血液中炎症和脂质相关检测指标对非小细胞肺癌诊断价值的研究

摘 要：［目的］ 研究血液中炎症因子和脂质分子对非小细胞肺癌（NSCLC）诊断的价值。［方法］ 将965例NSCLC患者和464名健康对照随机分成训练集和验证集两组,检测现有肿瘤标志物CEA、NSE、SCC及血小板（PLT）、中性粒细胞与单核细胞比例（NMR）、血红蛋白（HGB）、白蛋白（ALB）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL）和甘油三酯（TG）等炎症因子和脂质分子。使用受试者工作曲线（ROC）分析单个分子的诊断效果,并使用逻辑二项回归方程在训练集中建立指标组合诊断模型,并在验证集中验证模型效果。［结果］ 与健康对照组相比,NSCLC患者的PLT、NMR和TG水平明显升高,HGB、ALB和HDL水平显著降低（P<0.001）。联合ALB、NMR、TG、NSE和SCC建立的模型对于NSCLC的诊断更有效：在训练集和验证集中的曲线下面积（AUC）分别为0.910和0.887,灵敏度分别为83.44%和76.76%,特异性为88.26%和86.23%。［结论］ PLT、NMR、HGB、ALB、HDL和TG在非小细胞肺癌患者与健康对照组间的水平有明显差异,其中ALB、NMR、TG、NSE和SCC联合使用可提高现有肿瘤标志物的诊断效率。     

HPLC法测定救心丸中蟾酥的含量

目的：建立救心丸的中蟾酥的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法对蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量进行了含量测定。结果用高效液相色谱法对华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量进行了含量测定,华蟾酥毒基进样量在0．40832～2．04160wg之间有良好的线性关系;脂蟾毒配基在0．4204～2．1020（μg）之间有良好的线性关系;华蟾酥毒基平均回收率为98．3％,RSD=1．2％;脂蟾毒配基平均回收率为98．6％,RSD=1．1％。结论：方法专属性强,重现性好,回收率良好,可有效控制救心丸的产品质量。     

止泻保童颗粒的薄层鉴别研究

目的建立止泻保童颗粒的薄层鉴别。方法采用薄层色谱法对其中吴茱萸、广藿香、砂仁的进行了鉴别。结果薄层色谱检出止泻保童颗粒中吴茱萸、广藿香、乙酸龙脑酯。薄层色谱斑点清晰,均能有效提供吴茱萸、广藿香、砂仁的。结论建立三味药材薄层鉴别方法简便、重现,专属性强,可有效控制止泻保童颗粒的质量。     

构建一种新型穿膜活性hMsrA的酵母表达体系

【目的】 当机体代谢生成的活性氧簇超过了抗氧化系统的清除能力,可引起氧化应激而与心血管疾病、炎症、肿瘤等发生密切相关。甲硫氨酸亚砜还原酶A (methionine sulfoxide reductase A, MsrA)能够特异还原被氧化的甲硫氨酸, 是细胞内一道重要的蛋白抗氧化防御屏障。导师课题组曾构建大肠杆菌表达系统并获得人源性MsrA(hMsrA),证实其在体外的抗氧化作用。本课题试图利用酵母表达体系表达一种具有细胞穿膜活性的分泌型Pep-1-hMsrA,为进一步研究 MsrA 对细胞的抗氧化保护机制奠定基础。 【方法】 利用基因克隆技术,合成含有细胞穿膜肽的pUC19/pep-1载体,双酶切将Pep-1序列连接到pET28a/hMsrA质粒上,构建pUC19/pep-1-hMsrA,再双酶切亚克隆到酵母表达载体获得pPICZ9k/pep-1-hMsrA重组质粒。经线性化的质粒电转化导入毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选、PCR鉴定拷贝数,构建新的hMsrA酵母表达体系。经甲醇(0.5%V/V)诱导表达,SDS-PAGE鉴定发酵液中Pep-1-hMsrA融合蛋白的产量,利用Ni-NTA Agarose亲和层析分离纯化目的蛋白,蛋白质印迹法鉴定融合蛋白的细胞穿膜效率,利用特异荧光底物鉴定融合蛋白的催化活性。 【结果】 成功构建pPIC9k/Pep-1-hMsrA重组质粒,并筛选出17株表达Pep-1-hMsrA的GS115工程株。诱导表达并纯化的目的蛋白产量约为30~40 mg/L,SDS-PAGE显示MW为约50 kD的单一条带,糖染色表明目的蛋白糖基化。蛋白质印迹法鉴定纯化蛋白有免疫原性,并具有特异还原活性。 【结论】 建立了Pep-1-hMsrA重组蛋白的酵母表达体系,纯化的Pep-1-hMsrA存在高度糖基化可能影响其催化活性,有待进一步研究此MsrA融入蛋白的结构与功能。     

复方丹参片的HPLC指纹图谱研究

目的:采用高效液相色谱(HPLC)对复方丹参片进行指纹图谱研究,以对其进行质量控制.方法:采用HPLC梯度洗脱技术进行分离分析,色谱柱:大连依利特Hypersil BDs C18柱(250mm×4.6 mm,5 μm),流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液作梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长为275 nm.结果:标示出20个共有峰.结论:该法操作简便,精密度、稳定性和重复性良好,为复方丹参片的质量控制提供了方法.