肾康注射液对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害的研究

目的：探讨肾康注射液（SKI）对马兜铃酸（AA）导致肾小管上皮细胞损伤的影响。方法：以90％DMEM培养液加10％胎牛血清培养人肾小管上皮细胞系（HK-2）,加入不同浓度的SKI（终浓度分别为4、6、8mg／mL）和AA（终浓度为10、20、40μg／mL）培养48h。采用MTT法观察HK-2细胞活性;根据MTT法检测细胞活性的结果,选择SKI最佳干预浓度8mg／mL和AA致细胞明显凋亡浓度20μg／mL,将实验分为3组,①对照组：培养液不加马兜铃酸;②AA干预组：在培养液中加入AA（终浓度为20μg／mL）;（3）SKI治疗组：在培养液中加入AA（终浓度为20μg／mL）和SKI（终浓度为8ing／mL）。用透射电镜观察3组细胞的超微结构;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;分别采用实时定量荧光PCR及Western—blot技术检测凋亡蛋白Caspase-3mRNA及蛋白的表达情况。结果：与对照组比较,AA干预组细胞结构发生改变,治疗组大部分细胞结构基本正常,部分细胞结构改变明显。AA浓度超过10μg／mL时,HK-2细胞的活性显著抑制。分别以不同浓度4,6,8mg／mL的SKI和AA（20μg／mL）处理HK-2细胞后,则细胞活性明显增加,而且随着SKI浓度的增加其作用愈趋明显（P〈0．05）。与对照组比较,AA组凋亡细胞的比例明显增加（P〈0．05）,SKI治疗组凋亡细胞的比例也增加,但比AA组细胞凋亡的比例明显减少。AA组Caspase-3mRNA及蛋白的表达较对照组明显增高;治疗组Caspase-3mRNA及蛋白的表达较AA组降低。结论：肾康注射液通过降低凋亡蛋白Caspase-3mRNA及蛋白的表达抑制HK-2细胞的凋亡,明显提高HK-2细胞抵抗AA致细胞损伤的能力,起到保护HK-2细胞的作用。该途径可能为肾康注射液抑制HK-2细胞凋亡的机制之一。     

糖尿病大鼠肾脏热休克蛋白70的表达及普罗布考干预的研究

目的 观察糖尿病大鼠肾脏中热休克蛋白70（HSP70）的表达并观察普罗布考对HSP70表达的影响. 方法 链脲佐菌素构建糖尿病大鼠模型50只,随机分为糖尿病（DM）组、普罗布考（PT）组,另设健康对照（NC）组.RT-PCR测定各组肾组织HSP70 mRNA的表达,免疫组织化学法观察HSP70的表达情况,Western blot测定HSP70蛋白的表达水平. 结果 DM组4、8及12周肾脏中HSP70 mRNA及蛋白的表达逐渐升高.同一时间的PT组肾脏HSP70 mRNA及蛋白的表达均较DM组减少（P＜0.05）. 结论 糖尿病大鼠肾脏中HSP70的表达升高,普罗布考可降低HSP70的表达,对肾脏起保护作用.     

马兜铃酸Ⅰ-DNA加合物合成及电喷雾质谱法检测

目的建立体外合成及检测马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acid I,AAⅠ)-DNA加合物的方法。方法分别采用酶活化法和化学活化法活化AAⅠ后与脱氧腺苷酸反应以合成AAⅠ-DNA加合物,优化各种反应条件,使用液相色谱/串联质谱(LC/MS/MS)法对合成的AAⅠ-DNA加合物进行结构鉴定。结果两种方法均可制得AAⅠ-DNA加合物,质谱负离子采集模式下测得其准分子离子峰m/z621,电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)谱图提供了丰富的结构信息。结论AAⅠ活化后能与腺嘌呤形成AAⅠ-DNA加合物,LC/MS/MS技术能够快速方便准确地检测AAⅠ-DNA加合物。     

