体外琼脂克隆培养对胎肝干细胞分化的影响

目的 探讨和建立体外扩增胚胎肝干细胞并抑制其分化的培养条件及方法.方法 胶原酶结合机械消化法制备14 d胎龄大鼠胎肝干细胞悬液.将细胞随机分为两组.一组接种至Ⅰ型胶原包被的培养板中,常规贴壁培养.另一组细胞则接种至软琼脂培养基中进行悬浮培养.倒置显微镜下观察两组细胞的生长.培养2周后收集两组细胞,电镜观察两组细胞超微结构的差异,流式细胞仪检测其CD90.1+、CD49F+等干细胞标志物表达特征,碱性磷酸酶染色检测其分化状态的差异.结果 悬浮培养的胎肝干细胞具有高核浆比、胞浆内细胞器不发达等超微结构特征,并高表达CD90.1、CD49F等干细胞标志物,碱性磷酸酶染色阳性;而常规贴壁培养的胎肝干细胞则在培养过程中显示出显著的分化特征.结论 琼脂克隆培养的胎肝干细胞较有血清贴壁培养分化程度低,在琼脂克隆培养条件下能增殖形成具有显著干细胞特征的克隆球.     

采用HPLC法检测左卡尼汀手性杂质含量

左卡尼汀的活性成分是左旋体。截止到目前,各国药典及文献资料对左卡尼汀的活性成分左旋体与手性杂质的有效分离方法均无报道,所以其含量检测数值实际是以左卡尼汀左旋体及其手性杂质的总含量计算的,其含量存在虚高的问题。本文采用HPLC法,能将左卡尼汀的活性成分左旋体与手性杂质完全分离,并对手性杂质进行准确定量。     

过表达Tg737基因对肝癌细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨Tg737基因过表达对人肝癌细胞株细胞周期和凋亡的影响及可能的机制。方法:将肝癌HepG2和MHCC97-H细胞分别用脂质体法转染pcDNA3.1-Tg737质粒(Tg737过表达组)或pcDNA3.1空载体(空载体组),或单纯脂质体孵育(脂质体组),以各自未处理的细胞为空白对照。48h后分别用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡,Hoechst33342染料法检测细胞核形态,Westernblot法检测cyclinA、Bax、Bcl-2表达。结果:与各自的空白对照组比较,Tg737过表达组HepG2和MHCC97-H细胞的S期细胞数量与细胞凋亡率均明显增加(均P0.05),且细胞核均出现明显凋亡形态学改变,同时伴随cyclinA、Bax的表达上调和Bcl-2的下调(均P0.05);空载体组、脂质体组HepG2和MHCC97-H细胞镜下未见明显的凋亡形态学变化,且上述指标差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:Tg737基因过表达可以抑制肝癌细胞周期进程、促进其凋亡,机制可能与Tg737参与调节cyclinA、Bax、Bcl-2有关的信号通路有关。     

基于肝实质优先离断的腹腔镜右半肝切除流程优化及应用

目的:探讨肝实质优先离断在腹腔镜右半肝切除术中的应用价值。方法:回顾性分析陆军军医大学第二附属医院肝胆外科2016年10月—2017年10月所完成的20例腹腔镜右半肝切除术手术患者资料,其中10例行肝实质优先离断腹腔镜右半肝切除术(观察组),即优先进行肝实质离断,而不是先行第一肝门解剖;另外10例行常规步骤先行第一肝门解剖,再进行肝实质离断(对照组)。比较两组患者的相关临床指标。结果:两组患者基本资料差异无统计学意义(均P0.05)。两组患者均顺利完成手术。与对照组比较,观察组手术时间明显缩短[(273.0±70.4)min vs.(203.0±61.3)min,P0.05],手术出血量明显减少[(470.0±427.0)mL vs.(270.0±149.4)mL,P0.05],但术中输血量无统计学差异(P0.05)。两组术后肝功能指标、术后住院时间、并发症发生率,以及术后肿瘤复发、转移发生率均无统计学差异(均P0.05)。结论:肝实质优先离断在腹腔镜右半肝切除术中是一种安全、有效的方法。     

COMMD7调控肝癌干细胞间充质-上皮转化过程抑制其侵袭转移能力

目的 探讨抑制COMMD7基因后对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)侵袭转移能力的影响及其机制.方法 使用shRNA慢病毒转染抑制COMMD7在LCSCs中的表达,粘附、Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力,鬼笔环肽染色检测细胞形态学特征,Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达.结果 抑制COMMD7基因表达可以显著降低LCSCs的侵袭迁移能力,对照组与转染组粘附相对细胞量为(1.00±0.12),(2.35±0.20),转染组粘附细胞数量显著增加(P＜0.05).对照组与转染组每视野迁移相对细胞量为(1.00 ±0.04),(0.24±0.03),每视野侵袭相对细胞量为(1.00 ±0.05),(0.24±0.04),转染组迁移侵袭细胞数明显降低(P＜0.05),同时导致细胞表现出低侵袭迁移能力的形态学变化,上述改变伴随了间充质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)相关分子E-cadherin表达上升(P＜0.05),N-cadherin、Vimentin表达下调(P＜0.05).结论 COMMD7可能通过调控MET过程抑制LCSCs的侵袭转移能力.     

