HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立

目的 建立一种简便，准确，实用的乙型肝炎病毒（HBV）耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法。方法 根据已公布的HBVDNA序列，在HBV多聚酶基因区设计并合成了两对寡核苷酸引物，其中一只为错配引物；应用巢式错配聚合酶链反应特异性扩增含有HBV多聚酶基因YMDD基序的片段，扩增产物用限制性内切酶（NdeⅠ）酶切，琼脂糖凝胶电泳，观察酶切后的目的片段限制性片段长度多态性（RFLP）图谱，部分标本进行DNA测序，结果 （1）所建立的巢式错配PCR-RFLP方法操作简便，快速，从DNA提取到酶切后电泳分析仅需要11小时；灵敏度高，可以检测到10^3copies/ml的HBVDNA；特异性强，结果准确，经DNA测序证实，（2）应用该方法对20例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清进行了检测，发现YMDD变异者（45%）9例，YMDD野毒株者（55%）11例，表明该方法可有效地鉴别HBVYMDD野毒株与变异株，结论 本实验所建立的巢式错配PCR-RFLP方法简单，敏感，特异，适合于一般实验室应用及大规模的人群调查。     

HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立

目的：建立一种简便，准确，实用的乙型肝炎病毒（HBV）耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法。方法：根据已公布的HBV DNA序列，在HBV多聚酶基因区设计合成了两对寡核苷酸引物，其中一只为错配引物；应用巢式错配聚合酶链反应（PCR）特异性扩增含有HBV多聚酶基因YMDD基序的片段，扩增产物用限制性内切酶（NdeI)酶切，琼脂糖凝胶电泳，观察酶切后目的片段的限制性片段长度多态性（RFLP）图谱，部分标本进行DNA测序。结果：（1）所建立的巢式错配PCR－RFLP法，从DNA提取到酶切后电泳分析仅需要11小时，灵敏度高，可以检测到10^3copies/ml的HBV DNA；特异性强，结果准确，经DNA测序证实。（2）检测20例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清，发现YMDD变异者（45％）9例，YMDD野毒株者（55％）11例 ，表明该法可有效地鉴别HBV YMDD野毒株与变异株。结论：本实验所建立的用于检测HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异的巢式错配PCRRFLP方法简单，敏感，特异，适用于一般实验室及大规模的人群调查。     

耐拉米夫定HBV多聚酶基因变异检测方法的建立及应用

拉米夫定(lamivudine,3-TC)是一种胞嘧啶核苷类似物，可以显著地抑制乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶活性，从而抑制HBVDNA复制，迅速降低HBVDNA的水平，改善临床生化指标，改善肝脏组织学的病变，是一种慢性乙型肝炎抗病毒新药。但由于其抑制病毒复制作用不持久，停药后易复发，故需要长期用药。部分病人用药半年以上可出现耐药性基     

胸腺肽α1治疗老年血流感染85例

血流感染是由各种病原微生物和毒素侵入血流引起的血液感染,血流感染病死率高,是严重威胁患者尤其老年患者生命的疾病之一~([1]).     

慢性间歇低氧老龄大鼠脑血管内皮功能的研究

目的 探讨慢性间歇低氧(CIH)对老龄鼠脑血管及内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用间歇低氧处理方式建立CIH老龄大鼠实验模型,实验3、6、9周后,检测血浆ET-1、NO和VEGF的含量;观察脑血管病理变化与脑组织中小动脉血管壁厚度与外径之比(WT%)与VEGF蛋白的表达.结果 CIH组血ET-1、VEGF表达均增加,NO表达减弱,从第3周ET-1含量较空白对照(UC)组增高(t=2.47,P<0.05),VEGF含量较空白对照(UC)组升高(t=2.38,P<0.05),NO含量较UC组降低(t=2.39,P<0.05).VEGF水平与间歇低氧时间呈正相关,第9周[(171.1±13.5)pg/ml]表达最强,与第3周[(129.3±12.3)pg/ml]比较升高明显(t=2.38,P<0.05),较UC组[(109.8±8.6)pg/ml]增高(t=3.46,P<0.01).光镜下UC组脑血管未见明显的病理变化,CIH组可见脑细胞水肿和血管增生.CIH组大鼠脑小动脉WT%改变从第3周即强于UC组(t=2.34,P<0.05),脑组织VEGF的表达在CIH组各时间段均显著高于UC组(t=2.37,P<0.05),随着CIH作用时间的累积,脑组织VEGF和脑小动脉WT%改变均有加重的趋势,第9周明显高于第3周(t=2.32和t=2.35,均P<0.05).结论 CIH可诱导老龄大鼠ET-1、VEGF表达增强,NO水平下降,导致脑细胞肿胀,小动脉管壁增厚,管腔狭窄,提示纠正VEGF、ET-1/NO的表达紊乱应成为OSAS综合防治的一个重要方面.     

