Ⅰb皮瓣成活面积百分比分别为(100±0.OO)％和(84.06±4.42)％(P＜0.05).免疫组化及Western blot法检测示lⅡa组E钙黏素低于Ⅱb,而波形蛋白、CD34的表达量高于Ⅱb(P＜0.05).结论 地拉罗司能够通过诱导上皮细胞发生间质化改变促进皮瓣组织微血管生成,具有较强的促进窄蒂皮瓣愈合的作用.     

MALAT1通过靶向miR-204调控TFAM表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响

目的 探讨MALAT1靶向miR-204/线粒体转录因子A(TFAM)轴对皮肤鳞状细胞癌恶性生物学行为的影响.方法 lncRNA芯片筛选皮肤鳞状细胞癌中差异表达的lncRNA;qRT-PCR检测用于分析MALAT1与miR-204的表达;免疫组织化学法与Western blotting检测TFAM的表达;si-阴性对照...     

Survivin异常表达对前列腺癌转移及TGF-β/Smad通路的调节作用#br#

目的　探讨生存素（Survivin）异常表达在前列腺癌（PCa）转移中的作用及机制。方法　（1）通过TCGA数据库分析Survivin mRNA在正常前列腺组织和PCa组织中表达差异,分析有无淋巴结转移、Gleason分级以及预后信息。（2）采用免疫组化染色检测15例良性前列腺增生（BPH）活检标本和60例PCa活检标本中Survivin蛋白表达,比较患者不同临床特征间Survivin蛋白表达的差异。（3）常规培养人前列腺增生细胞系BPH和人PCa细胞系LNCaP、Du-145、PC-3,Western blot检测Survivin蛋白表达。利用LNCaP细胞构建Survivin稳定过表达组（Survivin-OE组）和相应对照组（Vector组）,同时在PC-3细胞中构建Survivin稳定敲低组（Survivin-KD组）和相应对照组（NC组）。CCK-8增殖实验与Transwell实验检测敲低和过表达Survivin后细胞增殖、侵袭能力的变化。Western blot检测2种细胞中Survivin、上皮间质转化（EMT）特征分子上皮细胞钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）,以及转化生长因子（TGF）-β/Smad通路相关蛋白TGF-β1、磷酸化Smad2/3（pSmad2/3）、Smad2/3、Smad4蛋白表达水平的改变。结果　（1）TCGA数据库分析结果显示,Survivin在PCa组织中异常高表达,出现淋巴结转移的患者Survivin表达水平高于无淋巴结转移者（P＜0.01）;且随着Gleason分级的升高,Survivin表达水平越高（P＜0.01）;同时Survivin高表达的PCa患者的无进展生存时间明显短于Survivin低表达的患者（P＜0.01）。（2）免疫组织化学证实,PCa标本中Survivin蛋白高表达比例明显高于BPH组织（60.0% vs. 26.7%,χ2=5.357,P＜0.05）。且临床分期T3+T4期、局部淋巴结转移和远处转移者Survivin高表达比例明显升高（P＜0.05）。（3）体外实验结果显示,LNCaP、Du-145、PC-3细胞中Survivin表达水平均高于BPH（P＜0.05）。LNCaP细胞过表达Survivin后,细胞增殖和侵袭能力增强,上皮标志物E-cadherin表达下降、间质标志物N-cadherin表达升高,同时TGF-β1、pSmad2/3和Smad4蛋白表达水平增加。而PC-3细胞敲低Survivin后,细胞增殖和侵袭能力减弱,上皮标志物E-cadherin表达增加、间质标志物N-cadherin表达降低,TGF-β1、pSmad2/3和Smad4蛋白表达水平降低。结论　Survivin在PCa中异常高表达,其可以通过调节TGF-β/Smad通路来促进肿瘤细胞EMT,进而提高PCa的转移与侵袭能力。     

超高效液相串联质谱法同时测定二陈汤中4种成分含量

目的建立同时测定二陈汤中橙皮苷、齐墩果酸、麻黄碱、甘草酸含量的超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)方法。方法采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,流动相为乙腈-2 mmol/L甲酸铵水溶液,等度洗脱。采用电喷雾电离源,多反应离子监测(MRM)。采用外标法定量分析,用于定量分析的橙皮苷、齐墩果酸、麻黄碱及甘草酸检测离子对m/z分别为611.2→303.1、455.2→407.2、166.2→148.2、821.4→350.9。结果橙皮苷、齐墩果酸、麻黄碱及甘草酸分别在0.0100~0.4000、0.0063~0.2500、0.0125~0.5000、0.0025~0.1000 ng范围内与峰面积线性关系良好(r值分别为0.9982、0.9988、0.9994、0.9991)。加样回收率在98.45%~102.60%范围内,RSD均低于1.67%。结论该法专属性强、快速灵敏,可用于二陈汤中橙皮苷、齐墩果酸、麻黄碱及甘草酸的含量测定。     

姜黄素固体分散体处方工艺优化及体外溶出度评价

目的 优化姜黄素固体分散体(CUR SD)的处方工艺.方法 根据溶解度参数及溶出结果 ,优选CUR SD最佳载体及药物与载体的比例.采用差示扫描量热(DSC)法、X-射线粉末衍射分析(XRPD)法和傅立叶红外光谱分析(FTIR)法对制备的CUR SD进行表征,并考察体外溶出度.结果 根据溶解度参数及体外溶出结果 ,优选...     

富血小板血浆治疗老年糖尿病患者褥疮的疗效观察

目的:探讨富血小板血浆(PRP)治疗老年糖尿病患者褥疮的临床疗效。方法:选取该院2013年6月—2015年7月收治的糖尿病并发褥疮患者69例,将其随机分为PRP治疗组(34例)和对照组(35例),PRP治疗组采用PRP进行治疗,对照组采用传统方法治疗。2组患者均使用胰岛素控制血糖,并严格控制血压及血脂,同时予抗血小板聚集、改善微循环及抗感染等一般治疗。观察2组患者创面愈合情况,比较愈合时间及有效率。结果:所有患者均完成12周随访。两组患者年龄、性别、糖尿病史、住院时间及褥疮等基本情况相比差异均无统计学意义(P均0.05)。PRP治疗组患者的治疗时间和褥疮创面愈合时间均显著短于对照组(P均0.05)。PRP治疗组有效率为82.4%,显著高于对照组(P0.05)。结论:PRP对治疗老年糖尿病并发褥疮患者有较好的临床疗效,且治疗周期短及治愈快,值得临床进一步推广应用。