眼镜蛇神经毒素分离纯化及其经大鼠直肠给药吸收的实验研究

目的 利用色谱技术从眼镜蛇粗毒中分离纯化神经毒素,探索神经毒素经大鼠直肠途径给药后的吸收情况和镇痛活性。方法 通过CM Sepharose Fast Flow阳离子交换色谱和Sephadex G-50凝胶过滤色谱两步法分离纯化神经毒素。采用免疫组织化学技术观察神经毒素在大鼠直肠组织中的分布。利用Shotgun质谱技术和数据库检测大鼠血浆神经毒素片段。利用HE染色观察神经毒素对大鼠直肠组织结构的影响。利用醋酸扭体法测定神经毒素直肠给药后镇痛活性。结果 通过色谱分离纯化得到电泳纯的神经毒素。神经毒素直肠给药3 h后直肠黏膜组织内神经毒素分布明显,阳性面积比率、平均光密度值、H-SCORE值与对照组相比差异明显(P<0.01)。质谱检测到大鼠血浆中神经毒素有关片段。HE染色表明神经毒素对大鼠直肠组织没有损伤,组织结构无明显病理变化。醋酸扭体法测定小鼠直肠给药神经毒素3 h后扭体抑制率达50%,提示具有镇痛活性。结论 眼镜蛇神经毒素可以通过直肠吸收入血并且发挥镇痛作用,为后续研究眼镜蛇神经毒素直肠给药制剂提供实验依据。     

细胞周期蛋白依赖性激酶4对肝癌细胞生物学行为的影响

通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库、基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)和体外细胞实验，研究了细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4, CDK4)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的临床预后价值及其对HCC细胞系恶性生物学行为的影响。从TCGA数据库中下载371例HCC肿瘤样本、50例非肿瘤样本，GEO数据库中下载225例肿瘤样本和220例非肿瘤样本的CDK4 mRNA表达量及临床生存数据，采用Kaplan-Meier法分析CDK4表达量与HCC临床预后的关系。采用siRNA技术抑制HCC细胞中CDK4的表达，通过qPCR和Western blotting检测CDK4的表达抑制效果；体外细胞实验检测沉默CDK4对HCC细胞系增殖、侵袭、转移和细胞凋亡、细胞周期等恶性生物学行为的影响。TCGA和GEO(GSE14520)数据分析结果显示，在HCC组织中CDK4表达量显著高于非肿瘤组织(均P<0.01),并且高表达...