荧光定量PCR技术在孕妇和新生儿巨细胞病毒感染检测中的应用

目的对孕妇及新生儿进行巨细胞检测,并对其检测意义进行探讨。方法采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法对2010年1月至2012年1月共11086例孕妇和新生儿进行巨细胞病毒（CMV）检测并对结果进行分析。结果 7906例受检孕妇和3180例新生儿经荧光定量PCR检测分别检出CMV阳性孕妇212例和CMV阳性新生儿59例,阳性率分别为2.68%和1.86%。CMV阳性孕妇中86例进行了产前诊断,DNA检测未见阳性且新生儿随诊无临床症状,DNA检测未见阳性。结论采用荧光定量PCRDNA检测技术对孕妇和新生儿进行CMV检测,可有效改善妊娠结局,保护母婴健康。     

响应面分析法优化细菌内毒素的灭活方法

目的运用响应面分析法的原理和方法对医疗实践中常用的内毒素的灭活方法进行优化,提出一种简便、可靠、快速的内毒素灭活方法。方法对细菌内毒素用双氧水灭活法、多酶清洗液灭活法和干热灭活法进行基于响应面的优化设计,在对双氧水浓度、多酶清洗液的稀释比和干热温度进行单因素实验的基础上,以显色基质鲎试剂测定的残留的内毒素活性为响应指标,设计三因素三水平的响应面分析实验,以此确定最佳的灭活方法,并对理论优化的结果进行实验验证。结果室温下双氧水浓度为10%(V/V)作用时间20 min,多酶清洗液稀释比为1:100作用30 min,然后在150℃的干热烘箱中作用30 min后,显色基质鲎试剂测定内毒素的结果为阴性。结论经过响应面分析法优化的细菌内毒素灭活方法,能够快速高效的灭活结构复杂来源多样的细菌内毒素。     

蛋氨酸酶联合顺铂协同抑制人肺腺癌细胞GLC生长作用

目的：纯化重组蛋氨酸酶并探讨其联合化疗药物顺铂对人肺腺癌GLC细胞生长的协同抑制效应．方法对原核表达体系pGEX-4T-1-Met/Dh5a菌液破碎后上清过纯化柱（GST）纯化后,采用MTT比色法测定重组蛋氨酸酶与顺铂联合应用对GLC细胞增殖的抑制作用,采用金正均法计算q值判断两药合用是否具有协同作用．结果重组蛋氨酸裂解酶浓度为0.22 mg/mL,纯度达95%,活性为0.568 IU/mg．给药72 h后单用顺铂对GLC细胞抑制率为24.80%,单用蛋氨酸酶抑制率为27.49%,两药合用抑制率为66.80%．=1.47＞1.15,表现出明显协同作用．结论蛋氨酸酶及顺铂均有抑制GLC增殖作用,并且两者联合使用存在协同作用．     

邻苯二甲醛柱前衍生化法快速高效测定液体生物样品L-蛋氨酸含量

目的 拟建立一种快速、简单、灵敏的血浆等生物样品中L-蛋氨酸的含量测定方法.方法 用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生化法分离并定量C57小鼠血浆中L-蛋氨酸,采用反向色谱柱ODS （4.6 mm×250 mm）;pH 7.2 10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4（PB）含0.2％ THF和PB-甲醇-乙腈（50：35：15）为流动相梯度洗脱;紫外检测器340 nm检测.结果 邻苯二甲醛柱前衍生化法的最低检出限浓度为0.5 μmol/L,8 min内分离测定了血浆L-蛋氨酸的含量,12 min内血浆所有氨基酸全部洗脱;在0.5-100 μmol/L进样浓度范围内,L-蛋氨酸的峰面积与浓度呈现良好的线性关系,相关系数0.999 8,对于L-蛋氨酸的标准加入回收率在94.63％和97.99％之间.结论 邻苯二甲醛柱前衍生化法是一种快速简便的紫外检测液体生物样品中L-蛋氨酸含量的方法.     

水浸GC-MS法检测生物检材中的百草枯

目的 建立一种简便、快速、准确、可靠的水浸气相色谱-质谱联用法 (GC-MS) 检测生物检材中的百草枯.方法 根据百草枯的水溶性, 用水浸法对生物检材进行样品前处理, 用GC-MS对样品进行分离分析, 用总离子流图 (TIC图) 中百草枯的保留时间及质谱图中百草枯的特征离子碎片定性.结果 该方法样品前处理简单, 使用的有机溶剂少, 背景干扰小, 分离效果好, 分析速度快, 百草枯定性的保留时间为6.674 min, 百草枯的特征离子碎片为156 (m/z=156) ;方法回收率为91.42%, 日内及日间相对标准偏差RSD分别为4.83%及6.87%, 最低检出限 (LLOD) 为0.005 mg/m L.结论 该方法简便、准确、可靠, 可用于法医毒物分析生物检材中百草枯的检验.     