血管内皮生长因子及其受体对缺血性脑卒中的保护作用

缺血缺氧可以诱导血管内皮生长因子(VEGF)的表达。血管内皮生长因子通过与受体结合促进血管内皮细胞增殖,参与血管新生,改善缺血性脑卒中局部脑组织的血液供应,提高了脑修复,抑制缺血性脑卒中脑神经元凋亡,发挥神经保护作用,降低了脑细胞死亡。本文简要综述了血管内皮生长因子家族的生物学特点及该家族在缺血性脑卒中的神经保护作用。     

乙型肝炎病毒耐拉米夫定P基因变异的研究

我国是病毒性肝炎的高发区 ,全国约有 1 3亿慢性乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染者 ,其中约 30 0 0万是需要进行抗病毒治疗的慢性进展性肝病患者。以前治疗措施主要依赖于干扰素 α ,但干扰素 α疗效并不理想 ,且有一些不良反应 ,一定程度上限制了其应用。新近发展的核苷类似物可抑制ＨＢＶ复制 ,是慢性乙型肝炎治疗的一大突破。目前已经上市的拉米夫定 (Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ ,3ＴＣ)最具有代表性 ,它可以显著地抑制ＨＢＶＤＮＡ水平 ,减轻肝脏的炎症 ,改善临床生化指标。但长期治疗可引起ＨＢＶ多聚酶基因变异 ,导致病毒耐药 ,从而影响拉米夫…     

原发性肝细胞性肝癌及胆囊管状腺癌并存1例

1　病例报告患者 ,女 ,5 7岁。因反复右上腹疼痛 3 0余年 ,加重伴发热10天于 2 0 0 0年 10月 3 1日入院。患者于 3 0年前无明显原因及诱因出现反复右上腹部疼痛 ,为间歇性隐痛 ,尤以进食脂餐后为重。 12年前曾在外院行Ｂ超检查时发现“胆囊炎 ,胆囊结石”。 10天前出现发热 ,体温波动在 3 7.3～ 3 9.2℃之间。查体 :腹平软 ,右季肋区肋间隙稍增宽 ,肝右肋下 1.5ｃｍ ,稍触痛 ,质韧 ,未扪及明显结节 ,右肋下可触及胆囊 ,约 3ｃｍ× 4ｃｍ大小 ,Ｍｕｒｐｈｙ氏征 (+ ) ,肝区轻叩痛。余无特殊异常。辅助检查 :血常规见白细胞总数及中性粒细胞偏…     

耐拉米夫定HBV多聚酶基因变异检测方法的建立及应用

拉米夫定 (lamivudine,3-TC)是一种胞嘧啶核苷类似物 ,可以显著地抑制乙型肝炎病毒 (HBV)多聚酶活性 ,从而抑制HBVDNA复制 ,迅速降低HBVDNA的水平 ,改善临床生化指标 ,改善肝脏组织学的病变[1 ,2 ] ,是一种慢性乙型肝炎抗病毒新药。但由于其抑制病毒复制作用不持久 ,停药后易复发 ,故需要长期用药。部分病人用药半年以上可出现耐药性基因变异 ,耐药变异出现前后 ,可能会伴有HBVDNA水平和肝功能的变化。故需要密切观察病情变化 ,进行HBV耐药性基因变异的检测 ,以指导临床准确、合理用药。在本研究中 ,我们根据已公布的HBV基因组…