药学信息分类与检索系统

药学信息分类与检索系统张敬宝，董红业沈阳药科大学基础部１１００１５张斌，罗燕，尤楠沈阳药科大学药学系１１００１５聚类分析是数理统计中研究“物以类聚”的一种多元分析方法，有着广泛的实际应用，但现实的分类问题，多伴随着模糊性．在药学信息中表现为许多事物之...     

HNF4α在胎肝干细胞促肝组织损伤修复中的作用

目的探讨肝细胞核因子(HNF)4α在胎肝干细胞促大鼠肝组织损伤修复中的作用。方法胶原酶结合机械消化法制备14 d胎龄大鼠胎肝干细胞悬液并进行体外长期培养。采用四氯化碳制作SD大鼠急性化学性肝损伤模型,造模成功后将肝损伤大鼠随机分为移植组(20只)和对照组(20只),移植组将胎肝干细胞经门静脉移植至大鼠肝脏,对照组注射等容计量的生理盐水,分别于注射前6 h,注射后1,3,5周检测大鼠血清谷氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST),并检查肝组织病理学变化,观察肝脏修复情况。采用免疫组化及Western-blot方法检测肝脏治疗前后HNF4α表达情况。结果对照组大鼠肝功能改善缓慢,ALT,AST明显高于移植组(P0.05),移植组大鼠损伤的肝组织逐渐修复,肝功能恢复正常。第5周移植组大鼠术后存活率显著高于对照组(P=0.002)。肝组织损伤后,HNF4α在肝组织的表达明显升高;随着肝组织的逐渐修复,HNF4α表达逐渐下降。western-blot及免疫组化检测亦证实此结果。结论HNF4α在肝脏损伤初期起保护作用。可能系通过促进胎肝干细胞向正常肝细胞分化增殖,并迁移至损坏的肝小叶从而替代损伤的肝实质,从而提高肝损伤后的恢复能力。     

BC047440通过ERK1/2-β-catenin信号通路调控肝癌干细胞分化的分子机制研究

目的 探讨BC047440与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)-β-连环蛋白(β-catenin)信号通路之间的关系及其对肝癌干细胞(LCSCs)分化的调控作用。方法 采用shRNA慢病毒技术抑制LCSCs中BC047440的表达,实验用LCSCs分为BC047440抑制组(sLCSCs组),空白组(LCSCs组)。在指定时间点,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测两组细胞血清清蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)表达水平,肝细胞合成代谢功能采用糖原染色实验和吲哚菁绿摄取实验检测,电镜检测两组细胞超微结构形态学变化,采用Western blot检测各组细胞中ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、β-catenin蛋白表达水平。通过激酶特异抑制剂PD98059抑制sLCSCs组中ERK1/2的活性后,观察β-catenin、ALB和AFP表达水平。结果 shRNA慢病毒处理可以抑制LCSCs组中BC047440表达;抑制BC047440表达后,LCSCs组向成熟细胞分化导致干细胞特性减弱。进一步分子机制的研究证实,shRNA抑制BC0474407后,p-ERK1...     

腹腔镜下以肝中静脉为引导的肝实质优先入路解剖性肝脏S8段切除的临床应用价值

目的 探讨腹腔镜下以肝中静脉为引导的肝实质优先入路解剖性肝脏S8段切除的临床应用价值.方法 回顾性分析2017年5月至2019年12月期间于陆军军医大学新桥医院肝胆外科行腹腔镜下以肝中静脉为引导的肝实质优先入路解剖性肝脏S8段切除的8例患者的临床资料,分析其手术时间、术中出血量、术后并发症、术后住院时间等指标.结果 所...     

肝实质优先入路的腹腔镜解剖性肝切除技术及应用

腹腔镜解剖性肝切除术难度大,风险高,存在诸多技术要点,其核心技术之一为腹腔镜下手术入路的选择。经过数十年的发展,腹腔镜解剖性肝切除入路选择已逐渐构建了一个全新的领域,手术设计决定入路选择,而各种入路的选择亦并非固定和独立存在。笔者所在团队自开展腹腔镜肝脏手术以来,经过反复实践总结出肝实质优先入路的腹腔镜肝切除技术,该技术简便快速、安全有效,一定程度上克服了既往腹腔镜解剖性肝切除操作繁杂、技术风险高难题,在腹腔镜解剖性肝切除中具有一定的临床应用价值。