hsa-miR-126的靶基因预测及功能分析

目的 检测hsa-miR-126在各个组织器官中的表达情况,通过生物信息学预测hsa-miR-126的靶基因,进一步分析其可能功能,为研究hsa-miR-126的功能和机制奠定基础.方法 通过miRGator v3.0数据库查看hsa-miR-126在各个组织器官中的表达丰度情况;应用TargetScan、DIANA-microT-CDS及miRanda预测hsa-miR-126的靶基因;将预测所得靶基因和已证实的靶基因交集组成的基因集合分别进行功能富集分析（GO analysis）和信号转导通路富集分析,分析hsa-miR-126的可能功能.结果 hsa-miR-126在胃肠道,心脏,肾脏,肝胆系统,肺,干细胞,睾丸,胸腺,甲状腺,子宫中表达丰度较高;结合已被证实靶基因得到40个候选靶基因;靶基因主要参与细胞迁移调控以及腺体发育相关生物过程,涉及数个癌症通路和与癌症发生相关的信号通路,以及神经营养因子信号通路,ErbB信号通路,趋化因子信号通路和VEGF信号通路等.结论 hsa-miR-126预测的靶基因集合富集于多个生物学过程,与肿瘤和血管性疾病密切相关,生物信息预测结果为今后的研究奠定了基础。     

顶空气相色谱法对血中乙醇水平测定方法的探讨

目的建立一种简便、快速、准确、可靠的双柱双检测器,采用顶空气相色谱法对血中乙醇进行定性、定量分析。方法利用气体对挥发性物质的萃取原理进行样品前处理,顶空进样器进样,叔丁醇为内标物,用装有2根色谱柱(001通道色谱柱,DB-ALC2;002通道色谱柱,DB-ALC1)及2个氢火焰离子化检测器(FID1、FID2检测器)的气相色谱仪进行分离分析,用保留时间定性,内标标准曲线法定量。结果该方法线性范围为0.2~2.0 mg/mL,001通道线性回归方程为:Y=1.057 7 X+0.048 2,决定系数R2=0.999 05;002通道线性回归方程为:Y=1.039 5 X+0.046 5,决定系数R2=0.999 25。方法平均回收率为99.70%,001通道与002通道对样品测定结果的相对标准偏差(RSD)4%。结论该方法可用于法医毒物分析血中乙醇水平的检测及实验室能力认可中能力验证计划样品的测定,结果令人满意。     

Vimentin,CTGF和AQP5在烟尘诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞恶性转化模型中的表达

目的 观察波形蛋白(Vimentin)、结缔组织生长因子(conective tissue growth factor,CTGF)和水通道蛋白5 (Aquaporin5,AQP5)在烟尘诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)恶性转化模型中的表达.方法 以永生化ATⅡ(RLE-6TN细胞株)为实验对象,分为高剂量染毒组、低剂量染毒组和空白对照组.高、低剂量染毒组分别使用终浓度为200、50 mg/L的烟尘悬浊液在第1、3、5、7、9代对细胞染毒,同代对照组不加烟尘悬浊液同步培养.从第10代起,高、低剂量染毒组常规传代直至软琼脂克隆形成检测实验呈阳性.采用透射电镜观察细胞超微结构,以免疫印迹法及免疫组织化学法观察各组细胞肺表面活性蛋白SP(-B)、SP-C、波形蛋白(Vi-mentin)、结缔组织生长因子(CTGF)、水通道蛋白5(AQP5)表达.结果 从形态改变、软琼脂克隆形成实验及肺泡表面活性蛋白(SP)-B、SP-C的表达上发现经烟尘诱导,RLE-6TN细胞超微结构会发生改变,且高、低剂量染毒组克隆形成率与染毒培养代数相关性有统计学意义(P＜0.01),但与烟尘染毒水平相关性无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学显示高、低剂量染毒组第30代细胞CTGF阳性、SP-B阴性,空白对照组CTGF阴性、SP-B阳性.Western blot示高、低剂量染毒组第25、30、35代细胞及空白对照组Vimentin和AQP5均为阴性.结论 云锡炼厂烟尘导致ATⅡ恶性转化模型中CTGF表达阳性,但Vimintin及AQP5的表达呈阴性.     

慢性应激对大鼠行为学及脑神经颗粒素水平的影响及药物防治

目的探讨慢性应激对大鼠外显行为学变化的影响,检测体内儿茶酚胺类物质及神经颗粒素(Neurogranin,Ng)表达的变化及三七皂苷Rg1的防治效果。方法成年雄性SD大鼠36只,随机分为对照组(CON)、模型组(CUS)、和治疗组(CUS-G),采用慢性不可预见性应激方法建立慢性应激动物模型;采用旷场试验检测行为学变化,运用Morris水迷宫实验进行学习记忆力测试,使用放射免疫法检测血浆、脑组织儿茶酚胺类含量,Western blot法检测皮质、海马、下丘脑Ng含量。结果 6 w慢性应激后,实验组大鼠在水平运动和垂直运动方面得分均明显低于对照组与药物组,均P0.05;水迷宫实验显示慢性应激后动物逃避潜伏期明显延长,而治疗组大鼠逃避潜伏期呈下降趋势(P0.05);血浆、脑组织去甲肾上腺素与多巴胺在对照组、实验组与药物组间无明显变化;慢性应激大鼠皮质、海马、下丘脑Ng含量水平皆与模型大鼠有差异(P0.05、P0.01、P0.05),治疗大鼠皮质、海马、下丘脑Ng含量亦皆与模型大鼠有差异(P0.01、P0.05、P0.05)。结论慢性应激研究领域,神经颗粒素的敏感性优于单胺类神经递质,可作为敏感指标加以观察;100 mg/kg剂量的三七皂苷Rg1能够抑制应激所致学习记忆功能紊乱,对应激所致外显行为有积极的调节作用,对脑内神经颗粒素表达水平降低趋势有较好抑制作用。