重组新城疫病毒IL29抑制人胃癌细胞系BGC的增殖与迁移

目的探讨表达IL-29的重组新城疫病毒Lo Sota株(rL-IL29)对人胃癌BGC细胞增殖及迁移的影响及其机制。方法将体外培养的人胃癌BGC细胞分为对照组、rL-IL29组和Lo Sota株新城疫病毒(NDV)组,分别经PBS、rL-IL29及NDV感染处理后进行下一步实验。蛋白质印迹检测BGC细胞中IL-29、NDV、P-ERK、MMP2、p-AKT蛋白的表达;CCK8法、划痕试验及Transwell小室法侵袭实验检测胃癌BGC细胞的增殖、迁移能力。结果IL-29蛋白仅在rL-IL29组表达,NDV蛋白在IL-29组及NDV组均稳定表达,且明显高于PBS组(P<0.05);rL-IL29感染BGC细胞后BGC细胞的增殖及迁移能力明显减弱,且rL-IL29的抑制较NDV组作用更强;BGC细胞经rL-IL29感染后P-ERK、MMP2(66 ku/72 ku)、p-AKT蛋白表达较对照组及NDV组明显减弱(P<0.05)。结论rL-IL29抑制胃癌BGC细胞的增殖、侵袭及迁移可能与ERK,AKT等信号通路相关。     

rL-RVG通过拮抗α7烟碱型乙酰胆碱受体影响胃癌细胞凋亡及增殖

目的: 探讨表达狂犬病毒糖蛋白（RVG）的重组LaSota株新城疫病毒（recombinant LaSota strain NDV expressing the rabies virus glycoprotein,rL RVG）是否通过α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7 nAChR）影响胃癌细胞HGC的增殖与凋亡。方法: 将rL RVG、新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）和PBS分别感染胃癌HGC细胞24 h后,采用蛋白质印迹法检测RVG、NDV、pro caspase 3蛋白和α7 nAChR在HGC细胞中的表达,免疫荧光检测α7 nAChR在HGC细胞中的表达,MTT检测HGC细胞的增殖情况。将HGC细胞随机分为rL RVG组、rL RVG+α7 nAChR抑制剂组、rL RVG+α7 nAChR 激动剂组,NDV组、NDV+α7 nAChR抑制剂组、NDV+α7 nAChR激动剂组,PBS组、PBS+α7 nAChR抑制剂组、PBS+α7 nAChR 激动剂组;倒置显微镜下观察各组细胞形态,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白pro caspase 3、bax、bcl 2表达水平。结果： 蛋白质印迹结果显示,病毒感染HGC细胞24 h后,NDV、pro caspase 3蛋白和α7 nAChR在rL RVG组、NDV组的表达均显著高于PBS组（P均<0.01）,RVG蛋白在rL RVG组表达显著高于NDV组和PBS组（P均<0.01）;免疫荧光显示α7 nAChR在rL RVG组中明显高于NDV组和PBS组。MTT结果显示两种病毒浓度大于10-5mmol/L 对细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05)。倒置显微镜下可见NDV+α7 nAChR抑制剂组、PBS+α7 nAChR抑制剂组HGC细胞分别较NDV组、PBS组皱缩、凋亡更明显,但rL RVG组与其α7 nAChR抑制剂组相比细胞皱缩、凋亡差异不明显;rL RVG+α7 nAChR激动剂组、NDV+α7 nAChR激动剂组、PBS+α7 nAChR激动剂组HGC细胞皱缩、凋亡分别较rL RVG组、NDV组、PBS组明显减弱。蛋白质印迹显示bcl 2、bax和pro caspase 3蛋白在rL RVG+α7 nAChR抑制剂组的相对表达量与rL RVG组无显著性差异（P均>0.05）,但在NDV+α7 nAChR抑制剂组、PBS+α7 nAChR抑制剂组的相对表达量分别较NDV组、PBS组显著上调(P均<0.01);rL RVG+α7 nAChR 激动剂组、NDV+α7 nAChR激动剂组、PBS+α7 nAChR 激动剂组的bax、pro caspase 3蛋白相对表达量分别较rL RVG组、NDV组和PBS组明显下调（P均<0.01）,bcl 2蛋白相对表达量则明显上调（P均<0.01）。 结论： rL RVG感染HGC后稳定表达,可能通过拮抗α7 nAChR途径促进胃癌细胞的凋亡和抑制其增殖。     

