肝硬化与锰

肝硬化时,体内锰的分布和脑磁共振成像(magnetic resonance image,MRI)都会发生一定程度的改变,这有助于解释肝硬化病人出现的类似帕金森氏综合征的症状和体征,同时,也让我们警惕肝硬化与锰代谢紊乱的关系.     

应用气-液界面染毒技术研究柴油机尾气对16HBE细胞的毒性作用

[目的]应用气-液界面染毒技术探索柴油机尾气对人支气管上皮(16HBE)细胞急性毒性作用. [方法]在流速为20 mL/min,37℃的条件下,用柴油机尾气分别对生长在多孔膜上的16HBE细胞持续染毒5、10、15、20、30 min,分别使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测法、乳酸脱氢酶(LDH)释放法、中性红摄入法(NRU)检测柴油机尾气对细胞存活率的影响;对细胞存活率约50％以上的染毒组用流式细胞术检测柴油机尾气对细胞凋亡率的影响;同时对每个染毒组分别设置用滤膜过滤的洁净空气作为对照组,暴露时间和检测方法均与染毒组-致. [结果]3种存活率检测方法的结果表明,染毒组与对照组相比,柴油机尾气持续染毒15 min及更长时间以后,细胞存活率降低,差异有统计学意义(P＜ 0.05),且呈随染毒时间延长而逐渐降低的趋势.3种方法比较表明,低流速短时间柴油机尾气对16HBE细胞的损伤作用以细胞膜损伤最为显著,其次是线粒体损伤.用柴油机尾气持续染毒10、15 min,染毒组细胞早期凋亡率、晚期凋亡及坏死率较对照组均升高,差异均有统计学意义(P＜ 0.05).10、15 min染毒组的晚期凋亡及坏死细胞多于早期凋亡细胞(P＜0.05). [结论]气-液界面染毒技术可以应用于柴油机尾气等气溶胶有害物质的体外毒性研究;同时发现柴油机尾气导致的16HBE细胞急性毒性为细胞膜损伤、线粒体损伤及细胞凋亡.     

焦炉作业工人芳烃受体单核苷酸多态性及其单体型与染色体损伤的关系

目的研究芳烃受体(AHR)基因多态性与焦炉作业工人外周血淋巴细胞染色体损伤易感性的关系。方法选取89名焦炉作业工人(暴露组)和60名无职业性多环芳烃及射线暴露的工人(对照组)为研究对象。测定尿中1-羟基芘反映多环芳烃暴露内剂量,用双核淋巴细胞微核评价个体外周血淋巴细胞染色体损伤,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法分析AHR基因rs6960165及rs2282885位点多态性,利用PHASE2.1软件经Bayesian法计算单体型。用协方差统计方法分析不同基因型及单体型对与染色体损伤水平的关系。结果暴露组尿1-羟基芘水平显著高于对照组(P<0.01),暴露组外周血淋巴细胞微核率显著高于对照组(P<0.01)。在校正年龄和自然对数转换后的1-羟基芘后,暴露组AHR基因rs6960165位点多态性与微核率有关联(P=0.014),未发现对照组AHR基因rs6960165位点多态性与微核率有关联(P=0.586);未发现暴露组和对照组的AHR基因rs2282885位点多态性与微核率有关联(P=0.308和P=0.415)暴露组AHR基因不同单体型对与微核率有关联(P=0.007),未发现对照组AHR基因不同单体型对与微核率有关联(P=0.768)。结论AHR基因rs6960165位点多态性及AHR基因单体型是影响焦炉作业工人外周血淋巴细胞染色体损伤水平易感性的可能因素之一。     

