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1.
目的:制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1)mAb进行比较。方法:经RT-PCR获得AR基因,将基因插入pGEX-4T-1(His)6C中,构建重组质粒pGEX-4T-1(His)6C-AR,以重组质粒转化E.coliRosetta诱导表达GST-AR蛋白。以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定。使用Clustalx和Antheprot软件,比较AR与ARL-1的同源性,表达GST-dAR[80~142氨基酸(aa)],与ARL-1差异较大;并分析AR的抗原性,表达GST-dA1(1~79aa)、GST-dA2(80~99aa)、GST-dA3(111~142aa)、GST-dA4(143~316aa)。利用AR全长及截短蛋白,采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位。结果:获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、AR7B3G4和ARF10。3株抗GST-AR的mAb均为IgG1(κ型),腹水mAb效价为1∶4×105,细胞培养上清mAb效价为1∶1×104,3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应,而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应。它们分别为抗GST-dA1、GST-dA3和GST-dA4蛋白的mAb。结论:成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的1~79、111~142、143~316位氨基酸。将它们与抗ARL-1mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能,并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具。 相似文献
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目的 探讨猝死病区人群社会支持与生命质量的关系,为制定提高和改善病区人群生命质量的措施提供科学依据.方法 采用横断面入户调查方式,利用社会支持评定量表对病区人群进行社会支持调查,利用世界卫生组织生命质量评定量表简表对病区人群进行生命质量调查.结果 云南猝死病区人群的社会支持总分及主观支持、客观支持维度得分[(40.85±8.34)分、(9.58±3.58)分、(23.86±4.87)分]均低于对照组相同维度得分[(41.82±7.12)分、(10.47±3.26)分、(24.51±4.68)分](均P<0.05).病区人群社会支持利用度[(7.41±2.67)分]与对照人群社会支持利用度[(6.84±2.56)分]之间差异没有统计学意义(P>0.05).用多重线性回归控制家庭人均收入等混杂因素后,社会支持总分、主观支持、客观支持及支持利用度分别与生命质量总分及各维度得分均呈正相关关系(社会支持总分与生命质量各维度的相关系数分别为:0.30,0.11,0.29,0.28,0.36;客观支持得分与生命质量各维度的相关系数分别为:0.15,0.05,0.13,0.14,0.19;主观支持得分与生命质量及各维度的相关系数分别为:0.18,0.06,0.21,0.23;支持利用度与生命质量各维度的相关系数分别为:0.11,0.05,0.10,0.09,0.11)(均P<0.05).结论 云南猝死病区人群获得社会支持较少,且对社会支持的利用度低,使得病区人群生命质量较差,要改善这一状况,必须在提供更多社会支持的基础上,加强对社会支持的利用. 相似文献
5.
随着市场经济体制的建立,在医疗市场竞争日趋激烈又要体现公立医院的公益性的情况下,中医医院如何适应新形势,在生存中求发展?改变传统的医院管理模式和运行机制势在必行.本文重点介绍医院管理模式变革的具体措施,就医院持续发展战略作进一步探讨. 相似文献
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目的:构建急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、NB4的全反式维甲酸耐药株HL-60 R、NB4 R,并对其生物学性状进行鉴定。方法:以全反式维甲酸( ATRA )为诱导药物,采用浓度递增间歇诱导法构建HL-60、NB4细胞相应的ATRA耐药株。 CCK8法鉴定其ATRA耐药性,并检测耐药细胞株的生长曲线及多药耐药性。结果:成功构建了ATRA耐药细胞株HL-60 R、NB4 R,并发现与亲代细胞相比,其生长增殖速度减慢,群体倍增时间延长,且对其它多种化疗药物产生一定程度的交叉耐药。结论:成功构建的耐药细胞系HL-60R、NB4R为急性早幼粒细胞白血病多药耐药机制的进一步研究奠定了基础。 相似文献
9.
人源抗戊型肝炎病毒单克隆抗体的获得与鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 获得人源中和性抗戊型肝炎病毒 (HEV)单克隆基因工程抗体。方法 采用五轮筛选法 (逐轮降低抗原包被量 ,严格洗脱条件 ) ,以固相化的 4种含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV患者外周血源的噬菌体抗体库。获得有特异结合活性的噬菌体抗体 ,酶切鉴定抗体基因插入。切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体 ,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段 ,ELISA、Westernblot检测抗体免疫学活性 ;测序分析抗体基因。结果 筛选出 4株与含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体 ,可能为中和抗体。切去gⅢ基因 ,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段 ,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中差异无显著性。可溶性抗体与含中和抗原表位的HEVORF2重组混合抗原有特异结合活性 ,与BSA、HBsAg无交叉结合反应。Westernblot显示在相对分子质量 (Mr)略大于 4 5× 10 3 处有一明显条带 ,与Mr4 8× 10 3 的Fab大小一致。DNA测序分析表明 ,Fab段VH 属于IgGVH3基因家族 ,VL 属于Vκ1基因家族。结论 利用噬菌体抗体库技术成功获得抗HEV的人源单克隆抗体。 相似文献
10.