重组新城疫病毒rL-IL29促进人小细胞肺癌细胞系H446内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白的表达

目的探讨重组新城疫病毒rL-IL29对小细胞肺癌细胞系H446细胞内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白表达的影响。方法将H446细胞随机分为对照组、新城疫病毒(NDV)组及rL-IL29组,后2组分别转染NDV和rL-IL29。CCK-8法检测细胞活性;ELISA检测细胞上清中IL-29含量;Western blot和免疫荧光检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP的表达。并分别加入内质网应激抑制剂4-PBA预处理4 h,Western blot检测处理组及对照组GRP78、CHOP、自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ和凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3的表达。结果感染H446细胞后,随着病毒浓度的升高,细胞活力明显降低,其中rL-IL29在10-5升高明显(P0.05)。rL-IL29处理组细胞上清中IL-29含量明显升高(P0.05),rL-IL29组IL-29蛋白水平较对照组明显升高(P0.05)。NDV组、rL-IL29组中GRP78及CHOP表达明显升高(P0.05),LC3Ⅰ/Ⅱ、cleaved-caspase-3表达明显高于对照组(P0.01),且rL-IL29组明显高于NDV组(P0.05)。4-PBA预处理后,4-PBA组GRP78、CHOP、cleaved-caspase-3以及LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 rL-IL29能促进人小细胞肺癌细胞内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白的表达。     

丹参酮ⅡA磺酸钠不同给药时段对其内皮保护作用的影响

目的 研究不同给药时段对丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone ⅡA sulfonate,STS)内皮保护作用的影响.方法 将人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)分组刺激,分为5 组:DMEM 组、脂多糖(lipopolysaccha...     

丹参酮ⅡA磺酸钠对LPS引起的HUVEC功能异常和凋亡调控作用的研究

目的：研究丹参酮ⅡA磺酸钠（sodium tanshinone ⅡA sulphonate,STS）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）引起的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）功能异常和凋亡的调控作用。方法：将第6~8代处于对数生长期的HUVEC按如下分组给予处理：DMEM组、LPS（1.0 μg/mL）处理组、高浓度（50.0 μg/mL）STS预处理组、中浓度（25.0 μg/mL）STS预处理组和低浓度（12.5 μg/mL）STS预处理组。其中,各STS预处理组均先以对应浓度的STS预处理HUVEC 2 h,再加入1 μg/mL LPS进行刺激。处理24 h后,CCK?8 法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞增殖;ELISA 法检测细胞培养上清中炎症因子白介素1β（interleukin?1β,IL?1β）的蛋白浓度;Western blot法检测细胞裂解液中IL?1β和凋亡相关分子cleaved caspase?9和cleaved caspase?3的表达,以及细胞核蛋白中核因子κB?p65（nuclear factor?κB?p65,NF?κB?p65）的水平。此外,划痕实验检测HUVEC的迁移能力;光镜观察细胞形态变化;DAPI染色显示细胞核染色质的改变;Annexin V/PI双染法检测HUVEC的凋亡情况。结果：与DMEM相比,LPS处理导致HUVEC活力和迁移能力减低,但促进其增殖;IL?1β和NF?κB p65蛋白水平升高;cleaved caspase?3和cleaved caspase?9表达增高并伴有凋亡水平提高（P＜0.05）。STS预处理能够以浓度依赖的方式部分或完全逆转LPS引起的上述现象（P＜0.05）。结论：STS能够通过浓度依赖的方式抑制LPS引起的HUVEC功能异常和凋亡,对血管内皮起到保护作用。     