应用基因重组细胞模型研究苯并[a]芘的细胞毒性和遗传损伤效应

目的 利用经基因重组构建的具有细胞色素P450 1A1(CYP1A1)代谢活性的人支气管上皮细胞(16HBE)为体外模型,研究苯并[a]芘[B(a)P]的细胞毒性和遗传效应改变.方法 应用实时定量PCR方法检测细胞的CYP1A1和微粒体环氧化物水解酶(mEH)的mRNA水平.细胞分0、1、5、10、20 μmol/L B(a)P处理组,应用胞质分裂阻滞微核细胞组学技术综合评价B(a)P的有害生物效应,其中核分裂指数、细胞凋亡率和细胞坏死率等指标评价B(a)P的细胞毒性,微核、核质桥和核芽的发生率检测B(a)P的遗传损伤效应.结果 CYP1A1和mEH在16HBE-CYP1A1细胞中有较高表达,mRNA相对含量分别是7.8×10~(-4)和0.030.B(a)P作用后,16HBE-CYP1A1细胞1、5、10、20μmol/L处理组核分裂指数分别为1.92±0.04,1.71±0.01,1.61±0.04,1.41±0.01,低于对照组(2.08±0.03);双核细胞率分别为(76.33±3.51)%、(66.33±0.58)%、(51.67±1.53)%、(39.00±1.00)%,低于对照组的(82.67±6.66)%;细胞坏死率分别为(1.93±0.42)%、(2.20±0.53)%、(8.07±0.90)%、(15.27±2.80)%,高于对照组的(0.47±0.11)%,差异均有统计学意义(F值分别为899.94、303.33、240.87,P值均<0.01).而凋亡细胞随着B(a)P作用剂量的增加出现先增高后降低的趋势,分别为(1.20±0.53)%、(2.00±0.20)%、(1.47±0.12)%、(1.20±0.00)%、(1.20±0.00)%.遗传损伤效应分析中发现,随B(a)P作用浓度的增加,核质桥发生率随之增加,分别为(4.67±2.89)‰、(7.33±1.53)‰、(10.67±2.08)‰、(11.00±1.00)‰;核芽发生率也随之增加,分别为(2.33±0.58)‰、(4.00±1.00)‰、(5.00±1.00)‰、(7.67±1.16)‰,均有剂量-效应关系(F值分别为50.23、121.09,P值均<0.01).在B(a)P低于10 μmol/L组中,微核率也随B(a)P作用浓度的增加而升高,分别为(8.33±3.21)‰、(14.67±1.15)‰,但在20 μmol/L组,微核率为(16.67±2.88)‰,低于10 μmol/L处理组[(17.67±2.08)‰].在空载质粒细胞16HBEV中,细胞毒性出现较晚,在5、10、20 μmol/L组中,微核、核质桥和核芽的发生率[分别为(6.37±2.08)‰、(9.33±1.52)‰、(9.33±3.21)‰;(4.33±1.53)‰、(6.00±2.65)‰、(5.33±1.53)‰;(2.33±0.58)‰、(3.33±1.16)‰、(3.67±1.16)‰]没有明显的组间改变.结论 B(a)P代谢活化后可导致遗传损伤效应增加,这可能与细胞的核分裂指数降低、细胞坏死率增加或细胞凋亡受抑制有关.     

摩托车尾气气-液界面暴露对人体呼吸道不同细胞存活率和细胞器的影响

目的 应用气-液界面(air-liquid interface,ALI)染毒技术,探讨摩托车尾气(motorcycle exhaust,ME)对呼吸道不同细胞的细胞器损伤和相对存活率的影响.方法 用20L Tedlar气袋收集洁净空气和ME.实验分为空白对照组、洁净空气组和ME组.空白对照组未做任何处理,洁净空气组为连...     

