LC-MS/MS测定大鼠血浆中阿托伐他汀及其活性代谢产物

目的 建立LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀及对羟基阿托伐他汀的方法,并应用于CYP3A酶诱导模型大鼠和正常大鼠体内阿托伐他汀的药动学研究。方法 采用甲基叔丁基醚-乙酸乙酯（50︰50）液液萃取法提取大鼠血浆中药物。使用XBridge C₁₈（2.1 mm×250 mm,3.5 μm）色谱柱,柱温35℃;流动相为0.1%甲酸-乙腈（40：60）,等度洗脱4.4 min,流速0.2 mL·min^-1;进样体积10 μL。质谱采用电喷雾离子（ESI）源,以正离子多反应监测（MRM）模式进行定量分析,选择m/z 559.1→440.1（阿托伐他汀）,m/z 575.3→440.2（邻羟基阿托伐他汀/对羟基阿托伐他汀）,m/z 564.3→445.3（阿托伐他汀-d₅,内标）作为检测离子对。以地塞米松80 mg·kg^-1·d^-1连续灌胃给药4 d,建立CYP3A酶诱导模型,取正常及模型大鼠给药后0,0.083,0.17,0.25,0.33,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6 h血样于肝素抗凝管中,离心收集血浆,冷冻保存直到进行测定。结果 阿托伐他汀及其2种代谢产物在0.49~500.00 ng·mL^-1内均有良好的线性关系（r²>0.99）;批内、批间精密度RSD<15%（n=6）;方法的提取回收率和基质效应均满足生物样品的检测要求;含药血浆在室温放置4,24 h、4℃放置3 d稳定。诱导组大鼠血浆中阿托伐他汀血药浓度达峰时间（T_max）提前,血药浓度-时间曲线下面积（AUC_0-t）显著低于正常组,消除速率常数K和清除率CL略高于正常组。结论 新建立的方法简便、稳定、灵敏,能够用于大鼠血浆内阿托伐他汀及其活性代谢产物的浓度测定和药动学研究。进入CYP3A酶诱导模型大鼠与正常大鼠体循环的活性药物成分差异显著。     

姜黄素对非酒精性脂肪肝小鼠代谢组学的调控研究

目的 探讨姜黄素（CUR）对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的代谢调节作用。方法 小鼠适应性饲养3 d后,随机分为3组：对照（C）组、高脂饮食模型（HFD）组、CUR （50 mg/kg）组。C组饲喂普通饲料,HFD和CUR组饲喂高脂饲料,CUR同时ig给药10周,C组和HFD组ig给予0.5% CMC-Na溶液,给药体积均为10 mL/kg。给药结束后,取血和肝脏,肝组织切片后进行HE染色和油红O染色,光学显微镜观察病理变化;采用基于气相色谱-质谱联用（GC/MS）的代谢组学方法检测血清和肝脏组织样品,数据通过Simca-P13.0及Metaboanalysis网络工具进行分析,找出代谢组变化趋势和相关差异化合物。此外,制备小鼠肝原代细胞,棕榈酸（PA）100 mmol/L诱导细胞NAFLD体外模型,观察CUR （10 μmol/L）对代谢组变化的影响。结果 油红O染色结果显示,HFD小鼠肝脏组织存在大量红染油滴,CUR组小鼠肝脏组织中的脂质油滴明显减少。HE染色分析显示,与C组比较,HFD组小鼠肝脏组织有空泡状,CUR组小鼠肝脏组织与C组比较没有明显区别。对血清样和肝组织样品的GC-MS数据进行PLS-DA分析发现C组与HFD组偏离较远,而CUR组与HFD组相比出现向C组偏移的趋势,进一步S-plot分析发现影响较大的代谢为胆固醇的合成、酮体的生成以及氨基酸代谢,细胞实验得到了类似的结果;经通路MetPA分析和代谢产物富集,血清和细胞中各组间差异化合物代谢主要集中在氨基酸代谢,肝脏中代谢差异主要集中在氨基酸代谢和部分脂质代谢通路;进一步进行差异代谢物的筛选,HFD组生糖氨基酸和生酮氨基酸较对照组均有不同程度的升高,CUR能够降低这些氨基酸的水平。结论 高脂饮食会造成小鼠三大代谢的异常,姜黄素能够一定程度上改善小鼠代谢紊乱。     

昆布-甘草合用对SD大鼠基础代谢干扰的代谢组学研究

研究昆布与甘草合煎给药与分别单煎给药对机体自身代谢的影响及差异。分别采用昆布、甘草单煎与合煎方法进行提取,通过常规生化参数测定、病理切片观察和气相质谱测定血清中内源性小分子方法研究提取物对SD大鼠肝、肾毒性以及系统代谢的影响。结果发现,昆布与甘草合煎给药较昆布单煎给药造成大鼠肾脏组织更明显的病理异常,昆布与甘草无论单煎还是合煎给药对肝脏均无明显影响,甘草单煎给药对肾脏无明显影响。昆布与甘草合煎组给药5天,引起血清中谷草转氨酶下降(单煎组没有明显变化)和总尿素氮明显升高(昆布单煎组也升高)。采用GC-MS方法对大鼠血清中内源性小分子分析发现昆布、甘草单煎与合煎提取物给药均对代谢有明显影响,且合煎给药组与昆布组对机体代谢影响相似,提示合煎提取物对机体代谢的影响可能主要来源于昆布。昆布、甘草分别单独煎煮和合煎提取物给药引起支链氨基酸、三羧酸循环中间物和糖代谢中间物(丙酮酸和乳酸)水平降低和3-羟基丁酸水平升高,昆布降低三羧酸循环中间物和糖代谢中间物能力强于甘草以及合煎组,而甘草给药组中支链氨基酸水平降低更加明显。提示合煎给药对SD大鼠代谢的影响与甘草和昆布均有关。昆布单煎及昆布-甘草合煎提取物连续给药均可造成肾脏损害,合煎给药较昆布单煎给药造成大鼠肾脏组织更明显的病理异常,说明一定剂量范围内甘草可加重昆布的肾脏毒性作用,是中药"相反"配伍禁忌的特征表现之一。