限制性显示技术在制备丙型肝炎病毒分型芯片探针的应用性研究

目的探讨限制性显示(restriction display,RD)技术在制备丙型肝炎病毒(HCV)分型芯片探针的可行性.方法用限制性内切酶Sau3A I消化HCV1a、1b、2a亚型全长cDNA,所得的限制性内切酶片段与通用接头相连,通过10个选择性引物进行分组PCR,使得各片段得以扩增并分布于10个亚组中,经聚丙烯酰胺电泳(PAGE)结合银染法进行分离.切胶回收后作3次PCR,得到较纯净的HCV cDNA限制性片段.对这些片段做分子克隆,并测序鉴定.结果由HCV 3个亚型1a、2a、1b的全长cDNA得到66个大小相对均一(200～900bp)的限制性片段,平均每个亚型约22个.测序结果表明,属于HCV基因,可以作为HCV分型芯片的探针.结论RD技术能快速收集大量长度适宜、大小均一的病毒基因片段,适合于分型诊断基因芯片探针的收集.     

siRNA抑制HPV18 E6 基因对HeLA细胞凋亡的影响

目的 研究特异小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)对宫颈癌HeLa细胞中人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）18型 E6基因的抑制及其对细胞凋亡的影响。方法 针对HPV18 E6 基因设计siRNA序列，经PCR方法体外扩增，得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物，利用LipofectamineTM2000脂质体转染HeLa细胞，在U6启动子的作用下于细胞内转录siRNA。针对转染后不同时间点采用四唑盐（MTT）比色法测定细胞活力，流式细胞仪PI染色法检测细胞凋亡率，RT-PCR测定HPV18 E6 mRNA变化。结果 转染siRNA后细胞活力受到显著抑制（P＜0.05），光镜下出现明显的凋亡形态，72h 的凋亡率达到55.8%。RT-PCR结果显示，细胞转染24、48和72h后HPV18 E6 mRNA分别减少了57％、78％和40%，而siRNA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论 siRNA可特异有效的干扰宫颈癌HeLa 细胞内HPV18 E6基因的表达，从而可诱导肿瘤细胞凋亡。     

宫颈癌组织中HPV16E6序列多态性及同源性分析

目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E6基因序列的多态性及同源性。方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E6,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而分析其同源性。结果50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例。含有HPV16型的标本34例中扩增出HPV16E625例。其中178位核苷酸变异较大,变异率为72%,其相应氨基酸均由天冬氨酸变为谷氨酸。结论HPV16E6DNA序列发生碱基替换的区域主要在氨基端94~241位,羧基端相对保守,未见变异。广东地区宫颈癌组织中HPV16E6的热点突变为Nt178。     

知识分子人群代谢综合征患病及危险因素分析

目的 分析合肥市高级知识分子人群中代谢练合征（MS）的患病情况及主要危险因素，为MS的防治提供依据。方法 通过整群抽样。对合肥市4726名35岁以上具有高级职称的科研人员进行横断面调查，比较不同年龄、性别的MS及各种代谢异常患病率，同时进行相关危险因素Logisitic回归分析。结果 该人群MS患病率为14．5％，且随着年龄的增长患病率呈增加趋势；MS相关危险因素中，性别、年龄、食盐摄入、腌制食品、肉类摄入、高血压家族史等因素差异有统计学意义，其中肉类摄入为保护因素。结论 高级职称科研人员中MS患病率状况不容乐观。应作为MS高危人群开展预防保健工作。     

不同性别不同年龄成年人体成分测量指标的检测分析

目的探讨安徽省不同性别、不同年龄成年人体成分检测指标的差异,为安徽省成年人的健康指导及慢性疾病预防提供数据参考。方法选取2018年1～12月在安徽医科大学第一附属医院体检的4 944位体检者,按性别不同分为男性组2 556人和女性组2 388人;再对不同性别组按不同年龄(y)分为5组[18≤y <30岁组; 30≤y <40岁组; 40≤y <50岁组; 50≤y <60岁组;y≥60岁组(在男性中为60≤y≤83岁组,在女性中为60≤y≤81岁组)];比较男性组和女性组体成分测量指标(体质指数、体脂肪含量、体脂百分比、腰臀比、内脏脂肪面积、去脂体质量、骨骼肌肉量、骨矿物质含量、蛋白质含量及浮肿指数)差异,同时分析不同性别人群上述各项体成分测量指标在不同年龄层的变化。结果①女性组体脂肪含量、体脂百分比及浮肿指数均高于男性组,其余各项指标男性组均高于女性组,差异均有统计学意义(P <0. 05);②男性体质指数、体脂肪含量和腰臀比在30≤y <60岁各年龄组均高于18≤y <30岁组,差异有统计学意义(P <0. 05);体脂百分比、内脏脂肪面积和浮肿指数在y≥30岁各年龄组均高于18≤y <30岁组,差异有统计学意义(P <0. 05);去脂体质量、骨骼肌肉量、骨矿物质含量及蛋白质含量在y≥50岁各年龄组均低于18≤y <30岁组,差异有统计学意义(P <0. 05)。女性体质指数、腰臀比及内脏脂肪面积在y≥30岁各年龄组均高于18≤y <30岁组,差异有统计学意义(P <0. 05);体脂肪含量、体脂百分比及浮肿指数在y≥40岁各年龄组均高于18≤y <30岁组,差异有统计学意义(P <0. 05);去脂体质量、骨骼肌肉量、骨矿物质含量及蛋白质含量在y≥60岁组均低于18≤y <30岁组,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论安徽省成年人体成分存在性别差异,女性体脂肪含量高于男性,男性内脏脂肪面积及骨骼肌肉量高于女性;成年人体成分在不同年龄间亦存在差异,脂肪组织含量及浮肿指数在高年龄段增加,而其他非脂肪组织含量在高年龄段减低。     