红花黄色素对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞损害的作用

目的:探讨红花黄色素对马兜铃酸(aristolochic acid,AA)导致人肾小管上皮细胞系(HK-2)损害的保护作用。方法:以90%DMEM培养液加10%小牛血清培养HK-2细胞,加入不同浓度的红花黄色素和AA(终浓度为20μg/m)培养48 h。实验分为4组:(1)对照组:培养液不加AA;(2)AA组:在培养液中加入AA;(3)红花黄色素低浓度治疗组:在培养液中加入AA和红花黄色素(终浓度为50 mg/L);(4)红花黄色素高浓度治疗组:在培养液中加入AA和红花黄色素(终浓度为100 mg/L)。采用MTT法观察HK-2细胞活性;透射电镜观察细胞的超微结构;应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率;采用实时定量荧光PCR技术检测凋亡蛋白Caspase-3 mRNA的表达情况。结果:AA组HK-2细胞的活性显著抑制;治疗组细胞活性明显增加,而且随着红花黄色素浓度的增加其作用愈趋明显。与对照组比较,AA组凋亡细胞的比例明显增加(P<0.05),红花黄色素治疗组凋亡细胞的比例也增加,但比AA组细胞凋亡的比例明显减少。AA组Caspase-3 mRNA的表达较对照组明显增高;治疗组Caspase-3 mRNA的表达较AA组降低。结论:红花黄色素可明显提高HK-2细胞抵抗AA导致的细胞损伤,保护HK-2细胞。     

阿托伐他汀治疗糖尿病肾脏病40例临床分析

目的观察阿托伐他汀治疗糖尿病肾脏病的疗效并探讨其机制。方法根据糖尿病肾脏病分期标准选取血糖控制达标的糖尿病肾脏病（临床分期Ⅲ期～Ⅳ期）患者60例,随机分成3组,各20例。I组为对照组,未使用他汀类药物;II、Ⅲ组为治疗组,分别给予阿托伐他汀20mg／d和40mg／d,共观察16周。分别检测治疗前及治疗后第6、12、16周血转化生长因子β1（TGF-β1）、超敏C反应蛋白、血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、β2微球蛋白、血肌酐、血尿酸、总胆固醇、三酰甘油、24h尿蛋白水平。结果治疗后第12、16周,Ⅱ、Ⅲ组TGF-β1、超敏C反应蛋白、血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、G2微球蛋白、血肌酐、血尿酸、总胆固醇、三酰甘油、24h尿蛋白水平较I组明显降低（P〈0．05）,II组与Ⅲ组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论阿托伐他汀可能通过调节糖尿病肾脏病的脂代谢紊乱改善糖尿病肾脏病的微炎症状态,调节TGF-β1表达而抑制细胞外基质生成的作用途径来抑制糖尿病肾脏病肾间质纤维化,从而起到延缓肾功能减退的作用。     

马兜铃酸-脱氧鸟苷酸加合物的合成及质谱分析

体外合成并应用多种质谱技术鉴定了马兜铃酸(aristolochic acid，AA)-脱氧鸟苷酸(2′-deoxyguanosine 5′-monophosphate，dGp)加合物。AA经酶活化或化学活化后与dGp反应，同时优化反应条件。应用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)以及傅里叶变换离子回旋共振质谱(FT-ICRMS)精确质量数测定和同位素模式等检测技术对合成样品进行分析。在样品中分别检测到AA-dGp加合物准分子离子峰，子离子谱图提供了加合物结构信息。AA能在体外与dGp形成AA-dGp加合物，质谱分析方法可以快速、方便、准确分析与鉴定AA-dGp加合物。     

维持性血液透析病人IL-37等炎性因子的表达

目的 观察血清白细胞介素37(IL-37)、白细胞介素2(IL-2)等炎性因子在尿毒症透析病人中的表达情况.方法 选择青岛市中心医院血液净化中心的维持性血液透析(MHD)病人63例,在血液净化治疗开始前于病人内瘘静脉端穿刺针处采血,测定MHD病人血清IL-37、IL-2、β2-微球蛋白(β2-MG)、超敏-C反应蛋白(...     

