现代生物技术课程教学方法改革探索与实践

在现代生物技术课程教学方法改革中,进行了启发式、互动式、研讨式教学,调动学生的积极性;利用现代化信息技术和教学工具,形象生动地进行教学;紧跟学科发展前沿,丰富课堂教学内容;结合教师科研成果,运用实例引导学生学习;加强渗透式双语教学的应用,适应国际化的需求。在实施过程中,取得了较好的效果。     

DDCTMA阳离子脂质体对人喉癌细胞的毒性作用机制

目的研究DDCTMA阳离子脂质体对体外培养的人喉癌细胞系(Hep-2)细胞增殖和凋亡作用影响,进而分析其细胞毒性作用机制。方法采用MTT法检测不同质量浓度DDCTMA阳离子脂质体作用下的细胞存活率,据此选择适当质量浓度的DDCTMA阳离子脂质体分别处理Hep-2细胞,使用活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒、Hoechst 33258检测法及TUNEL原位测定法进行凋亡细胞形态学鉴定。定量检测酶caspase-3和caspase-9的酶活力变化。结果随着DDCTMA阳离子脂质体质量浓度的增大,细胞存活率逐渐下降;活细胞减少,坏死和凋亡细胞数量都增加;对细胞核的染色能观察到凋亡细胞数量呈倍数增加,呈现浓度依赖性;caspase-3和caspase-9的酶活力也有相应增高。结论 DDCTMA阳离子脂质体对Hep-2细胞的毒性作用表现是:DDCTMA阳离子脂质体质量浓度在9~48mg·L-1内主要诱导部分细胞凋亡,质量浓度超过48mg·L-1主要引起细胞坏死。     

细胞膜修饰纳米粒药物递送系统的研究进展

纳米粒是药物递送系统研究的热点之一,但仍存在体内循环时间短,易被网状内皮系统识别和清除等缺点,限制了其临床应用。近年来,天然细胞膜成分和纳米技术的结合为解决这些问题提供了新的方案。一种由纳米粒核和细胞膜壳组成的新型仿生系统极大地改善了纳米粒的性能。用细胞膜修饰的纳米粒具有独特的功能,如延长血液循环时间,提高主动靶向和增强细胞内化等功能。本文综述了细胞膜修饰纳米粒药物递送系统的最新进展及其在癌症治疗方面的应用前景。     

壳聚糖脂质体复合载体的核酸递送

目的构建一种由脂质体Lipofectamine2000、低分子质量壳聚糖、pDNA组成的三元新型复合载体用于核酸递送能力研究。方法复合物形态采用原子力显微镜轻敲模式下表征、载体与核酸结合能力采用凝胶延滞法表征,Hep-2细胞报告基因表达利用倒置荧光显微镜检测。细胞毒性研究采用3-甲基-2-噻唑硫酮(MTT)法。结果复合载体与pDNA结合能力强,可完全延滞pDNA。脂质体/壳聚糖/pDNA复合载体形态呈现出未完全压缩的球形,短棒状和不规则的聚集块。新型载体转染Hep-2细胞提高了绿色荧光蛋白报告基因的表达效率。与脂质体对照载体比较,基因转染效率提高了2～4倍,对照壳聚糖载体无明显转染效果。细胞毒性表明壳聚糖降低了脂质体的细胞毒性。结论基于脂质体的壳聚糖新型复合载体具有核酸递送潜力。     

脂质体介导RNAi的研究

本文选用阳离子脂质体Lipofectamine 2000为基因载体,使用沉默荧光素酶基因的小干扰RNA(siRNA)进行体外RNA干扰(RNAi),对阳离子脂质体转运siRNA的效率进行研究。首先以阳离子脂质体运载质粒DNA转染细胞,并以延滞实验对阳离子脂质体与siRNA的结合能力进行检测;然后通过基因载体将荧光素酶基因载入细胞,转运不同浓度的siRNA对其进行沉默,应用酶标仪对荧光素酶基因的表达进行分析,并用MTT法对转染后细胞存活率进行检测。结果表明:阳离子脂质体Lipofectamine 2000可以高效转运质粒DNA,并可与siRNA很好地结合。在较低的siRNA浓度下,对荧光素酶基因的沉默率达到较高的水平,转运siRNA转染细胞对细胞活性的影响很小,但细胞存活率随着siRNA浓度的增加而逐渐降低。通过优化实验条件,阳离子脂质体转运较低浓度的siRNA即可高效沉默目的基因。