西洋参cDNA文库构建及表达序列标签(EST)分析

为研究西洋参根的基因表达谱和挖掘其功能基因， 采用表达序列标签(EST)技术首次建立了四年生西洋参根的EST文库。通过BLAST与Gene Ontology分析获得与人参皂苷生物合成相关、 编码P450和糖基转移酶等的基因序列11个， 与生长素调节生长发育相关、 编码生长素响应因子4和生长素调节蛋白等的基因6个， 与水分胁迫相关、 编码蛋白dehydrin和DC2.15 like蛋白等的基因7个， 与编码抗氧化酶如peroxidase和catalase相关的基因6个。另外， 从西洋参根的EST文库获得抗病基因12个， 分别编码转录因子WRKY家族蛋白和ribonuclease蛋白家族， 62个EST是其他物种尚未报道的新基因。可见， EST技术作为功能基因组研究的重要手段可在西洋参功能基因的开发与研究中发挥重要作用， 这些基因的发现为进一步克隆基因全长、 研究基因功能、 改良西洋参品质、 阐明西洋参生长缓慢的分子机制等方面奠定了基础。     

影响电转化效率的几个因素探讨

目的：探讨大规模DNA测序技术平台中影响电转化效率的几个因素。方法：电转化法测定经稀释或乙醇沉淀处理后连接反应混合物的转化效率。结果：电转化电压在2．1—2．5kV之间可获得高转化效率；乙醇沉淀法虽能降低盐浓度，但同时使微量质粒DNA丢失，不能提高电转化效率；稀释法能提高转化效率5倍左右；连接反应物转化时，感受态细胞悬浮于无菌去离子水中的转化效率比悬浮于10％甘油无菌去离子水中的高。结论：降低连接反应混合物的盐浓度能有效提高电转化效率，在大规模DNA测序技术平台中，急需研究开发一种纯化回收微量质粒DNA的简单而有效的方法。