4羟基壬烯醛在糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义

目的:探讨糖尿病大鼠肾脏中4羟基壬烯醛(4-HNE)的表达情况及其作用机制。方法:链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg一次性腹腔注射构建糖尿病大鼠模型组(D组),并设空白对照组(C组),分别检测大鼠4周、8周及12周的血肌酐、尿素氮、三酰甘油、胆固醇及24 h尿蛋白定量,光镜下观察肾脏病理改变,免疫组化及Western-blot观察各组大鼠肾脏4-HNE的表达情况。结果:D组大鼠4周、8周及12周的肌酐、尿素氮、三酰甘油及胆固醇逐渐升高,并均高于同一时间点的C组,结果差异有统计学意义(P<0.05),随病程的延长D组大鼠肾脏病理改变逐渐加重,基底膜逐渐增厚,细胞外基质逐渐增多,C组病理改变不明显。免疫组化及western-blot显示D组大鼠4周、8周及12周肾组织中4-HNE的表达逐渐升高,并明显高于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠肾脏中4-HNE随着病程延长其表达量逐渐升高,提示脂质过氧化参与了糖尿病肾病的发生及进展。     

羟基酪醇对对比剂诱导的肾损伤的保护作用

目的探讨氧化应激与对比剂肾病(contrast-induced nephropathy,CIN)的关系,及羟基酪醇对CIN大鼠的干预效果。方法将84只大鼠随机分为3组:假手术组、模型组以及羟基酪醇干预组。对模型组和羟基酪醇干预组大鼠制备CIN模型:于大鼠尾静脉埋置留置针一枚,每隔15 min先后由鼠尾静脉注射吲哚美辛(10 mg/kg)、L-NAME(N-硝基-L-精氨酸甲酯)(10 mg/kg)和76%泛影葡胺(10 mg/kg);假手术组采用同样方法注射等量的吲哚美辛、L-NAME及生理盐水。羟基酪醇干预组于造模前3 d及被处死日当天给予羟基酪醇(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,假手术组及模型组给予等量的生理盐水灌胃。于造模后48 h处死大鼠,观察各组大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾脏病理改变,并采用TUNEL法检测肾细胞凋亡情况,采用ELISA法检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。结果假手术组无明显病理变化及细胞凋亡。与假手术组相比,模型组大鼠Scr、BUN、MDA表达明显升高,SOD及GSH-Px表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,羟基酪醇干预组Scr、BUN、MDA表达明显降低(P0.05),SOD及GSH-Px表达明显升高(P0.05),病理变化和细胞凋亡明显减轻,但仍重于假手术组。结论氧化应激可能参与大鼠CIN的发生发展,而羟基酪醇可能通过减轻氧化应激反应来对对比剂诱导的大鼠肾损伤发挥保护作用。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏GluT-1及TGF-β1表达的影响及其临床意义

目的观察厄贝沙坦（IBST）对糖尿病大鼠肾脏皮质葡萄糖转运蛋白-1（GluT-1）及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响,并探讨其作用机制。方法48只大鼠随机分为对照（Con）组、糖尿病（DM）组与IBST治疗组,建立糖尿病肾病（DN）模型,分别检测肾皮质GluT-1 mRNA及TGF-β1 mRNA表达水平。结果与Con组相比,DM组大鼠肾组织GluT-1 mRNA表达及TGF-β1 mRNA表达均显著上调（P〈O．01）。厄贝沙坦干预后,IBST组肾组织GluT-1及TGF-β1 mRNA表达显著低于DM组（P〈0.01）。结论厄贝沙坦对DN有保护作用,这可能与厄贝沙坦显著降低肾组织GluT-1及TGF-β1 mRNA表达有关。