钙调磷酸酶B同源蛋白2核定位对宫颈癌HeLa细胞增殖能力的影响

目的研究钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)在细胞核内定位对人宫颈癌HeLa细胞增殖能力的影响。方法将CHP2核输出信号序列(NES)突变,转染HeLa细胞,从而使CHP2定位在细胞核内,采用MTT法检测HeLa细胞的细胞活力的改变;利用软琼脂集落形成实验观察HeLa细胞集落形成大小和数量的变化;通过体内实验观察HeLa细胞在小鼠体内的成瘤能力。结果荧光共聚焦显微镜显示突变型CHP2(CHP2-NESm)主要定位在HeLa细胞的细胞核内和细胞质,而野生型的CHP2主要定位于细胞质;MTT法结果表明转染CHP2-NESm的HeLa细胞的活力显著强于转染野生型CHP2和空载体的细胞;软琼脂集落形成实验结果表明,转染CHP2-NESm的HeLa细胞的集落数量和集落大小均明显大于转染野生型CHP2和空载体的细胞(P<0.05);体内实验结果显示,转染CHP2-NESm的HeLa细胞较转染野生型CHP2的细胞的成瘤能力增强(P<0.05)。结论 CHP2细胞核内的定位对调控HeLa细胞的增殖能力发挥重要的作用。     

洁利33灭蚊蝇窗纱涂剂效果监测研究

在南京军区联勤部军事医学研究所的指导下,笔者对“洁利33灭蚊蝇窗纱涂剂”进行效果监测研究。现将结果报告如下:1 材料与方法1.1 材料“洁利33灭蚊蝇窗纱涂剂”由南京军区联勤部军事医学研究所提供。1.2 方法 对施药前室内用目测法进行调查,     

抑制钠氢交换蛋白下调IL-8表达和促进p38磷酸化

我们前期的研究证明,抑制钠氢交换蛋白1(NHE1)可以减少VEGF表达从而抑制K562细胞诱导的血管生成。本研究探讨抑制NHE1后其他可能的血管生成因子变化及相关机制。用NHE1特异性抑制剂卡立泊来德10μmol/L处理K562细胞;蛋白芯片筛选NHE1抑制后血管生成因子的表达变化,实时定量PCR验证卡立泊来德处理后白介素-8(IL-8)的表达水平;构建K562稳定干扰NHE1细胞株,实时定量PCR验证干扰NHE1后IL-8的表达变化,Western blot检测卡立泊来德处理后细胞内p38磷酸化水平;p38抑制剂SB203580处理K562细胞,实时定量检测IL-8表达变化。蛋白芯片筛选结果显示,卡立泊来德处理后K562细胞中IL-8表达显著下调;实时定量结果进一步验证了这种抑制效应;卡立泊来德处理后p38磷酸化水平显著上调;卡立泊来德处理后加入SB203580抑制p38,IL-8表达可以部分恢复。结论:抑制NHE1可能通过促进p38磷酸化,下调促血管生成因子IL-8的表达。     

沉默DOT1L基因对急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖的影响

本研究旨在探讨DOT1L基因对人白血病THP-1细胞增殖的影响。针对DOT1L mRNA的第732-752靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性干扰载体,制备慢病毒并感染THP-1细胞,用强力霉素(Dox)诱导干扰载体表达;应用RT-PCR的方法验证干扰效率;采用改良MTT法检测干扰DOT1L基因后对THP-1细胞增殖能力的影响;用细胞集落形成实验观察干扰后细胞集落形成的能力;用流式细胞术分析细胞周期的变化。结果表明:THP-1细胞干扰后DOT1L基因的表达显著降低;DOT1L基因的表达下调抑制了细胞的增殖能力、集落形成能力并将细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:利用shRNA靶向干扰DOT1L基因的表达,可以有效抑制人急性单核细胞白血病细胞THP-1的增殖。     

EF-hand对钙调磷酸酶B同源蛋白2的生物学功能影响

目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2（CHP2）的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1（NHE1）共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法、免疫共沉淀等手段,明确CHP2结合Ca2＋的数量、部位,以及对CHP2与NHE1结合的影响;在血清饥饿条件下,观察表达EF-hand突变的CHP2（NHE1/CHP2-EF3m/4m）对细胞生存的影响。结果分别突变EF-hand结构EF3或EF4,CHP2结合Ca2＋减少;同时突变EF3和EF4,CHP2不能结合Ca2＋;免疫共沉淀实验结果显示乙二胺四乙酸（EDTA）剥夺CHP2携带的Ca2＋之后,CHP2与NHE1结合的数量明显减少;不携带Ca2＋的CHP2在细胞内与NHE1结合的数量也明显减少;在血清饥饿条件下,表达不携带Ca2＋的CHP2的细胞存活数量减少。结论 CHP2能结合2个Ca2＋,结合部位在EF3和EF4;携带Ca2＋能增强CHP2与NHE1的结合能力;在血清饥饿条件下,携带Ca2＋的CHP2能提升细胞抵抗死亡的能力。     

