组织芯片技术及其在新药毒理学研究中的应用

组织芯片(tissue microarray,TMA)也称组织微阵列,是将数十个甚至上千个微小组织标本整齐排列在一张载玻片上制成的高通量微阵列,是基因芯片的延伸和发展,可以同时进行多个标本的同一个指标的研究,具有体积小、耗材少、快速、含生物学信息量大等优点,该技术还可以与免疫组化(immunohistochemistry,ICH)、荧光核酸原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)、RNA原位杂交(RNA in situ hybridization,RNA-ISH)等技术相结合,在基因、转录和表达产物的不同表达分子水平进行研究。本文结合组织芯片技术的特点,对其在新药毒理学研究中的应用进行初步探讨。     

大鼠肝睾酮羟化酶体外诱导模型的建立

目的建立大鼠原代培养肝细胞微粒体睾酮羟化酶系列同工酶(CYP2A1,CYP2B1/2,CYP2C11,CYP3A1/2)的体外诱导模型。方法应用胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养;用苯巴比妥钠(PB,1mmol·L-1)、地塞米松(Dex,10μmol·L-1)和β-萘酚黄酮(β-NF,50μmol·L-1)诱导培养肝细胞72 h,提取肝细胞微粒体,进行其肝CYP总量、肝微粒体蛋白含量和睾酮羟化酶比活性的测定。另外采用体内诱导方法,SD大鼠分别给予PB 80mg·kg-1,Dex50mg·kg-1和β-NF80mg·kg-1,ip,每天1次,连续5d,停药24h后制备肝微粒体进行上述指标的测定。结果在体外和体内实验中,PB,Dex和β-NF对肝微粒体蛋白含量、CYP总量和睾酮羟化酶同工酶活性均具有较高的诱导效应。PB对肝CYP总量在体外的诱导效应高于体内,对睾酮不同位置羟化作用的诱导效应体内外无显著性差异;Dex和β-NF对肝CYP总量及睾酮不同位置羟化作用的诱导效应体内外无显著性差异。结论大鼠肝睾酮羟化酶体外诱导模型可替代体内实验,用于药物代谢、新药安全性评价及其他外源性化合物代谢和毒性研究。     

rh-EGF对恒河猴肝细胞色素P450s的影响

目的研究重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh-EGF)对恒河猴肝细胞色素P450s同工酶活性的影响.方法恒河猴口服rh-EGF 16,32,160μ*kg-1*d-1,qd,连续给药26周,于停药时及停药8周后,各解剖一半动物,制备肝微粒体,进行肝细胞色素P450s总量、肝微粒体蛋白含量测定,用荧光分光光度法和HPLC法进行肝细胞色素P450s同工酶中7-乙氧基试卤灵脱乙基酶(CYP1A1)、香豆素7-羟化酶(CYP2A6)、甲苯磺丁脲羟化酶(CYP2C8/9)、S-(+)-美芬妥英羟化酶(CYP2C19)、丁呋洛尔1-羟化酶(CYP2D6)、氯唑沙宗羟化酶(CYP2E1)比活性测定.结果给药26周和停药8周后,rh-EGF对恒河猴肝细胞色素P450s总量、微粒体蛋白含量无明显影响,肝细胞色素P450s同工酶(CYP1A1,CYP2A6,CYP2C8/9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1)活性无显著变化.结论本试验建立的恒河猴肝细胞色素P450s测定方法快速、简便,可广泛用于药物开发早期以及预测药物间相互作用和药物毒性的研究等.rh-EGF对恒河猴肝P450s部分同工酶无影响.     

