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目的 比较研究外源正义和反义p53对所转染细胞系恶性表型的影响。方法 构建正义和反义p53C—DNA真核细胞表达载体pEGFP—p53(RS),pEGFP—p53(AS),载体有绿荧光蛋白基因监测基因转染和表达。经酶切图证明p53正向或反向联结。Liipofectin介导转染801D细胞(801D细胞有p53缺失和突变,蛋白表达阳性),G418筛选,建立单克隆细胞系。PCR检测外源p53和neo基因。荧光显微镜检查转染细胞绿荧光蛋白表达。免疫组化染色证明突变蛋白表达。比较了pEGFP—p53(AS)和pEGFP—p53(RS)集落形成试验,裸鼠移植试验。FCM分析细胞周期。结果 酶切图证明pEGFP—p53(RS)和pEGFP—p53(AS)的p53c—DNA(RS)分别正向和反向联结质粒pEGFP。Lipofectin介导转染细胞801D细胞,G418筛选,获耐受集落,建立单细胞克隆转染细胞系pEGFP—p53(RS)—801D,pEGFP—p53(AS)801D和pEGFP—801D。PCR检测外源p53和neo基因存在于细胞,细胞可见绿色荧光,证明外源基因存在并稳定表达。免疫组化检测pEGFP—p53(AS)—801D,突变蛋白呈阴性,母系为阳性,显示反义p53封闭突变蛋白表达。pEGFP—p53(RS)—801D和pEGFP—p53(AS)801D细胞集落形成率和裸鼠移植成瘤率均降低,pEGFP—p53(RS)-801D更低。FCM分析细胞周期延滞。结论 有p53缺失和突变的人肺癌细胞系801D体内外恶性增殖明显,在同一细胞背景下,p53缺失比p53突变对恶性增殖起更重要作用。外源野生型p53在肿瘤细胞中可重建抑癌功能,外源反义p53可封闭突变蛋白表达,阻止细胞停留于G1期。 相似文献
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目的 发现和鉴定实验室污染的支原体菌株,研究被污染细胞生物学性质的变化。材料方法 用细菌学、PCR及DNA测序方法,明确细胞培养污染的支原体菌株。丫啶橙、溴化乙啶染色细胞,荧光显微镜观察细胞形态学改变。透射电镜检查支原体在细胞内分布。集落形成检测细胞增殖、流氏细胞仪检测细胞周期。琼脂电泳检测DNA降解。结果 1.污染物DNA经支原体通用引物扩增,测序,结果用blast DNA同源比对,明确污染菌为鼠肺支原体(M.pulmonis)。2.M.pulmonis侵入污染的人肺癌细胞胞浆,有的贴近细胞核,有的吸附于核膜。3.M.pulmonis抑制多个人肺癌细胞系集落形成和诱导细胞增殖周期阻滞。4.M.pulmonis诱导G1前期细胞apoptosis峰和DNA降解。结论 M.pulmonis污染培养的人肺癌细胞系并侵入细胞内,可引起人肺癌细胞增殖的抑制和诱导调亡(apoptosis)。 相似文献
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目的观察自组方中草药对消化性溃疡的治疗效果方法消化性溃疡48例,应用自组救胃愈疡汤(由鸡角过、救必应、党参、一斗金、佛手等15味中草药组成)进行治疗,其中男37例,女21例,病程6mo~23a;年龄18岁~75岁.临床症状表现为胃脘连及胁串痛23例;隐痛夜间痛甚17,灼热疼痛及疼痛持久无规律(溃疡合并胃炎)8例,痛定于一点,痛时肢冷,额汗淋沥,痛久不止(溃疡病出血)3例,隐痛不剧,但病程长,经久不愈(迁缓顽固型)7例;对患者的各种临床症状采用救胃愈疡汤治疗、观察其效果.结果经救胃愈疡汤治疗20d,痊愈21例,占36%(临床症状消失,经X线和内镜下检查,溃疡面消失或留疤痕).好转25例,占43%(主要临床症状改善,X线和内镜下溃疡面明显缩少或变浅,溃疡组织在修复).无效2例(症状元改善,X线和内镜下溃疡面缩小不明显或无变化)结论救胃愈疡汤对消化溃疡病治疗有良好效果. 相似文献
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我州地处我国西南边陲同越南接壤,我们于1989~1990年开展小肠结肠炎耶尔森氏菌病进行调查现将结果报告如下。 材料与方法 一、试剂和主要培养基 对照用参考菌株,49种群小肠结肠炎耶氏菌诊断血清及1~16型分型噬菌体均由卫生部药品生物制品检定所提供。增菌用1/15MpH7.6PBS液;分离鉴别用SS琼脂和改良SS琼脂。 相似文献
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门诊经常见到因喷嚏、咳嗽、怒吼、擤鼻涕、打呵欠、甚至哀哭时 ,忽发腰痛的患者 ,掌握这种特殊病因的致病机理 ,并有针对性的选择治疗方法 ,往往可以取得事半功倍的效果。1 腹内压太过是其病因特点以打喷嚏为代表的诸多诱因 ,在短短的 0 .1~ 0 .5 s的时间内 ,使膈肌瞬间下降 ,腹腔内压力聚然上升 ,这时 ,因盆腔底肌群与膈肌的充分牵张 ,给腰椎以纵向拉抻力 ,同时因腹膜及其肌群与腰椎椎体之间充气牵张 ,产生使腰椎体向后推的挤压力 ,这两个力的同时作用 ,就是使腰椎间盘突出的特殊病因。从病因学上分析 ,腹内压力有别于外感及外力扭打的… 相似文献
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谢群郑文朱韩武陈柏塘李征莉 《实用预防医学》2016,23(12):1465-1467
目的 对2015年郴州市人感染布鲁氏菌疑似患者和病羊进行血清学和分子生物学检测,以明确诊断。 方法 对患者进行流行病学调查,采用血培养法对试管凝集试验检测为布鲁氏菌抗体阳性的患者和病羊血液进行荧光PCR及细菌分离培养,应用分子生物学方法和基因测序对可疑菌落进行种类鉴定。 结果 68份高危及疑似布病患者血清抗体筛查13份阳性;1 679份羊血血清抗体检测57份阳性,6株分离株经荧光PCR鉴定为羊种布鲁氏菌。 结论 2015年引起郴州市布病的主要病原类型为羊种布鲁氏菌,应采取综合措施防止布病在郴州流行。 相似文献
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