2型糖尿病患者血浆血小板活化因子和血清可溶性细胞间粘附分子-1测定的临床意义

目的　研究 2型糖尿病患者血浆血小板活化因子 (PAF)和血清可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1)水平的变化及其临床意义。方法　采用ELISA法和生物学方法分别测定 5 5例 2型糖尿病患者 (其中糖尿病并发冠心病患者 2 4例 ,糖尿病未并发冠心病患者 31例 )和 32名健康人 (对照组 )血浆PAF和血清sICM 1水平。结果　糖尿病组PAF和sICAM 1水平与对照组PAF和sICAM 1相比均显著升高 (P <0 0 1) ;糖尿病并发冠心病组PAF和sICAM 1水平均显著高于糖尿病未并发冠心病组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;糖尿病患者PAF与sICAM 1水平呈正相关 (r=0 .6 37,P <0 0 1)。结论　血浆PAF和血清sICAM 1在糖尿病及其并发症的发生、发展中起作用 ,其测定可能有助于糖尿病及其并发症的早期诊断和病情的监测。     

GDNF家族成员artemin在大鼠视网膜神经节细胞中的表达及其功能

目的观察胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）家族成员artemin在正常大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）中的分布、表达及其功能。方法体外培养出生1～3d SD乳鼠的视网膜神经上皮细胞,免疫荧光染色检测RGCs中artemin的定位及表达,实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）对RGCs中artemin进行定量检测。并用40mmol／L葡萄糖处理细胞12h后,再进行上述检测,观察高糖对于RGCs中artemin表达的影响。结果免疫荧光的结果证实了培养的RGCs出现Thy1．1抗体阳性的红色荧光,且多重荧光标记显示RGCs同时存在显示绿色荧光的artelnin抗体和红色荧光的Thy1．1抗体,表明artemin在RGCs中有分布。正常对照组中Thy1．1抗体阳性的细胞为（442±9）个／高倍视野,而40mmol／L高糖培养组中为（263±7）个／高倍视野,差异有统计学意义（P〈0．05）。Real—time PCR对大鼠RGCs中artemin的mRNA水平进行定量分析,40mmol／L葡萄糖处理视网膜神经细胞12h后,artemin在视网膜神经细胞及RGCs的表达明显下降（P〈0．05）。结论研究发现在原代培养的大鼠视网膜神经细胞及RGCs巾均有artemin的表达,并且在高糖作用下表达下降,为进一步研究artemin对受损RGCs的保护作用提供了思路。     

流体力学方法转染IκBαSR对人肝癌裸鼠原位移植瘤的抑制

目的:使用流体力学方法向人肝癌裸鼠原位移植瘤转染含突变型IκBα的重组逆转录病毒质粒pBABE-puro-IκBα super repressor(pBABE-puro-IκBαSR),观察其对移植瘤生长的作用及其相关机制?方法:使用人肝癌细胞株MHCC97-H?MHCC97-L,建立裸鼠人肝癌原位移植瘤模型,将荷瘤鼠分为MHCC97-H组(对照组)?MHCC97-H+IκBαSR组(转染组)?MHCC97-L组(对照组)和MHCC97-L+IκBαSR组(转染组),1周后,使用流体力学方法通过尾静脉向对照组注射pBABE-puro空载体质粒,向转染组注射pBABE-puro-IκBαSR质粒?每周1次,共3次?观察荷瘤鼠的生存率,检测原位移植瘤块的大小?重量?以及转移瘤数目,使用全自动生化检测仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)?天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平?采用免疫组化SP法分析核因子(NF)-κB p65蛋白表达,使用Western blot检测总蛋白中IκBα蛋白含量?结果:pBABE-puro-IκBαSR质粒显著提高荷瘤小鼠的生存率,转染组肿瘤的体积?重量显著小于对照组,抑瘤率分别为29.3%和33.0%(均P < 0.05);转染组荷瘤小鼠ALT和AST显著低于对照组(均P < 0.05);NF-κB p65在对照组胞浆中及在细胞核中均呈强阳性表达,在转染组胞浆中呈浅棕色,为弱阳性表达,胞核中极少或没有阳性表达,差异具有统计学意义(P < 0.01)?Western blot结果显示,转染组IκBα表达水平高于对照组(P < 0.05)?结论:通过流体力学方法向人肝癌原位移植瘤转染突变型IκBαSR质粒,可以抑制移植瘤的生长?其机制可能是IκBαSR抑制了NF-κB的活化?     

