利福霉素B发酵放大Ⅰ.从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大

研究了溶氧和剪切力对地中海拟分枝酸菌XC-925发酵产生利福霉素B的影响,并对利福霉素B从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大及15L发酵罐流加补料发酵进行了研究.利用摇瓶研究结果表明地中海拟分枝酸菌XC-925发酵产生利福霉素B时对溶氧要求较高,而对剪切力不太敏感.以溶氧为依据,在15L发酵罐间歇发酵过程中,控制溶氧不低于25%,利福霉素B的发酵效价可达到10000u/ml左右,发酵周期(6d)较摇瓶发酵缩短了1d.15L发酵罐如采用流加补料发酵工艺,利福霉素B的发酵效价还会有较大幅度提高.     

螺旋霉素高产菌种的推理选育

根据螺旋霉素的生物合成途径对螺旋霉素产生菌产二素链霉菌进行推理选育，并获得了高产菌种。首先在紫外线诱变的基础上，筛选豆油耐性变株，得到菌株ＸＣ２－３７，其发酵效价较出发菌株ＸＣ１－２９提高９％。通过培养基优化，菌株ＸＣ２－３７的发酵效价提高６１．８％。再以紫外线处理菌株ＸＣ２－３７，并筛选缬氨酸诱导变株，得到菌株ＸＣ３－１１，其发酵效价较菌株ＸＣ２－３７提高２０％。菌株ＸＣ３－１１经自然分离得到菌株ＸＣ４－１８，发酵效价达到４５００ｕ／ｍｌ，为原始出发菌株ＸＣ１－２９的２．２５倍。传代试验表明菌株ＸＣ４－１８的高产遗传特性稳定。菌株ＸＣ４－１８应用于５０ｍ３发酵罐进行工业化生产，与原始出发菌株ＸＣ１－２９相比，发酵效价和发酵指数分别提高８４．９％和４３．６％。     

利福霉素B产生菌的推理选育

利福霉素B由地中海拟分枝酸菌产生，本文对工业生产菌株A.mediterraneiX1－02进行进一步筛选。采用推理选育的方法使产生菌减轻由芳香族氨基酸（色氨酸（tup）、苯丙氨酸、酪氨酸)和对羟基苯甲酸（PHBA，pbh）引起的对利福霉素B生成合成的反馈抑 制作用，并提高对前体丙酸（prp）的耐受量。通过UV诱变提高诱变株的耐受性，获得了高产菌株A.mediterraneiXC9－25（trp′，phb′，prp′），其生产能力达到10000u/ml，较原始出发菌株A.mediterraneiX1－02提高了1．385倍。动力学试验结果利用福霉素B的生物合成与菌体生长不同步，属于非生长偶联型。