2,5-己二酮不同作用时间对大鼠坐骨神经P_0蛋白及血清P_0蛋白抗体水平的影响

目的探讨正己烷代谢产物2,5-己二酮不同作用时间对大鼠坐骨神经髓鞘结构蛋白P0蛋白及外周血中P0蛋白抗体水平的影响。方法选用400mg/kg2,5-己二酮每日经口灌胃染毒Wistar大鼠,观察大鼠的一般状况改变,分别于第0、1、2、3、4周取材,采用免疫组化技术观察不同染毒时间大鼠坐骨神经横断面P0蛋白表达水平,并采用酶联免疫吸附试验检测不同染毒时间,大鼠外周血中P0蛋白抗体的水平。结果随着染毒时间的延长,大鼠逐渐出现明显的中毒症状。P0蛋白在坐骨神经横断面呈不均匀分布,髓鞘较轴索明显;未染毒大鼠坐骨神经横断面P0蛋白呈较高水平表达,随着染毒时间的延长,坐骨神经横断面P0蛋白表达水平有逐渐降低的趋势。染毒0、1、2、3和4周大鼠外周血中P0蛋白抗体阳性率分别为33.3%、26.7%、46.7%、46.7%和84.6%。外周血中P0蛋白抗体的阳性率随染毒时间延长呈现明显增加的趋势(χ2=11.007,P0.05)。结论正己烷代谢产物2,5-己二酮能够破坏大鼠周围神经髓鞘,降低坐骨神经中P0蛋白的水平,提高外周血中P0蛋白抗体的水平。     

苯并(a)芘对人支气管上皮细胞端粒长度的影响

目的 体外探讨苯并(a)芘[Benzo(a)pyrene,B(a)P]对人支气管上皮细胞端粒长度的影响.方法 应用人支气管上皮细胞株16HBE,给予不同浓度的B(a)P处理,采用定量PCR方法测定细胞全基因组DNA的相对端粒长度,观察细胞全基因组DNA相对端粒长度的变化情况.以4μg/ml博来霉素(Bleomycin,...     

肝硬化对大鼠和病人血锰等6种金属含量的影响

目的探讨肝硬化对血锰(Mn)等6种金属含量的影响,为临床上阐明肝硬化所致金属元素代谢紊乱的并发症提供科学依据。方法将20只大鼠随机分为肝硬化组和正常对照组,每组10只;另观察52例肝硬化病例及44例非肝硬化对照者,采用电感偶合等离子发射光谱法测定大鼠和病人血锰(Mn)、锌(Zn)、铜(Cu)、铁(Fe)、钙(Ca)和镁(Mg)含量。结果肝硬化大鼠全血Mn、Zn、Cu、Ca的含量明显高于正常对照组(P<0.05~P<0.01),而Fe含量明显低于正常对照组(P<0.05)。肝硬化病人血Mn含量为(1.45±1.27)μmol/L,明显比非肝硬化病人的(0.36±0.18)μmol/L高(P<0.01);Zn、Fe和Mg含量分别为(74.46±17.23)(、6 507.50±1 413.03)(、1 005.83±157.50)μmol/L明显低于非肝硬化病人(P<0.01)。结论肝硬化时,大鼠和病人血Mn等6种金属的含量是受到不同程度的影响。因此,在临床上检测肝硬化病人血液上述金属的含量,可能有益于防止因肝硬化所致某些金属缺乏和(或)过多所引起的并发症,具有重要的临床毒理学意义。     

三氯乙烯药疹样皮炎患者周围血T淋巴细胞表面Fas、FasL表达研究

目的 研究三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎患者周围血T淋巴细胞表面Fas、FasL的表达,及其在TCE药疹样皮炎发病中的作用.方法 选择TCE药疹样皮炎患者12例、接触对照24例及非接触对照19例3组对象,流式细胞术进行周围血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群分析,并检测表面Fas、FasL阳性表达百分比.结果 病例组周围血CD4+、CD8+T细胞中位数(1 089.51、916.65×106个/L)明显高于接触时照组(645.75、533.91×106个/L)和非接触对照组(579.70、310.80×106个/L,P＜0.05).CD4+/CD8+细胞比值3组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).病例组CD4+T细胞表面FasL表达(47.35%)明显高于非接触对照组(33.64%,P＜0.05),但与接触对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).病例组CD8+T细胞表面Fas与FasL表达(5.42%、28.71%)明显高于接触对照组(2.53%、24.42%)和非接触对照组(2.76%、12.47%,P＜0.05或P＜0.01).接触对照组CD4+、CD8+T细胞表面FasL表达(46.81%、24.42%)显著高于非接触对照组( 33.64%、12.47%,P＜0.01);但2类细胞表面Fas表达与非接触对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TCE药疹样皮炎患者CD8+T细胞是主要的效应性T细胞,其表面Fas、FasL的高表达与TCE药疹样皮炎的发生相关.