对文献报道利奈唑胺致黑舌和黑毛舌病例的分析

目的:分析利奈唑胺致黑舌和黑毛舌的发生特点,为临床合理用药提供参考.方法:检索2000年4月～2020年7月CNKI、VIP、WanFang Data,PubMed,Web of Science、Science Direct、Medline 数据库,筛选获得利奈唑胺致黑舌和黑毛舌病例报道的相关文献,提取患者的性别、年龄...     

ω-3多不饱和脂肪酸对冠状动脉旁路移植术后炎症反应的影响

目的 探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)对冠状动脉旁路移植术后炎症反应的影响.方法 将50例行体外循环冠状动脉旁路移植术患者随机分为观察组和对照组,分别进行含ω-3 PUFAs与不含ω-3 PUFAs的肠外营养(PN)治疗.于PN治疗前1 d和治疗后第1、5天抽取外周静脉血,测量炎症反应指标:白细胞计数(W...     

星形胶质细胞条件培养液对tbOOH致PC12细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨星形胶质细胞条件培养液对活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法 以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的条件培养液培养tbOOH应激的PC12细胞,采用荧光显微镜和透射电镜形态观察细胞凋亡;用流式细胞术测定细胞凋亡率的变化;用巴比妥酸法评估细胞内丙二醛含量的变化。结果 tbOOH可诱导PC12细胞凋亡,而星形胶质细胞条件培养液可降低其凋亡;同时,巴比妥酸法显示星形胶质细胞条件培养液可显著性降低PC12细胞丙二醛含量(P<0.05)。结论 星形胶质细胞条件培养液有提高PC12细胞抗氧化能力,可抑制活性氧tbOOH诱导的神经细胞凋亡。     

白藜芦醇对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤保护作用研究

目的：观察白藜芦醇(RES)对大鼠肾脏缺血-再灌注(I/ R)保护作用并初步探讨其相关机制。方法 SD 大鼠随机分为4组：空白对照组、I/ R 模型组、白藜芦醇(RES)处理组、RES + IR 模型组;检测各组大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及肾脏病理学改变,使用超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒检测肾脏组织 SOD、MDA、GSH-PX 产生;Western blot 法检测肾脏组织 p-AKT 蛋白水平。结果与空白对照组相比,I/ R模型组 Cr、BUN 含量均有升高,与 I/ R 模型组相比,RES + I/R 模型组 Cr、BUN 含量均有明显下降;病理学检测显示 RES+ I/ R 模型组肾脏损伤较 I/ R 模型组明显减轻,肾小球结构基本正常,细胞间质有少量炎性细胞浸润,基底膜稍有增厚;与空白对照组相比,I/ R 模型组 SOD、MDA、GSH-PX 含量均有升高,与 I/ R 模型组相比,RES + I/ R 模型组 SOD、GSH-PX含量均有明显下降; Western blot 检测显示,与空白对照组相比,I/ R 模型组 p-AKT 表达水平有所降低,但 RES 可提高 p-AKT 表达水平,差异有统计学意义。结论 RES 通过氧化应激保护 I/ R 肾脏损伤,其作用机制可能与 PI3K/ AKT 信号通路活化有关。     

Vimentin基因敲除HIV-1 gp120转基因小鼠模型的构建

目的 构建波形蛋白（VIM）基因敲除和gp120转基因（gp120 Tg）小鼠模型。方法 将VIM基因敲除小鼠（VIM-/-）和gp120 Tg小鼠杂交（F0代）,然后在产生的子代（F1）中,取分组为VIM+/-/gp120Tg的小鼠一公一母杂交,得到基因型分别为VIM+/+、 VIM+/-、VIM-/-和VIM+/+/gp120 Tg、VIM+/-/gp120 Tg、VIM-/-/gp120 Tg的6组小鼠。其中VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/ gp120这4组小鼠互为对照。用PCR法鉴定这上述6组小鼠的基因型,免疫印迹法检测小鼠脑组织中VIM和gp120的表达情况。结果 4组基因型VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/gp120Tg小鼠的PCR结果符合预期,免疫印迹结果显示VIM-/-/ gp120Tg小鼠VIM无表达,gp120过表达（P<0.001）,符合预期结果。结论 成功构建了VIM基因敲除gp120转基因小鼠模型,为深入研究波形蛋白在gp120神经毒性作用中的作用机制提供了坚实的研究基础。