发菜基因组DNA提取方法比较与分子鉴定研究

目的 以发菜为研究对象比较不同的提取DNA方法,筛选出了一种适合快速提取发菜DNA的方法。方法 分别利用自主研发的硅珠DNA纯化技术、细菌试DNA提取试剂盒和植物DNA提取试剂盒提取发菜基因组DNA。结果 本实验室开发的硅珠DNA提取纯化技术具有快速、无毒以及获得的发菜DNA纯度高等优势。通过PCR扩增和测序得到16S rRNA基因,利用Blast软件进行序列比对,与发菜同源性为99%。结论 本研究研制的发菜基因组DNA提取方法可用于发菜源性的分子鉴定。     

已烯雌酚在中期妊娠引产中的应用

我们于1988～1993年5年间对中期妊娠(孕16～28周)妇女应用己烯雌酚引产,收到比较满意的效果,现报告如下。对象与方法:对200例中期妊娠者引产前应用己烯雌酚肌肉注射,另200例中期妊娠引产者不用己烯雌酚,作为对照组。方法:己烯雌酚(上海第九制药厂生产)每次肌肉注射2mg,每日2次,连用3天。第4天按常规经腹羊膜腔内推注利凡诺0.1g。     

阿胶加工工艺过程中DNA降解规律研究

目的：本文以阿胶传统工艺加工过程样品为研究对象,探讨关键加工阶段阿胶样品中驴基因组DNA核基因和线粒体基因的降解变化规律。方法提取阿胶工艺过程中的驴基因组DNA,分别利用超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复（ SSR）微卫星毛细管电泳（ CE）检测方法对提取的DNA质量进行评价。结果研究结果显示,在原料驴皮、化皮、双效、浓缩和加辅料阶段,琼脂糖凝胶电泳均能检测到清晰的条带,普通PCR可扩增到200~1600 bp左右的片段,而在凝胶阶段DNA降解最为严重,只能利用琼脂糖凝胶电泳检测到100~800 bp的目的片段,利用荧光定量PCR检测技术线粒体基因在阿胶加工各个阶段均可检测出,核基因凝胶阶段未检出;通过PCR-SSR-CE检测在凝胶阶段核基因未检出特征峰,更进一步证明了凝胶阶段DNA核基因降解严重。结论对阿胶工艺加工过程DNA变化规律发现,随着阿胶加工的深入进行,各个阶段DNA发生不同程度的降解,其中凝胶成品阶段降解最为严重,本研究对比普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复微卫星毛细管电泳检测方法,发现荧光定量PCR检测方法最快速、灵敏和可靠,通过比较发现以线粒体基因为靶基因在阿胶的各个加工阶段均能满足DNA溯源的要求。     

53例直肠癌术后结肠造口的护理

直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于胃癌。我国直肠癌发病年龄中位数在45岁左右。近年来青年人发病率有增高趋势。而低住性直肠癌患者行Miles术后改变了患者正常的排泄方式,需要终生使用人工肛门,这样不仅给患者的日常工作生活带来及大的不便,也给其心理、生理带来及大的痛苦。使其生活质量受到严重影响。因而结肠造口的护理显得非常的重要和必要。     

北柴胡成花基因的克隆及时空表达分析

开花是植物生长发育的关键环节,本研究从北柴胡植株中克隆得到4个与成花相关的基因,分别命名为BcSVP、BcPAF1、BcCO、BcFT,并进行了同源性比对;以actin和EF-1α作为双内参,对4个基因在北柴胡植株不同器官和不同发育阶段的时空表达差异进行分析.结果表明,BcSVP主要在根中表达,相对表达量较低;BcP4...     

利用多重荧光定量PCR检测阿胶原料驴、马、驴骡和马骡皮张的源性

目的 建立快速检测阿胶原料皮张源性的方法.方法 根据马、驴、驴骡和马骡的核基因肌酸激酶CKM和线粒体基因组DNA(mtDNA)的16S rRNA基因序列设计特异,并引入18S rDNA作为内参质控,建立能检测4种动物源性的5重多色荧光定量PCR检测体系.结果 本研究开发的引物和分子信标探针的特异性强,能同时区分同源性相近的驴、马、驴骡和马骡源性;灵敏度高,检测限为0.01 ng·μL-1.通过对某阿胶制品公司收购的驴皮源性检测,检测结果与DNA测序一致率达100％.结论 本方法在一管PCR反应中能同时检测4种动物源性,更简单、准确和高效,为驴皮、马皮及骡子皮张的源性鉴定探索了新的途径.     

柴达木盆地鼠疫动物病调查研究

柴达木盆地位于青海省西北部,东经90～99°,北纬36～39°之间,东西长约500Km,南北宽约300Km。是青海省主要矿区,境内子午沙鼠的分布较广泛,且曾被发现自然携带鼠疫菌,因此,对其进行流行病学调查具有重要的意义。本文系统的整理了青海省1962～1988年在柴     

药用贝母属系统发育关系分析及多重实时荧光PCR检测方法的建立

目的探讨多重实时荧光PCR检测方法对川贝母及伪品鉴别的可行性。方法通过对常见贝母属植物的ITS、psb Atrn H、rbc L和matK基因序列种间变异、遗传距离及系统发育关系分析,选择进化速率快、种间变异大、种内变异小的基因作为靶基因,设计川贝母及伪品贝母的特异性引物和Taqman探针,建立一种多重实时荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度及混合样本检测与测序方法比较进行方法评估。结果贝母属ITS和psb A-trn H变异位点高于rbc L和mat K,通过遗传距离分析rbc L和mat K基因显著低于ITS和psb A-trn H基因,以ITS作为靶基因,建立多重实时荧光PCR检测方法特异性强,灵敏度达0.01ng,对18份样本抽查检出4份伪品贝母,检测结果与构建的NJ树聚类分析结果完全一致。结论基于ITS区域序列为靶基因建立多重实时荧光PCR检测方法能够成功鉴定川贝母及其混伪品,为川贝母真伪鉴别提供依据。     

基于DNA条形码和特异性PCR技术鉴别蚂蟥及其常见伪品

目的：建立蚂蟥特异性PCR鉴别方法,能够快速准确地鉴别蚂蟥与其常见伪品。方法：通过分析蚂蟥与其常见伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）序列,寻找蚂蟥SNP变异位点,设计特异性引物;通过对退火温度、循环次数、DNA模板量及Taq酶等关键因素的考察,确立最优反应体系及条件,并将特异性PCR方法应用到水蛭（蚂蟥）粉末中进行药材粉末的基原鉴别,同时为保证试验结果的准确性,将PCR扩增产物进行一代测序。结果：特异性PCR结果表明蚂蟥在400～600 bp有单一明亮条带,常见混伪品则无此条带,试验结果与一代测序结果一致,为蚂蟥。结论：该方法能够将蚂蟥与其常见伪品菲牛蛭、东北小水蛭、黑条、小黑条等区别,且能鉴别水蛭（蚂蟥）粉的基原,为提升中药监管力度,打击中药掺伪行为提供了强有力的技术支持。