海南某三甲医院多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM表达及与耐药表型的关系研究

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM的表达及其与耐药表型的关系。方法选取2016年9月至2018年10月儋州市人民医院微生物培养室分离的Pa 54株,采用琼脂稀释法测定14种抗菌药物的MIC,加外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺(PAβN)进行干预实验,实时荧光定量PCR检测膜融合蛋白mexA、mexC、mexE、mexX的mRNA表达水平,以判断MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM的表达情况,PCR扩增调控基因mexR、nfxB、mexT、mexZ对扩增产物进行测序,使用Blast软件在GenBank上与已知序列进行比对。结果RT-PCR检测发现,耐药菌株中18株(33.33%)Pa高表达MexAB-OprM外排系统,9株(16.67%)高表达MexCD-OprJ外排系统,12株(22.22%)高表达MexEF-OprN外排系统,14株(25.93%)高表达MexXY-OprM外排系统。抑制剂作用下18株MexAB-OprM外排泵高表达Pa株对头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星的MIC为2~64μg/ml,9株MexCD-OprJ高表达株中6株对头孢噻肟的敏感性MIC为2~128 mg/ml,12株MexEF-OprN中对环丙沙星、亚胺培南的敏感性MIC为4~128 mg/ml,14株MexXY-OprM为庆大霉素、环丙沙星高度耐药菌株。分别随机选择mexA、mexC、mexE、mexX高表达菌株中的4个菌株,mexR高表达菌株中发生3个mexR基因突变;4个nfxB高表达菌株中均发生82位的突变;4个mexT高表达菌株中均发生26位的突变;2个mexZ高表达菌株发生138位的突变,1个发生50位的突变。结论主动外排系统MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM过度表达是Pa多重耐药机制之一,同时与其调控基因mexR、nfxB、mexT、mexZ发生突变相关。     

紫杉醇脂质体诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡及其机制的研究

目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对骨肉瘤细胞株的细胞毒作用及其作用机制.方法 以0、0.1、1、10、100μg/L浓度梯度的注射用紫杉醇脂质体培养基作用于骨肉瘤细胞株,通过四甲基偶氮唑蓝法(methy thiazolyh tetrazdium,MTT),倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞分析技术检测细胞凋亡率,蛋白印迹(Western blot)技术分析细胞内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况.结果 不同浓度药物作用于细胞48h后,细胞存活率下降;镜下细胞形态,从梭型趋于圆型,细胞内质聚集,细胞与细胞间距增大,随着药物浓度的逐渐加大,胞浆内颗粒也随之增多,细胞与平皿的附着力减弱,出现不等量的悬浮细胞.流式细胞仪结果显示随着药物浓度的增大,细胞凋亡率随之增高;Western blot显示PCNA的表达逐渐降低.结论 紫杉醇脂质体可以抑制骨肉瘤细胞株MG-63的生长,其机制可能与PCNA有关.     

Poly—HEMA对大鼠剑突软骨细胞体外培养的影响

目的研究多聚2-羟乙基甲基丙烯酸脂（Poly—HEMA）对体外培养大鼠剑突软骨细胞的生物学特性的影响，对细胞进行纯化过程，并作进一步的细胞形态学及细胞特性鉴定。方法无菌条件下取Wistern大鼠剑突，采用剪碎-酶消化法分离单个软骨细胞，台盼蓝染色鉴定细胞活性。将分离得到的细胞分别接种在预先用Poly—HEMA包被的平皿和普通的平皿内，并将普通平皿的细胞进行差速贴壁。结果从剑突软骨可获得大量软骨细胞，每克软骨可获得软骨细胞3．5×10^7个细胞，活性率为95．23％。软骨细胞在Poly—HEMA包被的平皿内培养使细胞始终呈悬浮状态生长，并能长期保持软骨细胞的特性。在普通平皿内经2次差速贴壁得到的软骨细胞纯度较高，但不转接Poly-HEMA包被的平皿内，细胞经过几次传代，即失去软骨细胞原有的特性。结论从剑突可获得大量软骨细胞，使用Poly—HEMA试剂体外培养的软骨细胞，其软骨细胞能长期以悬浮状态生长，并能使软骨细胞长期保持原有的生物学特性，为体外实验及组织工程学的研究提供更优质种子细胞，为临床的进一步研究提供理论基础。     

红细胞天然免疫黏附功能在儿童手足口病中的应用

目的研究手足口病患儿红细胞天然免疫黏附功能(EIIAF)的变化及其临床意义。方法收集手足口病患儿111例,其中死亡组6例,危重组57例,对照组(普通患儿组)48例,对EIIAF进行测定。结果死亡组、危重组和对照组EIIAF检测的中位数(四分位数间距)分别为19.5(11)%、26.0(11)%和38.0(24)%。3组EIIAF分析差异有统计学意义(χ2=24.452,P0.001),死亡组、危重组EIIAF较对照组降低,差异有统计学意义,P0.017。结论 EIIAF对手足口病的预后判断具有参考价值。