接受OECDGLP监管机构检查体会

本综述从检查前准备、首次会议、现场检查、末次会议、检查后整改和国内外GLP榆查不同点等方面阐述接受OECDGLP监管机构检查的体会。     

利用蛋白质组学技术研究Z24对大鼠给药肝脏蛋白质表达的改变

目的利用2-DE-MAIDI-TOF MS/MS技术研究Z24对大鼠给药肝脏蛋白质表达的改变,探索Z24对大鼠肝毒性的作用机制。方法雌性Wistar大鼠,每组6只,以不同剂量Z24(0、50、100和200mg/(kg.d))连续5d灌胃给药后处死动物,一部分做病理检查,一部分用于蛋白质组分析。考马斯亮蓝R-250染色,Image Master 2D Platinum5.0软件进行图像分析,确定发生表达变化的差异蛋白点(P<0.05),选取分离好且呈一定剂量关系的蛋白点进行质谱鉴定,MS/MS-MS方法获取差异蛋白的肽质量指纹图谱和序列信息,在IPI-RATv3.23数据库中进行搜索,以C.I.%>95%作为判断依据鉴定差异蛋白,检索差异蛋白的生物学功能,分析Z24肝毒性的作用机制。结果血浆生化检测结果显示,与对照组相比,50mg/kg组ALP、Tch含量升高(P<0.05),100mg/kg组ALP、TG和Tch含量升高(P<0.05),200mg/kg组ALT、AST、ALP、AL、TBI、TG和Tch含量升高(P<0.05);AST、ALP、TBI和Tch含量变化呈剂量-效应关系。肝组织病理结果显示,各给药组动物肝脏均发生了不同程度的肝细胞空泡变性及纤维组织增生,且病变程度随剂量增加而加重。以上结果表明本实验剂量下Z24已引起了大鼠肝损伤。2-DE结果显示,与对照组相比,50、100和200mg/kg组分别有101、115和139个蛋白点发生明显的表达改变(P<0.05),其中100和200mg/kg组同时改变的有28个,50、100和200mg/kg组同时改变的有29个;对其中的31个差异点进行了质谱分析,共鉴定出22种蛋白,其中下调的有烯醇基辅酶A水解酶、丙酰辅酶A羧化酶α链、甘油-3-磷酸脱氢酶1、支链酮酸脱氢酶E1、二氢硫辛酰胺脱氢酶、甘氨酸N-甲基转移酶、3-α-羟化类固醇脱氢酶、电子转移黄素蛋白脱氢酶、ATP合酶D链、醛脱氢酶和硒结合蛋白2等,上调的有谷胱甘肽S-转移酶等。结论支链酮酸脱氢酶E1和二氢硫辛酰胺脱氢酶是α-酮酸脱氢酶复合体成分,参与糖有氧氧化;烯醇基辅酶A水解酶参与脂肪酸β氧化;甘氨酸N-甲基转移酶参与甲硫氨酸循环;电子转移黄素蛋白脱氢酶和ATP合酶与能量代谢有关;醛脱氢酶和谷胱甘肽S-转移酶等与生物转化有关,这些蛋白表达的改变提示Z24肝毒性作用与糖代谢、脂类代谢、氨基酸代谢、能量代谢紊乱有关。     

来氟米特是否诱导大鼠发生肺纤维化

目的:研究来氟米特是否诱导大鼠发生肺纤维化。方法:SD大鼠90只,随机分5组,每组18只。分别单次气管内给予生理盐水1.25 mL·kg~(-1)、来氟米特(2mg·kg~(-1),15mg·kg~(-1))、来氟米特杂质(0.02mg·kg~(-1))和博来霉素(5mg·kg~(-1)),给药后2和4wk收集出肺血液,检测其中丙二醛(MDA)和NO_2~-/NO_3~-的含量;给药后1、2和4wk,肺称重计算肺系数,用Masson三重染色和天狼猩红特殊染色,光镜和电镜检查肺组织的病理变化;免疫组织化学法检测肺组织中TGF-β1表达。结果:单次气管内给药后,与生理盐水组相比,来氟米特低、高剂量组出肺血液中MDA和NO_2~-/NO_3~-的含量无明显变化,而博来霉素组显著升高(均P<0.01)。与生理盐水组相比,来氟米特低、高剂量组大鼠肺系数无明显变化,而博来霉素组显著增大(P<0.01)。来氟米特给药组大鼠未发生肺纤维化毒性反应病理变化,而阳性对照博来霉素组出现典型的早期肺炎和后期肺纤维化的病理变化。结论:来氟米特未诱导大鼠发生肺纤维化的不良反应。     

药物诱导的肺纤维化

药物诱导的肺损伤呈多样性,以间质性肺炎和纤维化最常见。引起肺损伤的药物主要有细胞毒类、抗生素类、心血管类、非甾体抗炎类和青霉胺类等。药物诱导的肺纤维化可能与氧自由基的释放和多种细胞因子如IL-1β和TNF-α的产生有关。本文对可能诱导肺纤维化的药物及其作用机理进行初步探讨。     

肝脏体外实验模型在毒理学中的应用

简要介绍了肝脏体外实验模型,并简述了其在外源性化合物毒性、药物代谢和新药研发中的应用.     

GLP实验室中QAU的检查类型及其功能

目的确保GLP实验室中非临床试验的质量和完整性。方法QAU检查包括基于试验的检查(Study-based inspection)、基于过程的检查(Process-based inspection)和基于设施的检查(Facility-based inspection)。结果实验室的GLP规范遵从水平维持良好。结论QAU须从不同的试验或设施的多种角度或不同水平进行检查,不断提高GLP规范遵从水平。