rL-RVG通过α7烟碱型乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制

目的探讨表达狂犬病毒疫苗糖蛋白的重组新城疫病毒(rL-RVG)通过乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞凋亡的可能机制。方法将对数增殖期的胃癌细胞系SGC随机分成rL-RVG、新城疫病毒(NDV)组、PBS组,并同时分别设α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)抑制剂(MLA)及激动剂(ACB)预处理组。病毒感染24 h后,CCK8法测定病毒对SGC增殖影响;蛋白印迹检测α7-nAChR、RVG、NDV;凋亡蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2;P-ERK、ERK的表达。免疫荧光法测定P-ERK表达。结果随着rL-RVG、NDV病毒液浓度增加,胃癌细胞活力下降,rL-RVG在10~(-2)稀释倍数时抗增殖作用显著(P0.05);病毒组凋亡相关蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2相对表达量较PBS组明显升高,且rL-RVG组较NDV组及PBS组升高明显,乙酰胆碱受体抑制剂预处理后rL-RVG组、NDV组及PBS组凋亡蛋白水平明显增高,胆碱受体激动剂预处理组凋亡蛋白表达水平明显下降(P0.05);P-ERK在病毒组表达下降,且rL-RVG组较NDV组更低,乙酰胆碱受体抑制剂、激动剂预处理后分别下降、上升(P0.05)。结论rL-RVG通过α7-nAChR诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制之一是抑制ERK通路。     

rNDV IL-29对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus IL-29,rNDV IL-29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和细胞凋亡的影响.方法:实验分为rNDV IL-29组(rNDV IL-29感染A549细胞)、NDV组(NDV感染A549细胞)和对照组(PBS).用Western blotting、RT-PCR、免疫荧光法检测IL-29蛋白及其mRNA的表达;MTT、克隆形成实验及划痕实验检测rNDV IL-29对A549细胞增殖、迁移能力的影响;流式细胞术及Western blotting检测rNDV IL-29对A549细胞凋亡的影响.结果:与NDV组和对照组相比,rNDV IL-29组细胞:(1) IL-29蛋白及其mRNA表达水平显著升高;(2)细胞增殖抑制率明显升高[(56.48±11.89)％ vs (42.18±6.18)％,P＜0.05],细胞迁移率明显下降[(5.00±4.00)％ vs (32.43 ±3.71)％、(84.57±3.96)％,均P＜0.05];(3)Caspase3表达水平明显上调[(29.67±1.53)％ vs (18.33±3.06)％、(7.00±6.08)％,均P＜0.05],Bcl-2/bax表达水平明显下调[(12.00±2.65)％ vs (42.33±5.86)％、(67.00±6.25)％,均P＜0.05],细胞凋亡增多.结论:rNDV IL-29抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移,并且促进其凋亡,提示rNDV IL-29可能成为一种很有潜力的抗癌药物.     

干扰乙酰辅酶A合成酶2对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究乙酰辅酶A合成酶2(acetyl-CoA synthase 2,ACSS2)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法:选用正常乳腺上皮MCF-10A细胞与三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白质印迹法分别检测及比较两者ACSS2 ...     

西洛他唑联合前列地尔对老年下肢动脉硬化闭塞症患者的疗效分析

目的探究西洛他唑联合前列地尔对老年下肢动脉硬化闭塞症患者动脉硬化指标与炎性因子水平的影响。方法选取江苏大学附属医院2018年10月至2020年10月收治的80例老年下肢动脉硬化闭塞症患者,将其按照随机数字表法分为两组,各40例,对照组患者接受前列地尔治疗,试验组患者在前列地尔治疗的基础上联合西洛他唑治疗,两组均治疗4周。对比两组患者治疗效果,治疗前后踝肱指数(ABI)、趾臂指数(TBI)、足背动脉血流量及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平变化,以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后试验组患者治疗总有效率显著高于对照组;与治疗前比,治疗后两组患者ABI、TBI及足背动脉血流量显著升高,且试验组较对照组显著升高;而两组患者血清TNF-α、IL-6、IL-8水平均显著降低,且试验组较对照组显著降低(均P <0.05);治疗期间两组患者不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论前列地尔联合西洛他唑应用于老年下肢动脉硬化闭塞症,可明显改善患者动脉硬化指标,临床效果显著,可减少炎性因子的释放,且安全性良好...