游离猪肝细胞的大量制备

因供肝缺乏,需人工肝的支持,以桥接肝移植。人工肝脏的研究已从非生物型发展到生物型。目前研制的生物型人工肝生物成分多用来源丰富、价格低廉的猪肝细胞。为适应生物型人工肝的临床应用,本研究参照和改良Ｎａｒｕｓｅ方法［２］,大量制备了高活率的游离猪肝细胞,报道如下。材料与方法１．材料①杂种猪,雌雄不限,体重１２～１５ｋｇ。②Ⅳ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ产品）、ＭＥＭ、ＷＥＭ（Ｇｉｂｉｃｏ产品）。③氯胺酮、安定、肝素、生理盐水均为药用规格。④实验用水为三蒸水。２．试剂的制备（１）灌注液（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｂｕ…     

高浓度大鼠肝实质细胞与非实质细胞共培养的细胞功能研究

目的:高浓度肝实质细胞与非实质细胞原代共培养,研究其功能活性。方法:应用原位胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞,获得有活性的肝细胞,并应用高浓度实质和非实质肝细胞共培养的方法原代培养（共培养组）,并以微囊肝细胞培养为对照组（微囊组）进行了比较。结果:两组均维持白蛋白分泌、尿素合成功能7天;共培养组的白蛋白分泌与微囊组一样为下降趋势,共培养组从（0.870±0.102）降至（0.492±0.040）g·L-1·10-6cells·24h-1,微囊组从（1.147±0.099）降至（0.375±0.012）g·L-1·10-6cells·24h-1;共培养组的肝细胞第4天后维持在一个较稳定的水平,而微囊组肝细胞前3天明显高于共培养组,而后两天显著低于共培养组（P<0.05）。共培养组的尿素合成功能,由（4.50±0.56）降至（4.37±0.19）μmol·L-1·10-6cells·90min-1,微囊组由（5.42±0.81）降至（3.60±0.33）μmol·L-1·10-6cells·90min-1,前3天微囊组高于共培养组,后2天共培养组明显高于微囊组（P<0.05）。共培养2～7天肝细胞的对氨基苯甲酸（PABA）浓度稳定在 7.2～9.9mg/L·10-6cells·24h-1。结论:高浓度肝实质细胞与非实质细胞共培养,可使肝细胞的特异性功能维持7d,而且较微囊肝细胞更适合应用于中空纤维舱型生物人工肝。     

用微囊牛肾上腺髓质细胞移植治疗恶性肿瘤疼痛研究

用胶原酶消化法分离牛肾上腺髓质细胞,用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)法包埋牛肾上腺髓质细胞,将微囊牛肾上腺髓质细胞植入恶性肿瘤病人的珠网膜下腔,移植后不使用免疫抑制剂。结果显示在30例恶性肿瘤患者中,显效率为67％(20例),有效率为27％(8例),无效率为6％(2例),镇痛作用维持时间长达150天,除个别病人发烧和腰痛外未发现其它明显副作用。     

血红蛋白改性人工血液进展

本文阐述了人工血液的必要性,指出了以血红蛋白为基础的血液替代品的原理及所需解决的问题,从四个方面探讨了以血红蛋白为原料的人工血液的最新发展:①人工红细胞;②多聚磷酸吡哆醛修饰血红蛋白;③交联血红蛋白;④结合修饰血红蛋白。     

用新型免疫吸附剂治疗系统性红斑狼疮

本文介绍特异性DNA免疫吸附剂制备方法及用血浆灌流治疗系统性红斑狼疮。DNA免疫吸附剂是以碳化树脂为载体,将小牛胸腺DNA与蓝四唑阳离子络合后同火棉胶混合固定于载体表面而制成。6例SLE女性患者,年龄22～43岁,免疫复合物高于正常值,有不同程度贫血。其中,关节疼痛5例,水肿3例,皮肤损伤2例。用血浆灌流进行治疗。结果:5例关节疼痛全部缓解,3例水肿中2例减轻,2例皮肤损伤中1例好转。DNA抗体平均减少了37.5％。BUN平均减少40.6％。而血小板及血红蛋白变化不明显。此方法是较理想的血液净化形式,为难治性免疫性疾病提供了新治疗方法。     

中空纤维生物反应器的构建及其体外灌流实验

设计原代培养的乳猪肝细胞构建生物反应器,并观察肝细胞生长特点,进行体外灌流实验。采用改良的原位胶原酶灌流法分离乳猪肝细胞及间质细胞,在中空纤维舱的纤维外间隙中共培养,并间断旋转抑制细胞贴壁。用该生物反应器建立人工肝系统,对肝硬化病人的腹水进行体外灌流实验。结果表明,乳猪原代肝细胞平均产量为(6.29±0.37)×108细胞,肝细胞的活性为84%;在纤维外间隙内间断转动培养3 h后肝细胞聚合成球。电镜可见,多个肝细胞聚合成团生长,培养的肝细胞有功能性结合,并向组织型转化。测定中空纤维舱内连续48 h培养液尿素浓度,证实肝细胞聚合体有很好的尿素合成功能。体外灌流后,生物反应器组腹水总胆红素下降,A ST升高,与对照组相比有显著性差异。生物反应器组葡萄糖浓度下降,对照组无显著变化,两组间有显著性差异。通过本组实验,证实了我们设计的生物反应器所构成的生物型人工肝(BAL)是有效的。     

长效丙酸睾丸酮埋植剂临床研究

本文报道了使用类固醇为母体、携带丙酸睾丸酮制成弹形缓释药治疗子宫肌瘤。将５０ｍｇ药粒植入皮下，３４例病人给药３个月后用Ｂ超检查，２６例病人子宫肌瘤平均缩小了４３．１％，有８例病人子宫肌瘤无明显变化，１例做了手术，这种治疗子宫肌瘤的方法简单易为患者所接受。     

用APA微囊牛肾上腺嗜铬细胞移植治疗疼痛的研究

用胶原酶消化法分离牛肾上腺嗜铬细胞 ,用海藻酸钠 聚赖氨酸 海藻酸钠 (APA)法包埋牛肾上腺嗜铬细胞 ,将微囊牛肾上腺嗜铬细胞植入恶性肿瘤患者的蛛网膜下腔 ,移植后不使用免疫抑制剂。结果显示在 30例恶性肿瘤患者中 ,止痛的显效率为 6 7% (2 0例 ) ,有效率为 2 7% (8例 ) ,无效率为 6 % (2例 ) ,镇痛作用维持时间长达 15 0天。除个别患者发烧和腰痛外未发现其它明显副作用。     

治疗系统性红斑狼疮的新型免疫吸附剂的研究

本文报道用火棉胶将氯化四氮唑兰〔2，2′，5，5′－tetraphenyl－3，3′－（3，3’－dimethoxyl－4，4′－diphenylene）ditetrazolium chloride〕（简称Blue tetrazolium，BT）与DNA形成的络合物固定到球形碳化树脂载体上的方法，制成用于临床治疗系统性红斑狼疮的新型免疫吸附剂。