含笑内酯对类风湿关节炎小鼠模型治疗作用研 究!简

目的探讨含笑内酯对类风湿关节炎DBA／1小鼠模型的治疗作用。方法将40只6周龄雄性DBA／1小鼠随机分为4组：未处理的空白对照组（Nor组）、诱导发病并注射甲氨蝶呤药物的甲氨蝶呤治疗组（MTX组）、诱导发病并注射含笑内酯的实验组（MCL组）和诱导发病并注射DMSO的模型对照组（Con组）,用牛Ⅱ型胶原法诱导MTX、C0n和MCL组小鼠发病建立类风湿关节炎模型;在二次免疫注射24h后开始隔天腹腔注射给药并对小鼠体重和关节炎发病情况进行隔天观察,给药28次后停止用药,眼球取血、蛋白芯片测血清中细胞因子,处死小鼠取爪子及膝盖做组织病理学检查。结果成功构建了DBA／1小鼠类风湿关节炎模型;各组小鼠之间体重差异无统计学意义（P〉0．05）;关节炎评价显示MCL组低于Con组（P〈0．01）,高于MTX组（P〈0．01）;病理结果显示Nor组小鼠组织正常．Con组受累关节m现炎症细胞浸润、滑膜增生、炎性肉芽组织形成、坏死组织等症状,MCL组与MTX组受累关节仅出现轻于Con组的炎症细胞侵润、滑膜增生等症状;小鼠血清细胞因子检测结果共显示m6种细胞因子：C5／C5a、TIMP-1、M—CSF、sICAM-1、IFN-吖和BLC;Con组的类风湿关节炎小鼠中C5／C5a、TIMP-1和M—CSF表达量降低,经含笑内酯治疗的MCL组中这些因子均有不同程度的恢复（P〈0．01）,仅仅在MCL组中检测到BLC表达。结论含笑内酯对小鼠DBA／1类风湿关节炎具有治疗作用,C5／C5a、TIMP-1、M—CSF和BLC等因子在这-过程发挥不同的作用。     

Cariporide对宫颈癌HeLa细胞体外转移及MT1-MMP表达的影响

通过体外实验研究钠氢交换蛋白1（NHE1）特异性抑制剂Cariporide对人宫颈癌HeLa细胞体外转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用Cariporide处理HeLa细胞,采用细胞-基质粘附实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测Cariporide对HeLa细胞的粘附、迁移和侵袭能力的影响;Real-time RT-PCR、Western blot法分别检测Cariporide对HeLa细胞膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）mRNA及蛋白表达的影响。结果:细胞-基质粘附实验结果显示,与对照组相比,Cariporide处理过的HeLa细胞体外粘附率降低25%,差异具有统计学意义（P<0.05）;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,Cariporide处理后,HeLa细胞损伤愈合的速度和穿过滤膜的细胞数量均明显少于对照组;Real-time RT-PCR及Western blot结果表明Cariporide可显著降低MT1-MMP mRNA和蛋白水平的表达量（P均<0.05）。结论:Cariporide可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的体外转移能力,其作用机制可能与降低MT1-MMP的表达有关。      

抑制NHE1和p38 MAPK通路增加白血病细胞对伊马替尼的敏感性

本研究旨在探讨抑制NHE1活性和细胞内酸化能否逆转白血病细胞对伊马替尼的耐药,以及慢性髓系白血病（CML）患者细胞的BCR／ABL下游分子网络。对CML患者原代白血病细胞或K562／DOX,K562／G01耐药细胞株进行酸化处理,检测细胞内P-糖蛋白（Pgp）基因及蛋白表达,药物在细胞内蓄积。考察细胞酸化后原代白血病细胞ERK1／2、p38MAPK磷酸化水平的变化。结果表明：细胞酸化后进展期患者细胞内药物蓄积增加,对伊马替尼的敏感性增强。随着细胞内pH的降低,进展期CML患者的细胞内p38MAPK磷酸化水平呈下降趋势,ERK1／2磷酸化水平3min时升高、30min后下降。特异性p38MAPK抑制剂SB203580可与NHEl抑制剂卡立泊来德协同下调Pgp蛋白的表达。结论：抑制NHE1活性能够显著降低耐药细胞中Pgp表达,增加CML疾病进展期患者细胞中罗丹明123及阿霉素的累积,增加细胞对伊马替尼的敏感性,p38MAPK信号传导通路参与其中。     

shRNA干扰CIAPIN1基因表达促进K562细胞粒系分化

目的探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA（shRNA）真核表达载体,转染K562细胞并作为干扰组,以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率;采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变;采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1（NCF1）、血清黏蛋白1（ORM1）以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）、低氧诱导因子1α（HIF1α）mRNA水平的改变;流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变;Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比,干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制（P〈0.05）;K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段;NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高（P〈0.05）;CD11b表达升高（P〈0.01）;ERK1/2磷酸化水平升高（P〈0.05）,而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化,ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。     

小切口阑尾切除术用于急性阑尾炎患者治疗中的临床观察

目的：研究小切口阑尾切除术用于急性阑尾炎患者治疗中的临床效果。方法：选取该院2013年12月至2015年12月收治的急性阑尾炎患者48例为研究对象,将其随机分为观察与对照两组,对照组采用传统阑尾切除术进行治疗,观察组采用小切口阑尾切除术进行治疗,对比两组治疗效果。结果：观察组的术中出血量少于对照组,手术切口小于对照组,住院时间与手术时间显著短于对照组,不良反应发生率显著低于对照组。结论：小切口阑尾切除术用于急性阑尾炎患者治疗中的临床效果显著,在临床上值得广泛推广。