基因组消减杂交技术筛选肾透明细胞癌转移相关甲基化基因

目的:筛选能够早期诊断和预测肾透明细胞癌转移相关基因的甲基化生物标志.方法:应用本室从临床新鲜组织标本体外培养建立的低转移性和高转移性肾透明细胞癌细胞株,病理学鉴定后提取基因组DNA,应用3轮NotⅠ基因组消减杂交的方法富集差异甲基化序列,差异序列连接载体,转化宿主菌和α筛选后,选取40个序列进行测序,应用生物信息学分析确定启动子CpG岛甲基化序列,并对未知基因功能进行预测.结果:DNA测序后获得了27个单一克隆在高转移和低转移性肾透明细胞癌基因组中存在甲基化差异;其中5个序列具有CpG岛,其中2个对应于基因MYADM和LOC646024的启动子区.MYADM与血细胞成熟、干细胞再生有关;而LOC646024与NK细胞抗肿瘤相关的UL16结合蛋白1有85%的相似度.结论:本研究从不同转移能力的中国人肾透明细胞癌基因组中获得多种转移相关性的新甲基化序列,发现MYADM和LOC646024候选基因与肾癌转移相关.     

金黄地鼠和大鼠高血脂模型的应用研究

目的:通过比较辛伐他汀在Wistar大鼠与金黄地鼠两种高血脂模型中的作用,分析两种高血脂模型的合理应用。方法:取Wistar大鼠和金黄地鼠各30只,大鼠体重200~230 g,金黄地鼠体重100~130 g,各随机分成空白对照组、模型对照组以及辛伐他汀组各10只。确认模型建立成功后,两给药组分别给予辛伐他汀10 mg/(kg.d),并于给药第14、28天测定血清TC和LDL-C。分析辛伐他汀在两种动物高血脂模型中的作用。结果:辛伐他汀能抑制Wistar大鼠血脂升高的趋势和降低高血脂症金黄地鼠的血脂水平。Wistar大鼠对辛伐他汀的降脂作用较金黄地鼠更为敏感。结论:Wistar大鼠高血脂模型对辛伐他汀的降脂作用更为敏感,作为某些降血脂药物如他汀类活性筛选动物模型具有其优势。而金黄地鼠胆固醇的合成代谢与人类更为接近,其高血脂模型更有利于进行某些降血脂新药的临床前评价。     

前列腺癌组织中谷胱甘肽S-转移酶P1基因启动子区域甲基化序列分析

目的:研究前列腺癌(prostate carcinoma,PCa)组织中谷胱甘肽S-转移酶P1 (glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因启动子区域CpG岛甲基化状态,探索前列腺癌早期诊断的检测方法.方法:采用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nest methylation-specific PCR,NMSP)和基因克隆测序的方法检测31例前列腺癌组织、18例前列腺增生 (benign prostatic hyperplasia,BPH) 组织和3例正常前列腺(normal prostate,NP)组织中GSTP1基因启动子区域CpG岛的甲基化状态.结果:NMSP结果显示在PCa、BPH以及NP组中甲基化阳性率分别为83%、0%和0%;测序结果中PCa与BPH、NP组CG位点甲基化发生率分别为96%、34%和37%(P<0.01),BPH和NP组无统计学差异(P>0.05).联合NMSP筛查前列腺癌明显优于单纯前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)检测.结论:在前列腺癌组织中GSTP1基因启动子区域CpG岛呈现超甲基化的状态,应用NMSP方法对GSTP1基因进行甲基化检测具有高灵敏度和高特异性的特点,这有望成为新的前列腺癌早期筛选和诊断的检测方法.