免疫散射比浊法测定可溶性循环免疫复合物组分

已经发现有许多疾病的发病机制与可溶性免疫复合物(circulatingimmunecomplexes,CIC)及其组分有关,如感染性心内膜炎,心肌炎,以及心肌梗死等疾病时CIC浓度都有显著性升高[1 2 ] 。本实验旨在建立一种测定CIC组分的方法,以期在临床上开展应用。1　材料和方法1.1　标本来源　体检     

IL-1α及ERα在HBV相关肝细胞肝癌中性别差异性的表达

目的 研究白细胞介素(IL) 1α在人类肝细胞肝癌(HCC)发生中的调节作用.方法 收集80例男性和36例女性患者乙型肝炎病毒(HBV)相关的HCC组织、相应的癌旁组织以及正常组织标本.用实时荧光定量PCR方法检测IL-1α、雌激素受体(ER)α、IL-6和MyD88的表达.同时检测二乙基亚硝胺(DEN)诱导的小鼠肝癌模型中IL-1α和IL-6的动态表达水平.结果 与正常组织比较,IL-1α在男性癌旁组织中高表达,ERα在男性HCC患者的肿瘤和癌旁组织中都有明显的减少.并且在男性的癌旁组织中,IL-1α的增加和ERα表达的减少之间存在线性相关(r=-0.61,P ＜0.01).在DEN诱导的小鼠肝癌模型中,IL-1α在新生肿瘤中高表达,并随着HCC的发生发展而逐渐减少.结论 IL-1α是男性HCC发生发展过程中的一个关键因素,可能是HCC诊断和预测复发的一个有价值的指标.     

实时定量PCR检测骨髓间质干细胞及肿瘤细胞BMI-1基因

目的　建立BMI- 1基因(theBcell specificsmoloneymurineLeukemiaVirusintegrationsite 1)表达的实时荧光定量PCR,利用该方法在基因转录水平上研究BMI- 1在间质干细胞 (MSCs)及肿瘤细胞中的表达水平。方法　通过RT- PCR,T- A克隆,real timePCR等方法精确测定并比较BMI 1基因在胚胎MSCs、成人MSCs、A549(人肺腺癌细胞株)、SW 480(人结肠腺癌细胞株)、U937(人髓系白血病细胞株)、健康人外周血淋巴细胞以及白血病细胞中表达水平。结果　测定绘制BMI 1基因的标准曲线(相关系数r=0. 998),胚胎MSCs中BMI- 1的表达水平高于成人MSCs,慢性粒细胞白血病(CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中BMI- 1的表达量分别高于急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病,U937和A549中的表达量高于SW 480,健康人外周血淋巴细胞中BMI 1的表达明显低于慢性髓系白血病(P<0. 01)。结论　定量测定BMI -1的real- timePCR方法较稳定、准确。BMI- 1基因可以作为某些肿瘤特别是白血病治疗的靶点,其表达水平可作为判断肿瘤恶性程度的参考指标。     

骨髓间质干细胞与肿瘤细胞中FN1、NME2、TIMP3基因表达检测

目的探讨纤维连接蛋白1(FN1)、肿瘤转移抑制基因2(NME2)、组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)基因在胎儿骨髓间质干细胞(FMSCs)、成人骨髓间质干细胞(AMSCs)、F6、SGC及白血病细胞中的差异表达,寻找肿瘤和白血病的分子生物学特征。方法分别提取FMSCs、AMSCs、F6、SGC及白血病细胞的总RNA,逆转录cDNA,以cDNA为模板用PCR和实时PCR技术分别测定FN1、NME2、TIMP3基因表达水平。结果AMSCs组FN1、NME2、TIMP3基因表达水平均高于FMSCs、F6、SGC组(P<0.001);F6细胞以及白血病细胞中未能检出TIMP3基因的表达。结论FN1、NME2、TIMP3基因的下调以及TIMP3基因的缺如,可能是FMSCs突变为F6肿瘤细胞的分子特征之一;TIMP3基因的下调可能是肿瘤细胞的一种分子标志。     

肝细胞肝癌中MTA1基因的表达及其与术后患者生存率及肿瘤复发率相关性研究

目的:检测人类肝细胞肝癌(HCC)中转移相关基因1(MTA1)表达的水平,研究该基因是否与肝癌肝切除术后患者的生存率及肿瘤复发相关,是否可以作为判断预后的指标?方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和免疫组织化学(IHC)的方法以人正常肝组织为对照,分别检测肝癌切除术后所得的肿瘤组织及相应的癌旁组织中MTA1的表达水平,通过Kaplan-Meier曲线研究不同MTA1表达水平与HCC患者生存率及复发率之间的关系?结果:MTA1在肝癌组织及癌旁肝硬化组织中的转录表达明显高于正常组织(P < 0.01),同时,MTA1蛋白在肝癌组织及癌旁肝硬化组织中的表达也明显高于正常组织(P < 0.01)?通过Kaplan-Meier曲线及Log-rank检验证明MTA1能够影响肿瘤的复发及患者的生存期?结论:MTA1可以作为判断肝癌肝切除术后肿瘤复发及患者生存率预测的指标?     

稳定转染ShRNA-TRAP对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响

目的探讨稳定转染靶向端粒酶调节相关基因TRAP的小发夹RNA对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建特异性作用于TRAPmRNA的小发夹RNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选的阳性克隆细胞继续压力培养3个月,采用RT-PCR法检测TRAPmRNA的表达,MTT法检测细胞生长,同时检测细胞凋亡、hTERTmRNA、端粒酶活性。结果稳定转染ShRNA-TRAP后,SGC-7901细胞的TRAPmRNA表达明显下降,hTERTmRNA和端粒酶活性降低;细胞增殖能力降低,细胞凋亡率增加。结论ShRNA-TRAP能长效的抑制TRAPmRNA的表达,下调hTERTmRNA转录及端粒酶活性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,可作为抑制端粒酶的肿瘤基因治疗策略的补充。